Способ получения низина Советский патент 1981 года по МПК C12D9/22 

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно производству низина, используемого в пищевой прЬмышленности.

Известен способ пол иения Низина путем выращивания продуцента в питательной среде на основе молочной сыворотки с последующей экстракцией целевого продукта из микробных клеток, отделением экстракта, его концентрированием, высаливанием, фильтрацией и высушиванием 1.

Однако препарат, полученный известным способом, нестабилен при хранении.

Цель изобретения - стабилизация активности низина в процессе хране-г ния.

Это достигается тем, что продуцен выращивают на среде, содержащей молочную сыворотку и экстракт кормовых дрожжей, выращенных на растительных отходах, очищенную культуральную жидкость концентрируют с сорбиталем С .20, фильтрацию осуществляют через фильтр-перлит, полученную пасту ни- . зин-перлит растворяют в 0,02 н.растворе НСЙ , затемпроводят повторную фильтрацию и концентрат высушивают в присутствии хлористого натрия напылением на казеинат натрия при их соотношении 1-2: 2,3-1,3.

Кроме того, выращивание ведут при рН 6,8-7,0...

А с целью утилизации отходов фер- ментации, осадок после отделения культуральной жидкости подвергают гидролизу пектофоэтидином П10Х или амилоркзином и вводят- в состав пита0тельной среды в качестве источника азота при повторной ферментации.

Способ осуществляют следующим образом.

Приготавливают экстракт кормовых

5 дрожжей. Для этого 250 г сухих кормовых дрожжей заливают 2,5 л теплой водопроводной воды, настаивают 2 ч, кипятят на с.лабом огне в течение 15 мин, фильтруют и стерилизуют в автоклаве

0 при О-,7 атм 20 мин. Добавляют в среду 18-20% экстракта, до содержания в среде 60-70 мг/% аминного азота.

Гидролизат отходов готовят следую:щим образом.

5

Отходы (биомасса, молочные белки , с перлитом) получают фильтрацией через перлит культуральной жидкости предыдущей .ферментации, выход с 20 л составляет 500-600 г. Отходы разбав0ляют водопроводной водой в соотношеНИИ 1:5, тщательно перемешивают до однородной массы и подогре;в1айтдо , получаемый рН 2,5-3,0 ср этветствует оптимуму действия пектофоэтиДина П10Х; в случав амилориэина оптимум рН 4,5-7,0. Ферментдобавляют . в количестве 0,20-0,25% к гидролизуемому объёму (фёрмён:гы 1 ёй§1рительно растворяют в небольшом объёме воды). Гидролизпроводят в течение 24-30 ч при с антисептиком хлороформом - «л 5 мл/л. По окончании гидролиза смесь кипятят 20-30 мин до исчезновения запаха хлороформа; твердую фазу удаляют фильтрацией или центрифугированием; гидролизат стерёлиЗуют при 0,7 атм 20 мин. Добавляют в среду 10-12% 1$ гидролизата до содержания Ь среде ЬО-70 мг/% аминного азота.

П р и мёр 1. К 18 л мЬЛочной сыроворотки добавляют 4л (20%) ёкстракта кормовьк дрожжей, полученного 20

описанным способом. Среду стерилизуют при 20 мин, охлаждают до 28-30 С, доводят рН до 6,8-7,0, за севают 3-Ь% инокулята 18-20 часового возрас.та низинообразующего штамма 55 StrvBactis. Культивируют при 28-30С с постоянно автоматически регулируе, мой кислотностью среды IB пределах рН tj,8-7,0 введением 40% щелочи (NapH i или КОН). Ферментации закайчйвают в момент замедления сдвига кислотности, автоматически регйстрируемого прибо-; -

ром. Длительность ферментации 12-1бч.. Активность культуральной жидкости, достигает 4-6 тысяч ед/мл, или 100-150 МКС/мл.35

Начиная до второй ферментации пи:татёльнрй с рёд6йслужив молоч воротка с 10-12% гидролизата отходов (от 1-й и кажйой последующей ферментации) , полученного указанным спосо- 40 бом. Культуральную жидкость 1/2 и всех последующих ферментации подвергают переработке по операциям. Так Культуральную жидкость, содержащую 100 мкг/мл низина (общая активность .. 2.10 мкг) закисляют 18% НСР до рН 2,2-2,5 и прогревают в течение 3-5 мин до 95-100 0, охлаждают до . и фильтруют через перлит. ТверЙ фазу (отходы) направляют на гид «. ролиз. Объем фильтрата 20 л, актив- . ность 97 мкг/мл, (общая активность . ,. J 1,94-10 мкг) , вь1ход 97%. Полученный фильтрат с активностью 97 мкг/мл подвергают ,вспениванию при рН 4,0-4,5 с сорбиталем С-20 0,03%. Объем пен-

ного продукта 2л, активность 920,1 мкг/мл, общая айтив1нрсфь 1,84-10 мкг выходактивности в пену от фильтрата пенного п родукта низйй йШали- 0 вают сухой Nace (25%), рН 2,2-2,5.Высоденный антибиотик подвергают вакуум-фильтрации через перлит, ОтдеrtiesHiftyio пасту низ ий-1 ё рййг1 гШ18

ряют в 0,02 н.. растворе ЙСв, и снова jj

l i ii 707320

подвергают вакуум-фильтрации и промывке. Объём полученного жидкого концентрата 400 мл, активность 4425 мкг/мл, общая активность 1,77 .«10 мкг, выход от пены 96% или.90,7% от фильтрата, содержание сухих веществ 3%. : .

П р и м ер 2. к 18 д молочной дЫйорЬтки добавляют. 2,1 л ферментивного гидролизата отходов, полученных указанным способом, среду стерилизую охлаждают до 28-30с, рН доводят до 6,8-7,0 и засевают 3-5% инокулята 18-20 часового возраста Str. gactis.

Культивируют при пострянной авхонатически регулируемой кислотности среды в пределах 6, 8-.7,0 путем введения 40% щелочи (NaOH или КОН). Ферментацию заканчивают в момент замедления сдвига кислотности, автоматически ;шме 1аемрго прибором. ДлиТельноЬть ферментации 12-16 ч. Активность к. ж. 150 мкг , общая активность 3 10°. мкг. После фильтрации через фильтро-перлит и промывки осад1 :а вЬдой с рН 2,3 объем фильтрата равен 20 л с активностью 145 мкг. . общая активность фильтрата 2,9 , выход активности от культурной жидкости 97%. Одноступенчатым .вспениванием получают 2 л пенного продукта с l40 мкг -J/wn активностью; общая акЖвнбсть Пены 2,8010 мкг я: После высаливания сухим NaCf проводят фильтрацию через перлит; раство. ряют и фильтруют срезанную пасТу низина с перлитом, получаютгобъем концентрата Кл в количестве 400 мл с активностью 2,78-10 мкг, , что составляет 96% от фильтрата. Содержание суХих.веществ 2,5%. Учитываем потери привысушивании- (8-10%), т.е, 2,78-10 - р,28-.10 2,.

Для получения количества порошка 2,5010 :20 (стандартная активность по ТУ) 125 г должны получить, из них 10 г падает на сухой вес (2,5%) 125 г - ГО t- 115 г. Общего, наполнителя до/1жнр быть задано 115 г, т.е 57,2 г NaCe и столькоже казеината натрия (115:2 57,2), NaC добавляютв 400 мл концентрата низина - К и напыляют на 57,2 г,белкового в псевдоожиженйрм слое. Сухого препарата получают 125г с активнЪстью 20 мкг, ЗГ в мг dyxorp вещества, что составляет 86% от активности фильтрата,

В таблице представлена активность препарата низина при хранении в условиях холодильника (4 - ) в течение года, .(Опре едена методом диффузии в агар с тест-культурой BacvcoaguPans I 15,. Погрешность метода 10-12%) ,

.Предлаг емьай способ прзволяет испрдьзовать недорсз х ие и недефицитные ферменты, используемая, среда дешевле известной в 5-6 раз, получаемый препарат обладает стандартной активностью в 20 мкг/мл сухого вещества и

Активность, ед/мг сухого препарата

Сроки хранения в месяцах О-J 3 J 6 Г 9 Г 12

1804+80 800+64 792+52 784+56 800+76

2820+52 804+56 792+84 820+72 820+68

31040 76 976+76 936+96 984+88 984+84

Формула изобретения

1. Способ получения низина путем выращивания продуцента в питательной среде на основе молочной сыворотки, с последующей экстракцией целевого продукта из микробных клеток, отделением экстракта, его концеНтрированием,высаливанием, фильтрацией и высушиванием, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью стабилизации активности низина в процессе хранения, продуцент выращивают на среде, седёржащей молочную сыворотку и экстракт кормовых дрожжей, выращенных на растительных отходах, очищенную куЛЬтуральную ЖИДКОСТЬ концентрируют -с сорбиталем С-20, фильтрацию осуществляют через фильтр-перлит, полученную пасту низин-перлит растворяют в 0,02 и. растворе HCf,затем проводят повтор:т;абилен при хранении в течение 2 пет.

. -,ii-A-S,-.,Slf

ную фильтрацию и концентрат высушивают в присутствии хлористого натрия напылением на каэёйнат натрия при их соотношении 1-25 2,3-1,3.

2.Способ по п. 1, о т л и ч а ющ и и с я тем, что выргицивание ведут при рН.6,8-7,.0.

3.Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью утилизации отходов ферментации, осадок после отделе№й- Я -1 : зге ур ай 6й жидкости подвергают гидролизу пектофоэтидйном П10Х или амилоризином и вводят в состав питательной среды в качестве источника азота при пО:Йторной ферментации.

Источники информации, принятые во внимание при эк ;пертизе

1.Патент СССР № 42751Ь кл. С 12 D 9/12. 1976.