Питательная среда для выявления и количественного учета анаэробных бактерий Советский патент 1980 года по МПК C12B3/08 C12K1/00 

Изобретение относится к ктокробиопо гической промышленности, а именно к микробиологическому контролю производства картофелепродуктов.. Известные питательные среды, такие как Мак-Кой, Мак-Кланга, Китт-Тароццк и др., для выявления наличия анаэробных микроорганизмов, из-за сложности их применения практически не используются для количественного учета этих микроорганизмов. Известна питательная среда для выявления и количественного учета анаэробных бактерий, содержащая источники угле рода и азота, пептон, 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый, компонент, поглощающий ю-1слород, и вазелиновое масло Эта среда Китт-Тароиии является наиэолее близкой к описываемой. Благодаря тому, что в результате реду1шру ощей способности бактерий бесцветная тетразолиевая соль 2,3,5-.трифенилт(}тразолия хлористотО восстанавлчвается в красный трифегтлформазон добавлет1е этой соли к среде Китт-Тароц-. ш дает возмоншость осуществить не только выявление, но и количественный учет анаэробных микрооргагшзмов в исследуемых объекта х. Однако из-за своего темного, соломенно-желтого цвета, маскирующего появление розовой окраски, эта среда неудобна для выявления наличия и учета анаэробных бактерий, в особенности при производстве картофелепродуктов. Цель изобретения - создание питательной среды, обеспечивающей ускоренное выявле1те и более точный учет анаэробных бактерий. Поставленная цель достигается тем, что указанная питательная среда допол гательг1о содержит дрожжевой автолизат, аскорбиновую кислоту и углекислый каль- toni, а в качестве источника углерода и азота и компонента, поглощающего кислород, используют соответственно карто- фельный отвар и картофель при следугошем соотношетги компонентов, г/л: Картофель 20О-300 Пептон 1O-1R Дрожжевой автот1зат 20-25 Аскорбиновая кислота 0,0001-0,00015 . 2,3,5-трифени лтетраэолий хлористый 0,023-0,027 Углекислый кальций 18-20 Вазелиновое масло 70-8О Картофельный отвар Остальное Для приготовления питательной среды 2ОО-300 г очищенного картофеля нарезают кубиками и помещают в пробирки с стерильным углекислым кальцием, взятым из расчета 1О-12 г на 1 л добавляемог картофельного отвара. Картофельный отвар готовят следующим образом. 20О-ЗОО г неочищенного, тщательно отмытого и нарезанного на кусочки картофеля варят в .1 л воды в течение 2530 мин, фильтруют через бумажный фильтр и, добавляя воду,, доводят фильтР9Т до первоначального объема. К полученному отвару добавляют 10-15 г пептона, устанавливают рН 7,4-7,6. Пробирки с картофелем и углекислым кальцием заливают приготовленным карто фельным отваром до высоты 11-13 см, на поверхность которого наносят стериль ное вазелиновое масло слоем 0,7-1,0 см (70-8О г/л среды) и стерилизуют 25ЗО мин при 125° С. Перед посевом пробирки со средой подвергают регенерации (кипячению в течение 25-30 мин для удаления раство римого кислорода с быстрым охлаждением среды до 40°С). Затем в среду вносят 0,023-0,027 г 2,3,5-трифенилтетр золия хлористого, 20-25 г стерильного дрожжевого автолизата и 0,00010,00015 г стерильной аскорбиновой кис лоты (все компоненты взяты из расчета на 1 л среды.). На подготовленную таким образом пи тательную среду высевают смыв с полуфабрикатов и готовых картофелепродуктов. В результате редуцирующей способности бактерий бесцветный 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый восстанавливается в красный трифенилформазон, кот рый окрашивает среду в интенсивно-розовый цвет. Предложенная среда позволяет обна.ружить присутствие анаэробных бактери ерез 6-11 ч в зависимости от ин4шин ованности полуфабрикатов и готовой проукции , При количественном учете анаэробых бактерий подсчет количества анаэроов производят по скорости появления степени интенсивносга розового окраивания с помошью специальной табли- ы, эмпирически составленной по подсчеам высевов методом Мак-Реци и труб- Beиона. Содержа1гое ана& ремя от начала инробных и факульта убирования до появения розовой окрастивно-анаэробныхбактерий в 0,1 г ки, ч сухого картофельного пюре 2,5 X 10 2,0 X 10 1,5 X 10; 3,5 X 10; 2„5 X 10 1,5 X 10 Примеры приготовления среды. . Пример 1. Для приготовления среды 200 г очищенного картофеля наре- зают кубиками и помешают в пробирки со стерильным углекислым кальшшм, взятым в количестве 20 г на 1 л добавляемого картофельного отвара. Картофельный отвар готовят следую- щим образом. ЗОО г неочищенного, тщательно отмытого и нарезанного на кусочки картофеля варят в 1 л воды в течение ЗО мин, фильтруют через бумажный фильтр и, добавляя воду, доводят фильтрат до первоначального объема. К полученному отвару добавляют 12 г пептона, устанавли-вают рН 7,6. Пробирки с картофелем и углекислым тсальцием заливают приготовленным картофельным отваром до высоты 12 см, на поверхность которого наносят вазелиновое масло слоем 0,7 см (7О г на 1 л среды) и стерилизуют ЗО мин при 125 С. После регенерации срепы, осуществляемой перед посевом, в нее вносят 0,027 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, 25 г стерильного дрожжевого автолизата и 0,00015 г стерильной аскорбиновой кислоты. Пример 2. Для приготовления среды 253 г очищенного карто}юля нарезают куС.гками и пометил ют в пробирки 5, 7 со стерильным углекислым калышем, взятым в количестве 19 г/л добавляем го )ельпого отвара. Картофельный отвар готовят слеаун тцим образом. 250 г неочищенного, тщательно отм того и нарезанного на кусочки картофеля варят в 1 л воды в течение 30 мин 4мльтруют через бумажный фильтр, и, д бавляя воду, доводят фильтрат до первоначального объема. К полученному отва добавляют 10 г пептона, устанавливают рН 7,5. Пробирки с картофелем и углекислым калышем заливают приготовленным картофельным отваром до высоты 12 см, н поверхность которого наносят вазелиновое масло слоем 0,9 см (75 г/л среды и стерилизуют 30 мин при 125 С. После регенерации среды, осуществляемой перед посевом, в нее вносят 0,025 г 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого, 23 г стерильного дрожжевого автолизата и О,ОО013 г стерильной аск биновой кислоты. Пример 3. Для приготовления среды ЗОО г очищенного картофеля нарезают кубиками и помещают в пробирки со стерильным углекислым кальцием, вз тым в количестве 18 г/л добавляемого картофельного отвара. Картофельный отвар готовят следующим образом. 200 г неочищенного, тщательно отмы того и нарезанного на кусочки картофеля варят в 1 л воды 30 мин, фильтруют че рез бумажный фильтр и, добавляя воду, доводят фильтрат до первоначального объ ема. В полученный отвар вносят 1 5 г пептона, устанавливают рН 7,6. Пробирки с картофелем и углекислым кальцием заливают приготовленным картофельным отваром до высоты 12 см, на поверхность которого наносят вазели- 180 г/л среновое масло слоем 1 см мин при 125 С. ды; и стерилизуют 30 После регенерации среды, осуществля емой перед посевом, в нее вносят U,O23 2,3,5-т Л1фенилтетразолия хлористого, 2О г стерильного дрожжевого автолизата и 0,0001 г стерильной .аскорбиновой кислоты. На питательгтую картофельную среду для анаэробоп (КАН), приготовленную со гласно указанным примерам, производят высев 1 мл рпзвопения смыва с О,1 г продукта пля количествешгого учета ака- 7 эробных бактерий. Засеянные пробирки подогревают на водяной бане и помешают в термостат при 37 + О,5°С. Наблюдения ведут каждые 30 мин 5 ч от начала инкубирования посевов допоявле1гая розового окрашивания. После появления розового окрашивания инкубирование посевов прекрашают. По появлению розового окрашивания судят о наличии роста микроорганизмов, а по времени его появления - о количестве згчк микроорганизмов в продукте. Высокие питательные свойства и светлая окраска предложенной среды обусловливают ускоренное выявление и более точный учет анаэробных бактерий, в том числе C.botuEinum,Ce.pehft-ihg-ehs,Ce. 5poro enes,Ct-be;|enn1 ii . Предложенная среда более удобна и эффективна по сравне тю с известной для осуществления ускоренного выявления и учета анаэробных микроорганизмов на полуфабрикатах и готовых картофелепроцуктах. Применегше этой среды дает возможность улучшить кпгкробиологический контроль производства, что способствует поышению качества выпускаемой продукции и редотвращению возможности возтткновения пищевых отравлений. Формула изобретения Питательная среда для выявления и количественного учета анаэробных бактерий, содержащая источник углерода и азота, пептон, 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый, компонент, поглошаюший кислород и вазелиновое масло, отличающаяся тем, что, с целью ускоренного выявления и более точного учета анаэробных бактерий, она дополнительно содержит дрожжевой автолизат, аскорбиновую кислоту и углекислый кальций, а : в Качестве источтшка згглерода и азота и компонента, поглощающего кислород, используют соответственно картофельный отвар и картофель при следующем соотношении компонентов, г/л: 200-300 Картофель 10-15 Пептон Дрожжевой 20-25 автолизат Аскорбиновая 0,0001-0,00015 кислота 2,3,5-трифенилтетраоолий хлоО,О23-О,027 РИСТЬ Й 7 Углекислый кальцийВазелиновое масло Картофельный. отвар. 7079578 18-20принятые во внимание при экспертизе 70-80 Остальное . 5 1973, вьш. 5, с. 15-17. Источники информации, 1. Сб. Консервийя промышленность ,