Питательная среда для выявления и количественного учета молочнокислых бактерий в продуктах из картофеля Советский патент 1986 года по МПК C12N1/20 C12Q1/04 C12N1/20 C12R1/01 

Изобретение относится к микробиоогии,, а именно к микробиологическоу контролю производства продуктов из картофеля.

Целью изобретения является более 5 полное выявление и учет молочнокислых бактерий, ускорение их роста, а также удешевление питательной среды.

Предлагаемую питательную среду готовят следующим образом.;10

Чисто вымытые неочищенные от ко- журы клубни картофеля измельчают на терке или в измельчителе и полученную массу отжимают на соковыжималке или вручную через два слоя марли. 15 Полученный сок отстаивают в течение 20 мин для осаждения крахмала и от - деляют осадок. Затем 200-280 мл картофельного сока доводят кипяченой водой до 1 л, кипятят в течение 1-3 мин 20 и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К полученному фильтрату добавляют кипяченую воду до общего объема 1 л, расплавляют 15-20 г агара при подогревании, а затем добавля- 25 ют 20-25 г стерильного углекислого кальция, Среду разливают в колбы и стерилизуют при 1,3 ати в течение 30 мин.

Перед использованием для посевов зо к расплавленной и охлажденной до среде добавляют 25-37,5 мл стерильного 40%-ного раствора глюкозы (что составляют 10-15 г глюкозы на 1 л среды) и 20-27 мл стерильной дрожжевой суспензии.

35

Дрожжевую суспензию готовят следующим образом.

100 г пекарских дрожжей влажностью не менее 75%, содержание сухих вещест не менее 25% и 100 мл стерильной водопроводной воды помещают в стерильную ступку и растирают пестиком до получения однородной, массы. Затем добавляют 250 мл ст ерйльной воды и пе- ремещивают.

Концентрация вводимой дрожжевой суспензии варьироваться в пределах 5,5-6,5%, что достигается путем соответствующего пересчета количества используемых дрожжей и воды.

Введение в предлагаемую питательную среду рекомендуемых количеств дрожжевой суспензии в указанных пре- делах концентрации.обеспечивает полноценное азотисто-витаминное питание молочнокислых микроорганизмов.

5 0 5

о

5

0

5

0

5

Применение дрожжевой суспензии указанной концентрации позволяет осуществить кратковременную стерилизацию (благодаря лучшей теплопроводности получаемой жидкости массы), что обуславливает минимальные потери витаминов и меньшую денатурацию белковых компонентов. Использование дрожжевой суспензии предлагаемой концентрации, кроме того, обеспечивает более точную дозировку и стерильность ее при приготовлении предлагаемой питательной среды, так как дает возможность осуществлять дозировку получаемой жидкой суспензии с помощью стерильной мерной пипетки.

Использование дрожжевой суспензии более высокой концентрации нежелательно, так. как вызьшает необходимость более жестких режимов стерилизации, что приведет к увеличению потерь белково-витаминного комплекса, а также усложнит дозировку суспензии при приготовлении предлагаемой среды. Кроме того, применение дрожжевой суспензии с концентрацией более 6,5%- нецелесообразно, так как приводит к излишнему расходу компонента без улучшения достигаемого эффекта.

Использование предлагаемых количеств дрожжевой суспензии с концентрацией менее 5,5% нежелательно, Tak как в данном случае не будет обеспечено полноценное азотисто-витаминное питание микроорганизмов.

Дрожжевую суспензию вводят в готовую среду, увеличение объема вводимой суспензии с целью компенсировать не- достаток азотисто-витаминного питания (при ее концентрации ниже 5,5%) нежелательно, так как приведет к излнщ-- нему разбавлению среды, Снижению ее питательной ценности, а также ухудшению структурных свойств вследствие плохого застывания агара.

На приготовленную среду высевают смьюы или разведения смывов с картофеля, полуфабрикатов и готовых картофе- лепродуктов. Микробиологический анализ на выявление и учет молочнокислых микроорганизмов проводят общепринятыми методами. .

Пример 1. Картофельный сок готовят путем измельчения на терке чисто вымытых неочищенных от кожуры клубней картофеля. Измельченную массу отжимают на соковыжималке. Полученный сок отстаивают в течение 20 мин для

3J239

осаждения крахмала и отделяют осадок . , 200 мл картофельного сока отбирают в мерную посуду, доводят кипяченой водой до 1 л, .кипятят в течение 1 мин и фильтруют через.ватно-марлевый 5 фильтр, К фильтрату добавляют кипяченую воду до 1 л, затем в нем расплавляют 15 г агара при подогревании и добавляют 20 г стерильного углекислого кальция. Приготовленную среду раз-|о ливают в колбы и стерилизуют в течение 30 мин при 1,3 ати. Перед использованием для посевов к расплавленной и охлажденной до среде добавляют 25 мл 40%-ного стерильного раствора 15 глкясозы, что соответствует 10 г глюкозы на 1 л среды и. 20 мл стерильной дрожжевой суспензии (концентрация дрожжей 5,5%).

V 20

П р и м е р -2. Для приготовления среды используют картофельный сок, который получают из измельченного неочищенного от кожуры картофеля от- жатием массы вручную через два слоя 25 ,марли. Сок оставляют на 20 мин для осаждения кархмала и отделяют осадок. 250 мл картофельного сока отбирают в мерную посуду, доводят кипяченой водой до 1 л, кипятят в течение 2 минзо и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. К фильтрату добавляют кипяченую воду до 1 л, в нем расплавляют 18 г агара при подогревании и добавляют 22 г стерильного углекислого кальция. Среду стерилиз.уют при 1,3 ати в течение 30 мин.

Перед использованием для посевов к расплавленной и охлажденной до среде добавляют 32 мл стерильно- го 40%-ного раствора глюкозы, что со- ответствует 12,8 г глюкозы на 1 л сре35

0

10 12,8

15 18

20 22

9

5 |о15

0

5 о

145 4

ды и 25 мл-стерильной дрожжевой суспензии (концентрация дрожжей 6%).

Пример 3. Отжатый из измельченной картофельной массы сок отстаивают для осаждения крахмала в течение 20 мин, отделяют осадок, после чего отбирают 280 мл в мерную посуду. Доводят объем до 1 л кипяченой водой, кипятят в течение 3 мин и фильтруют. Объем фильтрата доводят до 1 л кипяченой водой,затем вносят 20 г агара, , расплавляют его при подогревании и добавляют 25 г углекислого кальция. Среду-стерилизуют в течение 30 мин i при 1,3 ати.

Перед использованием.для посевов к расплавленной и охлажденной до 45 С среде добавляют 37,5 мл 40%-ного стерильного раствора глюкозы (что соответствует 15 г глюкозы на 1 л среды) и 27 мл стерильной дрожжевой суспензии (концентрация дрожжей 6,5%).

Картофельный сок представляет собой концентрированную смесь растворенных аминокислот, моно-и дисахаров, микроэлементов и витаминов.

Использование в предлагаемой среде картофельного сока в сочетании с дрожжевой суспензией позволяет обогатить ее витаминами группы В и С, моносахарами и незаменимыми амино- киcлoтa и, благодаря чему она является полноценным и оптимально сбалансированным питательным субстратом.

Граничные значения каждого компонента, вводимого в предлагаемую пита- тельную среду, определяют эмпирически путем подбора компонентов и испытания вариантов среды.

Составы предлагаемой питательной среды приведены в табл. 1.

Таблица 1

20 25

200 До 1 6,4 103 250 - - 7,2-103

Ка видно из табл. 1 (пример 1-3), предлагаемые пределы содержания компонентов являются оптимальными и обуславливают оптимальную сбаланси- рованность среды по питательному составу, что способствует наиболее полному выявлению и более точному учету молочнокислых микроорганизмов в кар- тофелепродуктах..

При введени в среду картофельного сока в количестве менее 200 мл/л имеет место недостаточное выявление молочнокислых микроорганизмов (пример 4 табл. 1), а увеличение количества вводимого картофельного сока свыше 280 мл/л нецелесообразно, так как не приводит к значительному улучшению достигаемого эффекта (пример 5, табл. 1).

Введение в предлагаемую питательную среду дрожжевой суспензии в количестве менее 20 мл/л, не удовлетворяет потребности молочнокислых микро- .организмов в азотистом питании, что Приводит к неполному их выявлению

Продолжение табл.1

(пример 6, табл. 1), а введение дрожжевой суспензии в количестве более 27 мл/л нецелесообразно, так как приводит к излишнему расходу компонента и не оказывает существенного влияния на точность количественного учета (пример 7, табл. 1).

Уменьшение количества агара в среде ниже 15 г приводит к плохому застыванию, а уменьшение количества вводимого углекислого кальция ниже 20 г - к недостаточному образованию зон растворения и к неточному учету молочнокислых организмов в анализируемых продуктах. Увеличение же количества этих компонентов вьше величин, указанных в рецептуре предлагаемой- среды, нецелесообразно, так как не приводит к улучшению результатов по выявлению и количественному учету молочнокислых микроорганизмов.

Использование предпагаемой питательной среды обеспечивает более полное выявление как гомоферментативных, так и гетерофёрментативных видов мо лочнокисл)ых бактерий (табл. 2).

Вид молочнокислых микроорганизмов

Lactobacillus bulgaricum Штамм KB-IS Штамм КВ-11

Streptococcus cremoris Bacterium Delbruckii

I

(Шапошникова) Lactobacillus acidophilum

Применение предлагаемой среды для роорганизмов в картофелепродуктах выявления и учета молочнокислых мик- позволяет ускорить их рост (табл. 3)

ТаблицаЗ

Исследуемый продукт Время появления роста

молочнокислых микроорганизмов, ч

Сухое картофельное пюре48

Сушеный картофель72

Картофельные биточки50

Картофельные котлетыА8

Составитель В. Голимбет Редактор Н, Егорова Техред нГВонкало Корректор М. Демчик

Заказ 3354/21Тираж 490Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1239145 8

Та б лица 2

Количество молочнокислых микроорганизмов в О,1 г культуры

2,7 0,8 0,8-

0,9 1,2 . 1,0.