Способ определения лизосомального катионного белка лейкоцитов Советский патент 1980 года по МПК G01N33/49 A61B10/00 

шивание проводят при 20-24°С, Окрашенные мазки высушивают и ми-кроскопируют под иммерсией светового микро скопа. При этом высушенные мазки хорошо сохраняют свою первоначальную окраску в течение б и более месяцев, что позволяет проводить повторные исследования для сравнения и контроля. При мер. В условиях клиники, родильного отделения, амбулаторно поликлинического обслуживания, в школьно-дошкольных учреждениях при предварительном врачебном осмотре и одновременном общеклиническом исследовании крови выборочно проводились .исследования npeanaraeNSJM способом у 125 здоровых и 117 больных различными заболеваниями в возрасте от 1 дня MiSHii до 40 лет. Взятие крови проводилось путем прокола пальца, а у 7 больных с диагностической целью брался пунктат костного мозга путем стерналь-ной пункции. Из крови и кост ного мозга готовили мазки. Высушенные маз-ки на подставке помещали в эк сикатор, насытенЕ ый парами 10%-ного Формалина, который добавлением 0,1 н КОП доводили до рН - 8,1-8,2. Фиксацию мазков проводили в течение 5 мин после чего фиксированные мазки вывет ривали на воздухе в течение 5-10 мин .фиксацию и последую 1ие операции окоа шивания проводили при комнатной температуре 2 О -2 4 С. Краситель прочный зеленый PSF, в количестве 50 мг сухог вещества растворяли в 100 мл 1 М три буфере с .добавлением по каплям.минимальных количеств. 0,1 н. КОН строго рН 8,1. Окрашивание фиксированных и просушенных мазков проводили погруг жением в красящий раствор на 3 мин, после чего мазки без прогиывания погр жали последовательно в три сменных раствора сафранина 0|.01%-ного, приго товленного путем растворения 10 мг сухого вещества в 100 мГ дистиллированной во,цы, докршяивание з каждой .смене раствора сафранина проводили ПО 5 с. Окрашенные мазки высуши вали и микроскопиров-али под иммерсией. В поле зрения обычного светового микроскопа под масляной иммерсией полученные предлагаемым способом мазки к-рози и костного мозга выглядя следующим образом: эритроциты тусклого светло-розово го цвета обычной Формы; лимфоциты и моноциты -характериой присущей им формы с хорошо .енной клеточной структурой с бледнорозовой цитоплазмой и ярко-розовым яд;эом, лишенные катионного белка эозинофилы обычной формы, с харак терным типичным ядром ярко-розового цвета с большим количеством крупных гранул от темно-зеленого, преимущественно фиолетового, и темно-фиолетового цвета в цитоплазме; базофилы обычной Формы с типичным ядром розового и ярко-розового цвета со значительным количеством гранул зеленого цвета в цитоплазме; нейтрофильные лейкоциты выделяются на общем фоне клеток по содержанию большого количества мелких и более крупных гранул от светлого до темнозеленого цвета, с хорошо выраокенной структурой ядра, окрашенного в бледнорозовый цвет, в незрелых юных клетках в более насыщенные розовые тона до ярко-красного по мере их созревания. Получение четких контрастных гранул отсветло-зеленого до темно-зеленого и Фиолетового цвета на Лоне хорошо выраженной морфологической структуры ядра и клетки в целом, позволяет дать количественную характеристику содержания катиониого белка. В зависимости от степени зрелости и функционального состояния лейкоцитов меняется и цветовая окраска лизосомальных гранул,определяемых количественным содержанием в них катионного белка,что позволяет группировать окраиюнные. лейкоциты, по различным степеням,. (О,I, II,III,IV, V) при подсчете в 100 лейкоцитах и оценивать принципом Kaplo.w с выведением среднеарифметического показателя, процентным отношением клеток с различной степенью, также графически гистограммой. Предлагаег ий способ обеспечивает высокую точность определения, техни- . :ческуго простоту и быстрое исполнение в лабораторных условиях, не требующих сложного оборудования. Предлагаемый способ позволит улучшить диагностику, своевременно назначить правильное лечение, что значительно сократит, в среднем до 10 дней, пребывание больного в больнице. Формула изобретения Способ определения лизосомального катионного белка лейкоцитов путем приготовления мазка крови, его фиксащии, окрашивания, высушивания, микроскопирования и определения количества белка по степени интенсивности окраски, отличающийся тем, что, с целью повышения точности путем устранения диффузного окрашивания друг-их клеточных элементов, фиксацию проводят в парах формалина концентрации 8-10% при рН 8,1-8,2, окрашивание осуществляют прочным зеленым FSF при концентрации красителя 0,01-0,05 мг в IМ трис-буфера и непосредственно

57090626

ПО окончании его проводят окрашива-Источники информации,

ние сафранином при концентрации 0,01- принятые во внимание при экспертизе

0,02%. Архив патологии, 38, 5, с.55-59.