Способ получения модифицированного водорастворимого препарата целлюлозы Советский патент 1980 года по МПК A61K38/47 C12N11/08 

альбумины, активированние глутаровым циальдегидом при весовом соотношении альбумин: глутаровый диальдегид-1:8-25, а связывание целлюлааы е полимером проводят привесовом соотношении целлюлаза: полимер 1:1Ввиду того, что используются товарн а;7ьбумины, содержащие фракции с ра личным содержанием Nf 2 rpynn и различной молекулярной массой и ввиду возможных стерических затруднений, глутаровый диальдегид берется в избыточном количестве, В этом случае условия активирования альбуминов оп тимальные для введения максимальног количества. СНО-групп, активных по отношению к NHj -rpynnaM фермента. Высокое содержание активных СЯО-групп в активированном альбумине и небольшая концентрация фермемта по отношению к полимеру способствует присоединению несколь ких NH2 Групп целлюлазы к одной молекуле альбумина и тем сам5лм ограничивает рост молекулы целевого продукта, что обуславливает хорошую растЕОримость последнего. Кроме того, окружение фермента альбумином,, электростатически заряженным природным полимером, также увеличивает гидрофильность препарата , Высокая концентрация альбумина полностью обеспечивает присоедине;iHG целлюлазы и исключает потери фермента. Процесс обычно проводят следующим образом. , Альбумин (2%-ный раствор) актив руют глутаровым диальдегидом (25%раствор) при весовом соотношении 1:8-25 в течение 24 ч при 20°С, от деляют избыток диальдегида гельфил трацией на сефадексе Q-25, с после дующим связыванием фермента и акти вированного альбумина в течение 24 при 2 . Выход препарата в пересчете на целлюлазу и альбумин 100%, активность его превышает активность исх ной целлюлазы на 30-40%. Пример. 0,20 г яичного альбумина растворяют в 10 мл воды, добавляют 2 мл (2,08 г) глутарового диальдегида. После 24 ч выдержк при отделяют избыток глутаров го диальдегида гельфильтрацией на сефадоксе Q-25, К 100 мл водного раствора активированного альбумина добавляют 0,10 г целлюлазы„ Через 24 ч водный раствор препарата пригоден для ферментативного расцепле ния целлюлозы,. Выход в пересчете н целлюлазу и альбумин 100%. Активность 132%. от исходной. Определение активности фермента Активность целлюлазы определяет &й по методу Мандельса-Вебера.. Соответствсм но методу , цел/тKJJ; азнан активность определяется по количеству редуцируюиих Сахаров, образующихся при гидролизе 50 мг (0,5 X 0,5 см) бумаги Whatmaii bf- 1 в течение 1 ч при 50°С в 0,05 н ацетатном буфере (рН 4,8). Пример 2. О,30 г молочного альбумина растворяют 15 мл воды, добавляют 2,4 NU (2,49 г) глутарового.диальдегида. После 24 ч выдержки при +2Q°C Отделяют избыток диальдегида гель-фильтрацией на сефадексе . К 130 мл раствора активированного альбумина добавляют 0,20 г целлюлазы. Через 24 ч определяют целлюлазную активность. Выход препарата 100,. АКТИВНОСТЬ 130,5% от активности исходной целлюлазы. Пример 3. О,20 г бычьего сывороточного альбумина растворяют в 10 мл воды, добав:1яют 3 мл (3,12г) глутарового диальдегида, последующую обработку проводдят аналогично описанным примерам. К 108 лп водного раствора активированного альбумина добавляют 0,06 г целлюлазы. Выход препарата 100%. Акт ивность 134% от активности исходной целлюпазы. При мер 4. О,15 г яичного альбумина растворяют в 7,5 мл воды, добавляют 3,12 г глутарового диальдеги.да. После 24-часовой выдержки при +20°С отделяют избыток глутароБого диальдегида гельфильтрацией на сефадексе G-25. Методом оксимирования определяют содержание альдегида в низкомолекулярной фракции г 0,08 г. Для активации альбумина израсходовано 3,04 г альдегида. К полученным после г(льфильтрации 9 8 мл водного раствора активированного а-пьбумина (0,15 г альбумина : 3,04г .диальдегида 1;20) добавляют 0,15 г целлюлазы (целлюлаза: альбу;-лн 1:1) Через 24 ч определяют целлюлазную активность модифицированного водорастворимого цел;тюлазного препарата. Она равна 132% от активности исходной целлюлазы. Выход водораств-оримого препарата в пересчете на целлюлазу и альбумин 100%, П р и м е р 5, 0,10 г молочного альбумина растворяют в 5 мл воды, добавляют 2,6 г глутарового диальдегида . После 24-часовой выдержки, гельфильтрацией на сефадексе отделяют непрйсоединенный диальдегид, К 86 мл раствора активированного альбумина (альбумин: диальдегид - 1:25J добавляют 0,05 г целлюлазы {соотношение целлюлаза: альбум} Н 1:2) . Через 24 ч целлюлазная активность составляет 138% от av;тивнocти исходной целлюлаэы.

Buy од n.vioiJacTBopiiMoro целлюлаиного препарата 100%.

П р н м е р 6, 0,30 г бычьего сывороточного альбумина растворяют в 1 5 мл воды, добавляют 2,7 г глутарового диальдегида. После 24часовой вьщержки, гельфильтрациеЛ отделяют неприсоединенный диальдегид. К полученным 118 мл водного раствора активированного альбумина (сшьбумин: диальдегид 1:8) добавляют 0,1 г целлюлазы (целлюлаэа:альбумин 1:3).

Формула изобретения

Способ получения модифицированного водорастворимого препарата

целлюлаэы посредством ковалентногс связывания целлюлазы с полимером, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода целевого продукта, в качестве полимера используют альбумины, предварительно активированные глутаровым диальдегидом при весовом соотношении альбумин: тлутаровый диальдегид 1:8-25, а связывание целлюлазы с полимером проводят при весовом соотношении целлюлаза: полимер 1:1-3 соответственно.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Патент США 3929574,

5 кл. 195-66, опублик. 1975.

2.Патент Великобритании 1290701, кл. С 3 Н, опублик. 1969 (прототип).