Способ получения глутамилсодержащих пептидов Советский патент 1980 года по МПК C07K7/06 A61K38/08 C07K1/10 A61K38/10 

1

Изобретение относится к улучшенному Ьпособу получейия глутамилсодержавщх пептидов, обладающих биологической активностью.,

Известен способ получения глу гами л содержащих пептидов 1, например формулы Z-Trp-A5p(Bu)-Qe.,u( «-NHBOC, .методом активированных эфиров, заключающимся в , что аминокислотные остатки, один /из которых глyтa lинoвaя кислота, защищенная по -карбоксильной группе третичным бутильным остатком кон-денсируют методом активированных п-нитрофениловых эфиров. Защитную группу в дальнейшем удаляют либо на последних стадиях синтеза, либо при проведении азидной конденсации данного фрагмента с другим пептидом. Недостаток известного метода состоит в том, что. для его осуществления необходимо получить соответствующее производное глутаминовой кислоты, что усложняет процесс в. целом и снижает выход целевого-продукта..

Глутамилсодержащие пептиды Воо-gf u-Bi) -g u-Thr-Zeu-Met-gP u-Tyr-Ze Pu(OMe) и Вое (Bu)-gPu-Thr-Zeu-Met-gf u-Tyr-Zeu-gPu-Asn-Prc

-Zys (TFA)-Zys(TFA)-Tyr-I e-Pro-g y (OMe) , отвечающие участкам 617 69 и 61-77 пептидной цепи цитохрома С, были получены конденсацией отдельных пептидных фрагментов описанным выше методом с выходом 64,8 и 56% соответственно 2.

Цель изобретения - упрощение проЦесса полученияглутамилсодержащих пептидов и увеличение выхода целевых продуктов.

Поставленная цель.достигается описываемым способом получения глутамилсодержащих пептидов путем конденсации глутамилсодержащих пептидных. фрагментов, заключающемся в том, что проводят конденсацию пептидных фрагментов, содержащих незащищенную по -карбоксильной группе глутаминовую кислоту в присутствии пивалоилхлорида, растворителя и третичного основания.

Применение описываемого способа для синтеза нона- и гептадекапёптидов, отвечающих участкам 61-69 и 61-77 белковой депи цитохрома С, позволяет сократить время проведени процесса за счет исключения стадии снятия защитных групп и позволяет получить указанные продукты с более

высоким выходом: 75 и 67%, соответственно.

Пример, Нонапептид, отвечающий участку 61-69 белковой цепи цитохрома С BOC-g- u(Bu)-g-eu-Thr-Zeu-Metgeu-Tyr-2eu-g- uOMe , 41 мг ВОСд- и(ви) растворяют э 3 мл сухого, хлороформа, добавляют 9 мл пиридина, 10 мл (,J:)N; охлаждают до и прибавляют 18 мл пивалоилхлорида. Через 15 мин добавляют раствор 70,8 мг НСО thr-Z.eu-Met-g-eu7иг-2.ец-§ еу-ОМе в хлороформе с 75 мл )jN, Спустя 40 мин при упаривают растворитель и образовавшийся нонапептид выделяю г добавлением этилацетата, Перекристаллиэовьавают из смеси ацетон-этилацётат. Выход 75 мг (75%) , Kf 0,4 (ТСХ на силу фоле в си ст еме н - бут ан олу к су сн ая кислота: вода 13:2;5), т.шт. 184-.., Л 1от -. ..185«С.

+ 15,2° ± 0,6 (С 1,0/

метанол),

АМИНОКИСЛОТНЫЙ состав гидролйзата : Met 1,0; TV 0,8; 2eui,7; g:eu 3,9;Thf 0,5, v .;

Нонапептид, полученный известным способом имеет т,ш1, 1S3-185-C, MD +. 15,8 ±0,6 (С 1,0, мета-.

нал) , - -:/: -. :- .: -.,.,-.-::.-. . ; Тептадекапептид (61-77) : ВбЙ (ви)-д-еи -thr-Zeu-Met -g-eu-Tyr-iuu-g-eu-:

-Astn - Pro - гуэ (ТРА)- zvg. (ТРА)- fvr - Jee - ОМе.. получен аналогично из 72 мг BOC-g-Cu(BL }-g-et;-rhr-zW-Me -g-tu-rvp-Zeu-g u-OH и 54 мг HC Asn-Pro

-2у&(тРА)- губ(трА)- fvp-a e-t rd-g-eyOMe .в количестве 60 мг .(67%) ,К Й,14

(в тех же условиях) , т.:еПЛ4 194-.

196°С, М + 7, 0,7 (С 1,0, 50% метанол),

Аминокислотный состав, гидролизата: дЬ 1,0; 32е О ,99 ,гУ5 1,99 ;Рго 2,4; Met О , 9 3; Thp 1 ,12 ; Zeu 1,91; Tvf 2,0; Asp О, 72; 4,03.

Гептадекапептид, полученный по известной методике., имеет, т.пл. . . 194-196°С, С +6,9 +0,7 (С 1,0, 50% метанол) .,

Формула изобретения

Способ получения глутамилсодержащих пептидов путем конденсации глутамилсодёржащих пептидных фрагменгтов, о т л и, ч а ю щ и и с я тем, что, с целью упрощения процесса,проводят конденсацию пептидных фрагментов, содёржаадих незащищенную по -карб,оксильн6й группе глутаминовую кислоту в-присутствии пивалоилхлорида, растворителя и третичного основания, ; , .

Источники информации,

принятые во внимание при экспертизе

1« { ВоНп, Z.Moroder-/studies on Cvtochrome. Party. Synthesis of the protected t)ecqpept de( 57-66) of Bakers veast 180-1 - cvtochrome C EiopaCvmehS -1973, -12,693

2, В-асильёва Г,А, Тез.исы докладОв 1У Всесоюзного симпгозиума по белков и пептидов, 5-8 сентября.. 1977 f., г.Минск., . с.166 Синтез пептидных фрагментов цитОхрома С млекопитаю.щих (прототип) ,