Способ получения несимметричных 6,7-пептидил-протогеминов 1х Советский патент 1980 года по МПК C07K14/805 C07K1/08 

(54) СПСХ:ОБ npJB JEHHfl НЕСИММЕТРЙЧНШ 6, 7-1 ЕПТИДИЛ-ПРОТОГЕМИНОВ JX метричных 6,7-пептидилпротогеминов JX общей формулы С1ьСНг СН.} . HjC -«rS V4,-( Нг)г (Нг)г йонх 5(хКг Bal а edeKj:- OtiHatieBsj-Eeu-m -ь«г -оме/, Кг- Duu,Hl -Ala-baS-6-lH-(JyS -ОВг Ба1 -AU-ьец-ЛЮ,-Plie-Ata- Cv -OBat или.к 1; - L Е и-и1. -ли bys- G-W-C s - OB Bal -AtQ-beu-Ala -Phe-Ata -Cve - OSat J f R -OCHzCeHs j - Leu-Hl -L«s -оме -yзаключающймся , 4:10 б (Т)-6ен оксипро.тогемин IX формулы . tH.dH.2 WeRi;-oeHz JeHs), К -ОЙНгЙбН5 ). подвергают взаимодействию с .этилхлорформйатом, полученный при этом смешанный ангидрид подвергают бза действию с пентафторфенолом и зат получ енный активированный пентафт фёниловый эфир пБЮТогемина 1Х кон денс|1руют с свободным гексапе тидож в 2,5-3 молярном растворе м чевины в диметилформамидё при 40в присутствии основания. Данный способ позволяет получи нвсимме тричные производные мина 1Д с двумя различными функци нальными группами с вьгсоким выход ( - 60%) ., Отличительным признаком способ является применение в качестве пр межуточного ;активированного агента пэнтафторфенилового эфира монэзамещенного протогемина 1.Х. Это произвoдl oe, не применявшееся ранее в описываемом классе соединений, активно и термодинамически устойчиво длительное время, достаточное для прохождения реакции, Пёнтафторфениловый эфир протогемина IX получают методом смешанных ангидридов, Кроме |того, для достижения полноты реак-.;. 1ции и увеличения скорости процесса используют повышэние температуры ре|акции до 40-45 С, а в реакционную 1массу добавляют мочевину (3 М раст|вор), которая уменьшает стерические |затруднения в пептиде и увеличивает доступность реагирующей аминогруппы. Выход б(7)-бензилового эфира . 1Ы.-лейцилгистидилаланил И -бензилоксикарбониллизилглицил-З-бензилцистеинил -7(6)-бензоксигемина по этому методу составляет 60,4%, П р и м е р 1, К раствору 0,97г )-бензилового эфира протогемина IX в 10 мл хлористого метилена до-, бавлпют 0,6 млтриэтиламина и 0,15мл этилхлор.формиата, перемешивают 10мйн при и вйосят 0,355 г пентафторфенола. Реакционную массу леремешиBatOT 1ч при 20°С, Растворитель удаляют в вакууме. Остаток добавляют к . ,, ..раствору 1,70 f трифторацетаТа бен-, зиловогоэфира лейцил.гистидилйланил- . -N -бензилЬксйк рббниллйзилглицил- . . -&-бензйлцйстёина в .10. мл димётилформамида, содержащего мл триэтил- . амина и 1,8 г мочевины, перемешивают 8 ч при , Растворитель удаляют . в вакууме VОс.татбк 5истят на колонке . с окисью алюминия jl степени акТийностй,.эл10йруя смесью хлороформ-метанол(9,,8) . Выход 1/3 t (60,4.%) КлО, 54 (хроматогтэабия вТонкомcjioe . Кремниевой кислоты в системе х.яороформ - метанол 9:1).Т.пл. 136-139 С. ймийокислотный: айаЛиз гидроли.зата: Aia 1,05 (1); Leu,6V90 (1); Lys 1,00 (1) ; His 1,04 (1) ; Gly 1,015 (Г). .Пример 2. К раствору 0,223.г б(7)-метилового эфира N -лейцил-М -бензилгистидил-Н -бензилоксикарбониллизил1-протогемина IX в 6 мл хлористого метилена при -10°С и перемешиваний добавляют 0,11 мл триэтиламина и 0,04 мл этилхлорформиата. Перемешивают 20 мин при , 10 мин при и вносят 0,143 г оентафторфанола. Реакционную массу перемешивают l,5vnpH . Растворитель удаляют в вакууме. Остаток добавляют к раствору. 0,107 г трифторацетата метилЬврго эфира аланиллейцилаланидфенйлаланилаланил-З-гбензилцистеина в 4 мл йиметилформймида, содержащему 0,018 мл триэтиламина и 0,4 г моче-, вины. Перемешивают 18 ч при 20°С, б ч при и 24 ч при 20с, Осадок

отделяют. Фильтрат выпивают в 50 мл воды и экстрагируют хлороформом (2x20 мл). Экстракт сушат безводным сульфатом натрия. Растворитель удаляют в вакууме. Остаток, очищают на .колонке с окисыЬ алюминия Iff степе.ни активности, элюируя- змесью хлороформ-мётанол (15:1) и затем на ко|Лонке с силикагелем, элюируя смесью хлороформ-метанол (10:1), Выхся ОЛ&О г (63,1 %) . Rf 0/7 (тонкослойная, хроматография на силуфоле в системе хлороформ-метанол 8:2), 0,62 (тонкоолрйн.ая хроматография на алуфоле в системе хлороформ-метанол . 50:1) .

|С:я)а i6 s Fed bSHjO. : Найдено, %: С 32,58; Н 6,87, N 11,68, Fe 2,91.

Вычислено, %: С €2,57, Н 6,48,

N 11,33, Ре 2,82.-Аминокислотный анализ гидролизата: Ala 2,80 (3); Leu 2,36 (2); Phe 0,8 (1) ;Lys 0,92 (1) .

Формула Изобретения i Способ получения несимметричных 6,7-пептидил-протогеминов IX общей формулы. , .

; CH(Mj йнз

I

Сн-Снг

бНз J .

Mч

((jH2)j (нг)г

COBitiOEz

Bzi г

-ОСН2Й6Н5 -j-z-eu-Hie- itfS- оме ,

B.I

Sj: ieu-.Hie-Ata-Ltf0 - &ii/-c s -OBzt,

Bzi .

-v4ta-Leu-Altt-Phe-Ala-CvS-OB i j

гBzi

II

u/iuRi t - Leu-Шй-Ato- LV6- -OB

, .Bzt

-Ala -Leu-Ala- Phe-Ala-cW- OBzl J

Вг1 г

HZ- OCHztieHs }- teu- Ht$ - Lss - оме ,

йутем взаимодействия 6(7)-бензоксипротогемина US формулы

tiH-t t

н.е

10

H -oCHtCeHsJ nl-OH, )

к1-ОбНгйбИ5

ic этилхлорформиатом с образованием .смешанного ангидрида и применениег реакции конденсации с 11 -свободн л тексапептидом в среде диметилформами1да в присутствии основания, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта и расширения ассортимента целевых продуктов, смешанный ангидрид подвергают взаимодействию с пентафторфенолом и полученный пентафторфениловый эфир монозамещенного протогемина Гх конденсируют с N - :вободным гексапептидом в 2,5-3 малярном растворе мочевины при 40-45 С.

Источники информации, принятые во вн.имание при экспертизе

1.Chang С. К., Traylor Т. G., Neighboring Group Effect in HemejCarbon Monoxide Bonding, j. Amer. jChem. Soc. 1973 95, C4 84758477.

2.Warme P. K. и др. Непге Sulfu-r ric anbydrides. l. Synthesis and Reactions of mesoHeme sulfuric anhydrids, Biochemistry, 1970 , 9, , 1599-1606.

3.Молокоедов A. C. и др. Синтез И свойства гистидинсодержащйМ пентакоординационных комплексов гемина. ЖОХ, 1977 t/ в. 5, с. 1165-1172.