Способ определения эризимина Советский патент 1980 года по МПК A61B10/00 G01N33/16 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭРИЗИМИНА

Изобретение относится к области кли дической биохимии, а именно к способу определения гликозида эризимина и может быть применено для количественног и качественного анализа этого соединения в различном материале для клинических исследований. Известен способ определения эризими на путем воздействия на исследуемый материал реагентом с последующей фотометрией образовавшегося окрашенного продукта l. Недостатком этого способа является ег -малая специфичность и точность. /Цель предлагаемого изобретения - п вышение чувствительности и специфично сти анализа. Поставленная цель достигается тем, что в качестве реагента используют . 2,3,2 ,4-тетранитродифенил, и реакцию проводят в шелочной среде. К раствору 1О мкг исследуемого препарата в 96° этаноле или к О,1 ампульного раствора прибавляют до 2 мл 9 этанол. 2,5 мл 15%-ного спиртового раствора ТНДФ, 0,5 мл 0,15 н. одного раствора едкого кали. Смесь охлаждают до 20-22°С . При этом возникает синее окрашивание. В опыте для сравнения проба бесцветна. Построение Калибровочного графика определения эризимина. Точную навеску препарата (0,0500г) растворйют в 96° этаноле, количестенно переносят в мерную колбу на 50 мл. и доводят до метки этим же растворите лем (раствор А). Из разведения берут 10 мл (точно мерной пипеткой) переносят в мерную колбу на 1ОО мл и доводят 96 этанолом до метки (растворБ). Из раствора Б берут 0,1;О,2;O,5j . 1 и 2 мл, помещают в пробирки, добавляют Об этанол до 2 мл, 2,5 мл 0,15% спир-тового раствора ТНДФ, 0,5 мл 0,15 н. водного раствора едкого кали. Смесь охлаждают до 2О-22°С и проводят измерение оптической плотности растворов, окрашенных в синий цвет, через 2О минут

nofcne добавления щелочи. Измерения проводят на фотоэлектроколорнметре ФЭК-Й. В течение 2О мин jaio Измерё.ния растворы хранят в темноте. Светофильтр красный I кювета 5 мм, фой - сМесь реактивов. Экспозиция ЬЕ окрашенных

Результаты зависимости величийы оптической плотности окрашенных растворов эр изимина с ТНДФ от концентрации П р и м е р. К too г печени, почек крови и мочи трупа, погибшего от травмы , добавляют 1ООО мкг ефйэймина. Изолирование проводят через сутки 7О%-ным этанолом. Настаивают объект с растворителем 24 ч. После троекратного настаивания спиртовые вытяжки объединяют, упаривают при бСРс и осаж дают белки 96 этанолом. Осадок коагулировавших белков отфильтровывают, раствор упаривают и pacтвqpяют в 50 мл 20%-ного этанола. Полученный раствор деотекратно очищают от примесей экстра цией этиловым эфиром. Из бШЩейного спиртоводного раствс а экстр1агируют эризимин четь1рё;«ды смесью этанола хлороформа 1:4. Объединенный спиртохлвроформный экстракт Очищают экстрак цией 1 н. раствором едкого натра, промывают дистйллирсдаанной водой, осушивают, пропуская через слой безводного сульфата натрия и упаривают при

комплексов 18-20 мин, стабильность окрашивания t 8-10 мин. Подчиняемость продукта реакции основному закону светопоглуйцения наблюдается в пределах концентраций препарата 1О 15О мкг/мл. Данные приведены в таблице. досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл 96° этанола. Из разведения берут. 1,О мл, добавляют до 2 мл 96° этанол. Изолирование из мочи проводят аналогично, опуская настаивание 70%-ным этанолом и осаждение белков. Расчет процентного содержания эризимина, выделенного из биологическбго материала, проверят по формуле в, -а - V.,.too Р О - концентрация, мкг, найденная по калибровочному графику; YJ - объем, мл, взятый на анализ;Vj - объем, котором растворен сухой ocTaTOKj Р количество эризимина, мкг, добавленного к 100 г объекта.

Результаты исследования контрольны проб указьшают отсутствие влияния экстрактивных веществ из печени .на определение эризимнна, колоряметрируемые растворы практически бесцветны.

Способ позволяет повысить чувствительность и специфичность метода определения эризимина, исключить дорого стоящее оборудование, упростить методику анализа аризимина, уменьшить расход исследуемого препарата.

Формула изобретения. Способ определения эризимина путем воздействия на исследуемый материал реагентом с последукнцей фотометрией образовавшёгося окрашенного продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности анализа, в качестве реагента используют 2,4,2,4-тетранитродифенил, и реакцию проводят в щелочной среде.

Источники информации, принятые во внимание приэкспертизе 1. Аптечное дело. 3, 1962, с. 38-41.