(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОЭ.ЕНЗИМА А ИЗ ДРОЖЖЕП
1
Изобретение относится к области микробиологии и касается способов получения коэнзима А.
Известен способ получения коэнзима А из дрожжей путем их суспендирования с последующим выделением целевого продукта горячей экстракцией, отделением экстракта и его очисткой 11 j .
Однако известный способ не обеспечивает получение высокоактивного коэнзима А. Активность коэнзима А составляет 30000 ед/кг дрожжей.
Целью изобретения является повышение активности коэнзима А.
Эта цель достигается тем, что дрожжи суспендируют в растворе, содержащем KHj РО , К ПРО и MgSO, 7Нг затем суспензию дезинтегрируют ультразвуком, к дезинтеграту добавляют раствор, содержащий 1,42,75 вес.% смеси аденозин-5 -трифосфата (АТФ), пантотената кальция и циотеина при их соотношении 1:(0,7-1,7) : (0,3-0,4) и 5,5-6,5 вес.% глюкозы, далее полученную суспензию дезинтеграта инкубируют и экстрагируют целевой продукт.
Способ иллюстрируе тся след «огцигда примерами.
Пример. В качестве исходного сырья используют биомассу хлебопекарных дрожжей Sacc.haromyces cerevi- siae. Активность коэнзима 18500 ед/кг биомассы дрожжей.
20 г данной биомассы суспендиру т в 100 мл водного раствора, содержащего 2,7 г KHgPO, 3,5 г KHPQj и 0,3 г MgSO 7Н2О.
0
Полученную суспензию дезинтегрируют на ультразвуковом дезинтеграторе при-силе тока 0,4 А, частоте ультразвуковой волны 20 кгц, рН 6,5-7,0 и температуре +5 ±2°С в
5 течение 15- мин получают 110 мл дезинтеграта, содержащего клеточные оболочки, органеллы, отдельные клетки.
К дезинтеграту добавляют 6,5 г глюкозы, 1,5 г пантотената кальция,
0 0,85 г АТФ, 0,4 г цистеина. Реакционную смесь инкубируют анаэробно при 37+2°С и рН 6,5-7,0 24 час, после чего коэнзим А экстрагируют, подогревая реакционную смесь до
5 95+2°С ивыдерживают при этой температуре 5 мин.
Реакционную смесь разделяют центрифугированием.
Активность коэнзима А составляет 172000 ед/кг дрожжей.
0
Пример 2 в качестве исходыого сырья применяют спиртовые Saccharomyces cerevisiae. Активнрсть коэнзяма А 27000 ед/кг биомассы дрожжей.
20 г данной биомассы суспендируют в 100 мл водного раствора, содержащего 2,7 г , 3,5 г KgHPO H 0,3 г MgSO4-7H о.
Полученную суспензию дезинтегрируют на ультразвуковом дезинтеграторе MSE--50G при силе тока 0.4 А, частоте ультразвуковой волны 20 кГц# рН 6,5-7,0 и температуре +5 в течение 5 мин. Получают 100 мл де зинтеграта, содержащего клеточные оболочки, органеллы, отдельные клетки.
К дезинтегратору добавляют 6.г глюкозы, 1,02 пантотената кальция, г АТФ и 0,3 цистеина. Реакционную смесь инкубируют анаэробно при 37х2°С и рН ,0 24 час, пдсле чего коэнзим А экстрагируют подогревая реакционную смесь до 95 ± 2°С, и выдерживают при этой температуре 5 мин,
Реакционную смесь разделяют центрифугированием .
Активность коэнзима Л составляет 184000 ед/кг дрожжей.
Использование изобретения позволит получить высокоактивный коэнзим А,
Формула изобретения
Способ получения коэнзима А из дрожжей путем их суспендирования с пocлeдi/ющим выделением целевого
продукта горячей экстракцией, отделением экстракта и его очисткой, отличающийся тем, что, с целью повышения активностн коэнзима А, дрожжи суспендируют Б растворе, содержащем КН Р(,
МдЗОд-7Н2 О, затем суспензию дезинтегрируют ультразвуком,к дезинтегра-ту добавляют раствор, содержащий 1,7 4-2 р 75 вес, смеси аденозин-5 Трифосфата, пантотената кальция
и дистеина при их соотношении 1; (0,7-1,7): (0,3-0,4) и 5,56,5 вес.% глюкозы,- далее полученнук суспензию дезинтеграта инкубируют и экстрагируют целевой продукт.
Источники информации,
принятые БО внимание при. экспертизе
1„ Methods in Enzymol, 1957, vol.Ill, p,907, Acad, Press N.Y,
