Способ выделения нуклеиновых кислот хлопчатника или их аминокислотных комплексов Советский патент 1980 года по МПК C07H21/00 A61K29/00 

. Л- ,,V:V:.,--iSt;a ;,5 :- ;:,:. : r- M i /l S&fSM

-;wy

72Тб5ёГ -- -«- ---- -| йьздерживают в хрлодальнике при 15ч. . . Такую экстракцию проводят центрифугированием еще три раза. Объединяю супернатант и ставят на диализ. При этом щелочерастворимые белки выпадают в осадок. Осадок отделяют центр фугированием, растворяют в 0,2%-ном NaOH и опять ставят на диализ. Така я процедура повторяется три раза. После этого можно применять глйтелин для осаждения. Но для более полного очищения глютелина после диализа ег центрифугируют, осадок растворяют в О,2%-ном растворе щелочи NaOH, к му добавляют уксусную кислоту в так количестве, чтобы общее содержание ее в смеси было 4,4%. Полнота осаждения проверяется в отдгэльной пробе. Выделившийся при этом хлопьевидный осадок белка центр фугируют и растирают в ступке с водои, воду сливают и вновь добавляют Этот процесс растирания продолжают до тех пор, пока в промывной воде не будет обнаруживаться сахар. После этого осадок растворяют в 20 мл 0,2%-ного tNaOH, образовавшийся раст вор центрифугируют. Из прозрачного, слегка опалесцирующего раств9Ра глютелин вновь осаждают прибавлением уксусной кислоты до конечной концентрации в смеси 4,4%. Эту процедур т перерастворения и переосаждения бел ка повторяют три раза и каждый раз центрифугируют. После последнего пе реосаждения осадок белка промывают дпя удаления уксусной кислоты и затем спиртом, промытый спиртом осадок переносят на фильтр. Спирт вытесняют эфиром на водоструйном насосе. Осадок сушат в вакуум-эксикаторе. Выход гяютелина 25-30% (2,5-3 г) . Фракционирование нуклеиновых . кислот. На колонку, заполненную метилированным альбутлином на кремниевой кислоте (МАК), уравновешенную 0,02 М натрийфосфатным буфером рН 6 наносят 400 опт.ед. суммарных нуклеивовых кислот. Элюцию проводят линейным градиентом в концентрации хло ристого натрия 0,,0 М, содержащим 0,02 М фосфатный буфер, рН 6,8 и сбор фракций.9-10 мл, . Затем содержимое пробирки разделяют поровну на две пробирки, осажда ют казеином и глютелином, в пробир-. ки добавляют по три капли 1%-ного TPHd7sopa казёина и глютелина и два . объема холодной 10%-ной .. Полноту осаждения проверяют в отдельной пробе. Результаты исследо ваний показали, что нуклеиновые кис лоты осаждаются с глютелином на, больше, чем с казеином. Полученные peзyльтatы приведены в таблице,.

:s-r :-r ййШ5# %- « вй «13б%да™г ; ШФракционирование суммарных нуклеиновых кислот на колонке МАК (%) Фракционирование комплекса нуклеиновых кислот. На колонку (3x25 см) заполненную МАК, уравновешенную 0,02 М Na-ацетатным буфером рН 5,2, содержащим 0,1 М NaC., медленно сорбируют 5 мг С -фенилаланил-тРНК и промывают ее тем же буфером до полного удаления неадсорбированного комплекса. Элюцию проводят линейным градиентом в концентрации NaC (0,11,.0 М) в 0,02 М Na-ацетатном буфере, содержащем 1 -10 М MgCEg. Скорость элюции 25-30 мл/ч, объем фракции 3-4 мл. После измерения оптической плотности при 260 нм c-фенилаланилтРНК в каждой фракции осаждают равным объемом холодной 5%-ной НСв-Од. Результаты фракционирования С -фенилаланил-тРНК на колонках с МАК приведены на графике. В качестве адсорбента носителя . прибавляют О,2 мл 1%-ного раствора казеина (а) и глютелина (б). На графике приняты следующие обозначения: 1 - оптическая плотность, 2 - радиоактивность, I, II.и III - иэоакцепторные формы C-фенилаланил-тРНК. Выпавший осадок собирают центрифугированием, растворяют в 0,5 М , переносят, на Мишень, высушивают и подсчитывают радиоактивность. Как видно из приведенного, активность C-фенилаланил-тРНК I, II и III изоформ больше на 22-25%, когда прййён kmqectBе мЪсйтейя глютёЛИН вмёстО каз ей на . Формула изобретейия Способ выделения нуклеиновых кислот хлопчатника или их аминокислотных комплексов путем хроматографического разделения на метилированном альбумине на кремниевой кислоте с последующим осаждением целевого продукта посредством добавления белка-носителя, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с Целью повышения выхода целевого Продуктk, в качестве белка-носителя используют глютелин хлопчатника.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизё

1. Каракуэиев Т.У. Действие у -облучения на функциональную актив727658

ность отдельных аминоацил-тРНК син.т.етаз и тРНК семян хлопчатника. Дне. на соиск. учен, степени канд. биологических наук. Ташкент/ 1972 (прототип) .

260 В.7д

as

0.25

JS

10

в

ннп/нин

450

300

т

to

30

SO