Способ получения производных винбластина Советский патент 1980 года по МПК C07D519/04 A61K31/475 

Изобретение относится и способу получения не описанных в литератур производных винбластина общей формулы А -CHt-CHj где R - амино-, гидразико,- азидо или метиламиногруппа; R - водород или С - С апкано R - водород или С - С апкилг - оксигруппа; R - этил, обладающих фармакологической актив ностью. Известен способ получения амидов карбоновых кислот, заключающийся в том, что сложный эфир карбоновой кислоты подвергают взаимодействию с аммиаке или аминами 1. Использование известной реакции позволяет получать не описанные в литературе производные винбластина общей формулы А. Цель изобретения - способ получения новых фармакологически активных производных винбластина общей формулы А. Поставленная цель достигается описываемым способом получения производных винбластина общей формулы А, зaключaющимdя в тем, что соединение общей формулы А, где R -метоксигруппа, R , R , R и R шлеют вышеуказанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы RH, где R - амино,- гидразино-, азидоили метиламиногруппа, в безводном метаноле или этаноле при 50-100°С. В случае необходимости соединение общей формулы А, где R - гидразиногруппа, нитрозируют-для получения соеди нения общей формулы А,где R - азидогруппа.

Целевые соединения формулы Л выделяют и разделяют известными методами .

Производные винбластина общей формулы А обладают антивирусной и противоопухолевой активностью.

При м.е р 1. Винбластин-С-ЗЫ-метилкарбоксамид и 4-дезацетилвинбластин-С-ЗМ-метилкарбоксамид,

К раствору 21 г метиламина в 100 мл безводного метанола при -78 С добавляют примерно 3,5 г винбластина и оставляют на 8 дней при 50°С, затем удаляют летучие компоненты при выпаривании в вакууме. По данным спектра ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и инфракрасного спектра остаток представляет собой смесь 4-дезацетилвинбластин-С-ЗЫ-метилкарбоксамида и 4-дезацетилвинилбластина. Этот остаток растворяют в. 100 мл пиридина и добавляют 20 мл уксусного ангидрида, оставляют на 18 ч, затем выпаривают в вакууме. Полученный остаток хроматографируют на окиси алюминия, применяя смесь этилацетат и хлороформа (1:1) для элюирования. Фракции, содержащие винбластин-С-ЗН-метилкарбоксамид, объединяют и удаляют растворитель при выпаривании в вакууме.

При описанной выше методике ацетилирования реацетилируют не только С-4-гидроксил, но также ацетилируют С-3-гидроксил. Ацетильную группу у С-3 удаляют обработкой силикагелем в водном метаноле при комнатной температуре в течение времени от 6 ч до нескольких дней и получают продукт, не содержащий С-3-ацётильной группы. В этом случае остаток объединенных хроматографических фракций растворяют в 50 мл метанола и к раствору добавляют 20 мл воды и 2 г силикагеля. Полученную смесь фильтруют, фильтрат выпаривают досуха в вакууме и остаток хроматографируют на силикагеле. Для элюирования применяют смесь бензола, хлороформа и триэтиламина (100:50:7,5) отбираю фракции, содержавшие желательный винбластин-С-ЗЫ-метилкарбоксамид. Удаляют растворитель при выпаривании в вакууме. Остаток растворяют в водном метаноле и устанавливают рН 2,9 при добавлении 1%-ной кислоты. , После выпаривания полученной смеси в вакууме получают сульфат вин ластин-С-ЗЫ -метилкарбоксамида, который после перекристаллизации из безводного этанола имеет температуру плавления 272-275 С (с разложением) .

4-Дезацетилвинбластин-С-ЗЫ-метилкарбоксамид выделяют из смеси с 4- -дезацетилвинбластином, полученной на стадии амидирования, сл эдующим способов.

Остаток, полученный при выпаривании первоначальной (до перекристаллизации) реакционной смеси досуха в вакууме, хроматографируют на силикагеле, применяя для элюирования смесь бензола, хлороформа и триэтил амина, указанную выше. Фракции, содержащие 4-дезацетилвинбластин-С- -ЗЫ-метилкарбоксамид, как установлено тонкослойной хроматографией, объединяют, выпаривают в вакууме раство0 ритель и получают N-метилкарбоксамид в виде амдрфного твердого вещества. Сульфат 4-дезацетилвинбластин-С-ЗЫ-метилкарбоксамида получают по методике, описанной для приготовления

5 сульфата винбластин-С-ЗЫ-метилкарбоксамида.

По описанной выше методике 2 г 4-дезацетилвинбластина растворяют в смеси 75 мл безводного метанола

0 и 20 г этиламина. Реакционную смесь нагревают при температуре около в течение примерно 8 дней. Полученный 4-дезацетилвинбластин-С-ЗЫ-этилкарбоксамид отделяют методом

с хроматографии в тонком слое. Полученное твердое вещество имеет полосу при 1670 см в инфракрасном спектре, характерную для замещенного карбоксамида.

П р и м е р 2. 4-Дезацетилвинблас0 тин-С-3-карбоксамид.

Примерно 10 г сульфата винбластина превращают обычным способом в свободное основание винбластина. Это основание, полученное в виде остат5 ка после выпаривания эфира, растворяют примерно в 200 мл безводного метанола. К раствору добавляют безводный жидкий аммиак (300 мл), реакционную смесь выдерживают при температу0 ре около 100°С в течение 60 ч. Затем выпаривают в вакууме. Полученный остаток хроматографируют и фракции, содержащие 4-дезацетилвинбластин-С-3-кар.боксамид, как показала тонкоg слойная хроматография, объединяют, выпаривают в-вакууме растворитель и получают в виде остатка чистое свободное основание 4-дезацетилвинбластин-С-3-карбоксамида. Свободное осQ нование имеет полосу в инфракрасном спектре 1687 , характерную для амидной группы. Молекулярный вес свободного основания, определенный масс-спектроскопией,равен 753, что совпадает с величиной, вычисленной теоретической для ,.

600 мг остатка превращают в сульфат в.условиях примера 1. .При выпаривании реакционной смеси досуха получают сульфат 4-дезацетилвинбластин0-С-З-карбоксамида, который после перекристаллизации из смеси этанола и изопропилового спирта плавится при (с paзлoжeниe,

4-Дезацетилвинбластин-С-З-карбокс5 амид превращают в винбластин-С-3-;карбоксамид по методике примера 1 следующим образом. 2,8 г свободного основания 4-деэацетилвинбластин-С-3-карбоксамидаацетилируют смесью безводного пиридина и уксусного ангидрида, Реакцион ную смесь выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре. Посл удаления летучих компонентов путем выпаривания в вакууме получают остаток, который растворяют в хлорис том метилене. Раствор промывают водо высушивают и выпаривают досуха, полу чают винбластин-С-3-карб6ксамид.Амид очищают хроматографией на силикагеле применяя для элюирования смесь этилацетата и этанола (1; 1) ,Фракции,соде жащие винбластин-С-3-карбоксамид,как П15казала хроматография в тонком слое объединяют, выпаривают растворитель и получают в виде остатка свободное основание винбластин-С-3-карбоксамида. Это основание имеет характерную для амида полосу в инфракрасном спек ре около 1700 СМ , Молекулярный вес, определенный масс-спектроскопией, равен 795, то есть совпадал с теоретической величиной, вычисленной для С45Н57 50. Сульфат винбластин-2-3-карбоксамида получают способом, описанным в примере 1, и кристаллизуют из этанола; т.шт. выше 250 С. Примерз. 4-Дезацетилвинбластин-С-3-карбоксигидразид. По методике из примера 1 4-дизаце тилвинбластин нагревают в безводном этаноле с избытком безводного гидразина при температуре около 60®С в течение примерно 18 ч, затем выпаривают в вакууме летучие компоненты. Полученный остаток, состоящий из 4-дезацетилвинбластин-С-3-карбоксигидразида, растворяют в хлористом метилене. Этот раствор проливают водой, отделяют и удаляют хлористый метилен при выпаривании в вакууме. Остаток растворяют в смеси хлороформ и безола (1:1) и хроматографируют на силикагеле. Для злюирования применяют смесь бензола, хлороформа и триэтиламина, указанную в примере 1. Начальные хроматографические фрак ции содержат непрореагировавший 4-дезацетилвинбластин. Последующие фракции содержат 4-дезацетил-18-дескар6ометоксивинбластин-С-3-карбоксигидразид. Следующие фракции, содержащие 4-дезацетилвинбластин-С-З-карб оксигидразид, как установлено тонкослойной хроматографией, объединяют и удаляют из них растворитель при выпаривании в вакууме. Полученное твердое вещество плавится при 210220°С (с разложением). Полученный таким образом 4-дезацетилвинбластин-С-3-кар6оксигидразид имеет полосу поглощения карбметокси в инфракрасном спектре при 1725-1735 сми полосу в 1690 см , обусловленную гидразидной функцией. Молекулярный вес, определенный масс-спектрографией, равен 768, что соответствовало теоретической величине, вычисленной для C4jHj N O., . Пример 4. 4-Дезацетилвинбластин-С-3-карбоксазид. Раствор 678 мл 4-дезацетилвинбластин-С-3-карбоксигидризида (пример 3) и 15 мл безводного метанола смешивают с 50 мл 1 н.раствора соляной кислоты и полученный раствор охлаждают примерно до 0°С. Затем добавляют примерно 140 мг нитрита натрия и реакционную смесь перемешивают 10 мин., поддерживая температуру около . При добавлении 140 мг нитрита натрия и перемешивании 10 мин при р°С раствор приобретает темную-красновато-коричневую окраску. Затем реакционную смесь подщелачивают избытком холодного 5%-ного водного раствора бикарбоната натрия и трижды экстрагируют хлористым метиленом. 4-Дез ацетил вин бласт:ин-С-3-карбоксазид, образовавшийся в этой реакции, ; растворяют в хлористом метилене. Обычно раствор 4-дезацетилвинбластин-С-3-карбоксазида в хлористом метилене применяют без дополнительной очистки и аликвотное количество его обрабатывают способом для идентификации азида. При выпаривании хлористого метилена получают азид в аморфном состоянии. Этот остаток промлвают эфиром н фильтруют полученную суспензию. Остаток в виде порошка ры-. жевато-коричневого цвета имеет следующие физические свойства: ультрафиолетовый спектр Л„дц 269 ммк (6 « 16700) ; плечо около 290 - 309 ммк ( «7100) , максимум поглощения в инфракрасном спектре при 1690 (карбоксигидразид) отсутствует максимум при 1730 см не изменяется. Кроме того, присутствует резко выраженный максимум при 2135 , характерный для карбоксамидной функции В масс-спектре наблюдается Тюлекулярный ион т/е 708, доказывающий потерю 71 единицы массы (Н, CONj) из молекулярного веса, вычисленного для C sHssN O 799. В таблице пок,азаны результаты нескольких экспериментов, при которых мьвиам с трансплантированными опухолями вводят соединения формулы А. РОС означает остеогейную саркому Риджвея и ГЛС лимфосаркому Гарднера, СА 755 аденосаркому. Соединения формулы А, ядовиты для мышей при дозах больше тех, при КОТ01МЛХ происходит 100%-ное торможение роста трансплантированных опухлой .

Соединения формулы А активны также в отношении других трансплантированных опухолей. Например, при инъекции 0,25 мг/кг в течение 9 дней сульфата винбластин-С-ЗЫ-метилкарбоксамида для лечения лимфосаркомы Мекка, рост замедлялся на 54%, а при инъекции винбластин-С-3 на 28%.

При исследовании активности в отношения адемокарциомы СА 755 установлено, что сульфат 4-дезацетилвинбластин-С-3-карбоксамида дал 75% замедления роста опухоли, сульфат -4-дезацетилвинбластин-С-ЗЫ-метилкарбоксамида61% и сульфат винбластин-С-3-карбоксамида 49% при дозе 0,25 мг/кг в течение 8 дней и 72% при дозе 0,3 мг/кг.