Штамм вируса оф-5 возбудитель рабдовирусного гепатита форели Советский патент 1980 года по МПК C12K1/02 C12K7/00 

(54) ШТАММ ВИРУСА RABDOVlRUS SALMONlS

ОФ-5 - ВОЗБУДИТЕЛЬ РАБДОВИРУСНОГО ГЕПАТИТА ФОРЕЛИ Изобретение относится к области биологии, в частности к .ветеринарно вирусологии, и представляет собой новый штамм вируса, который вызывает заболевание молоди форели и может быть использован для получени специфической и «1мунной сыворотки. В ихтиопатологии известны различные вирусные болезни форели и со ответствующие возбудители их. Так инфекционный некроз поджелудочной железы вызывается вирусом гексаиональной формы (1. Инфекционный некроз гомопоэтичес кой ткани (J3HN) вызывается вирусом пулевидной формы размером 140 х 160 нм. ВозбудительaHN разрушается эфиром и хлороформом, очень термолабилея. Оптимальная температура развития его в клеточных культурах 10-15°С. Разрушается при прогревании до 45°С в течение 15 мин. Вызывает заболевание мальков форели Целью изобретения является вьаделение возбудителя новой болезни фор ли, изучение его свойств, которые необходимо знать для постановки диагноза на рабдовирусный гепатит, а также для получения специфической иммунной сыворотки, которую можно было бы использовать с целью диагностики данного заболевания форели в хозяйствах. Предлагаемый рабдовирус Rabdolovi- rus salmonisi ОФ-5 в литературе не описан, он отличается от известных вирусов и является самостоятельным возбудителем рабдовирусного гепатита форели. Штамм Rabolovirtife salmonis ОФ-5 хорошо культивируется на перевиваеКых клеточных культурах ЕРС, РИМ, ASE, RTY - 2 и первичной культуре клеток гонад форели, вызывая активное цитопатогенное действие (ЦПД) через 21-48 ч. Морфологическое признаки. Размер вирионов при выращивании на перевиваемой клеточной культуре ЕРС 140 - 150 X 60 нм, пулевидной формы, по краям вириона ворсинки, Штаздл относится к рабдовирусам. Культуральные свойства. Хорошо культивируется на перевиваемых клеточных культурах в титре Ю - 10 TUfljjj Оптимальная температура развития вируса 22 - 24°С. Может культивироваться до 30°С. Устойчив к эфиру, хлороформу, кислотности среды. Хорошо сохраняется при -20°С в тече ние 3 лет, при - в течение шес ти -.месяцев. Не обладает гемагглюти нирующим свойством и гемадсорбцией. Разрушается при 60 в течение 15 ми Антигенные свойства. Выделенный вирус отличается по своим антигенным свойствам от известных вирусов - воэ будит-елей болезни форели. Так, при постановке реакции нейтрализации с иммунными сыворотками к DPN, UHN и VHS вирусам Получен отрицательный результат, что свидетельствует о различии их антигенной структуры, Данный вирус вызывает образование вируснейтрализующих антител. При имм низации данным вирусом кроликов полу чена иммунная специфическая сыворотка, которая предназначена для диагно тики рабдовирусной болезки молоди форели при помощи реакции нейтрализа ции. Вирулентные свойства. При введени нового вируса в брюшную полость здоровым подопытным форелям в дозе 0,2 для одной форели .массой 8-10 у 66,6% последних возникает заболевание с последующей гибелью. Следовательно, вирус ОФ-5 является патогеннйм для здоровых форелей. Вызывает заболевание и гибель до 70% .здоровых форелей, На основании комиссионной проверк установлено, что вновь выделенныйштамм является патогенным для здоровых форелей и вызывает самостоятельное заболевание, Выделение вируса, В последние годы выращиванием форели занимаются многие рыбоводные хозяйства нашей страны. Во многих рыбкомбинатс1х пере ли на интенсивные формы ведения форе леводства. Учитывая то, что условия выращивания не всегда отвечают требованиям, необходимым для нормального развития рыб, очень часто среди них возникают болезни различной природы. Предлагаемый вирус выделен от больных мальков, сеголетков и годовиков форели в двух форелевых хозяйствах УССР, в которых наблюдалась значительная гибель рыб с клиникой потемнения кожного покрова, спиралевидного движения в воде с пос ледующим опусканием мальков на дно бессейна и гибелью их, Аналогичный вирус выделен из икры самки, а так же смеси оплодотворенной икры от 10 производителей, Вьщеление вируса проводят путем заражения однослойных клеточных куль тур -ЕРС и FHM, которые выращивают на основной среде Игла с добавлением 5% сыворотки крупного ро-.атого скота, а также смеси пени1-.лллина и стрептомицина по 100 ед/мл. Выращивают при 22-24°С. На второй-третий день отбирают пробирки, г. которых клетки образовали монрг.юй, В 4 - б пробирок вносят суспензию, приготовленную на физрастворе 1:6, из печени, почек, селезенки и жидкости брюшной полости больных рыб. Ежедневно проводят микроскопию зараженных клеточных культур под малым увеличением микроскопа (х 60), При появлении цитопатогенного действия вируса на клетки (ЦПД) культуру замораживают при-20°С, Для проведения второго пассажа зараженные культуры размораживают и вносят по 0,2 мл-вируссодержащей культуральной жидкости в здоровые тлеточные культуры. Такое пассирование на клеточных культурах проводят 4-5 раз,после чего возникающее в последующих пассажах ЦПД считают специфическим действием вируса. Таким образом выделяют вирусы от мальков, сеголетков и годовиков форели, а также из икры самки и смеси оплодотворенной икры форели. Все выделенные вирусы имеют пулевидную форму, размером 150 х 60 нм, оптимальная температура выращивания 22 - 24°С, нечувствительны к эфиру, хлороформу и кислотности среды. Хорошо сохраняются при и +4°С, Не обладают .гемагглютинирующим свойством, Разрушаются при 60°С в течение 15 мин. Патогенные для здоровых форелей. Вирус RS ОФ-5 используют для иммунизации серого кролика с целью получения специфической иммунной сыворотки. Для этого по 2 мл вируссодержащей культуральной жидкости вводят кролику внутривенно три раза интервалом 7 дней. После его обескровливают и получают сыворотку крови, прогревания ее при в течение 30 мин определяют титр накопления антител, который составляет 1:320. Иммунная Сыворотка хранится в замороженном состоянии и может быть использована для постановки реакции нейтрализации при диагностике рабдовирусного гепатита форели. Формула изобретения Штамм вируса Rabdovirus salmonis ОФ-5 - возбудитель рабдовирусного гепатита форели. Может быть использован для получения специфической иммунной сыворотки. Хранится в музее вирусных штаммов УкрНИИРХа. Морфологические признаки. Размер вирионов при выращивании на перевиваемой клеточной культуре ЕРС 140-150x60 нм, пулевидной формы, по краям вириона ворсинки. Штамм относится к рабдовирусам, Культуральные свойства. Хорошо культивируется на любой из перевивамых культур - ЕРС, НМ, АЕ, РТУ-2 и первичной культуре из гонад форели С активно проявляющимся ЦПД через 24-48 ч в титре 10 ТПДу устойчив к хлороформу, эфиру и кислотноети сретты. Хорошо сохраняется при температуре и при +4®С. Не обладает гемагглютинирующим свойством. Разрушается при 60°С в течение 15 мин. Вирулентные свойства. Вызывает заболевание и гибель до 70% здоровых форелей. , Источники информгщии, принятые во внимание при экспертизе 1. Cerini С.Р, , Malsberger R.O . Am. N,3. Acad. Sci. v. 126, art. 1, p. 422-427. 1965. 2. Осадчая Е.Ф. Инфекционный некроз гемопоэтическо ткани, профилактика и меры борьбы. Рыбоводство и рыболовство , 3, с. 13-14, ,1974.