Способ получения эпоксиагроклавина-1 Советский патент 1984 года по МПК C12P17/00 

х ел ел

о: со со Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения яового химического соединения, представите лю ряда эрголинов биологически активных соединений, конкретно, эпо сиагроклавину (б,8-диметил-8,9-эпок сиэрголин)t , Нз .Наиболее важным источником эрголиновых алкалоидов служат склероции различных видов аскомицетов рода Claviceps. В последние годы эрголиновые производные были найдены также в грибах родов Aspergillus, Rhizopus, Penicillium, причем некоторые клавиновые алкалоиды ранее не были найдены у представителей рода Claviceps ij . Эта группа соединений обладает широким спектром биологической активности. Эргоалкалоиды широко применяются для получения ценных фармакологических препаратов. Так известно действие эргоалкалоидов не центральную нервную систему 2 , на гладкую мускулатуру маткн З , ингибирование пролактина 4J. Изобретение касается способа получения, нового, ранее не описанного эргоалкалоида, содержащего эпоксигруппу. Эпоксиагроклавин представляет ин терес с точки зрения его биологичес кой активности, как представитель класса аргоалкалоидов, и кроме того является удобным объектом для получения производных эрголнновых алкалоидов . Биологическая активность эьгоалкалоидов, как правило, опреде лтгтся наличием или отсутствием заместителей, а также характером этих заместителей в 8-м и 9-м положениях эрголинового ядра. В связи с эти эпоксиагроклавт, содержащий в качестве реакционного пентра эпоксигруппу в положении 8,9 представляет исключительный интерес как исходное соединение для получения практическ любых производных, биологическую активность которых можно варьировать, меняя характер заместителей. Структура эпоксиагроклавиана установлена с Помощью физико-химических и химических методов. Целью изобретения является получение ранее не описанного эпоксиагр клавиана микробиологическим способом.. Поставленная цель достигается тем, что в способе получения эпоксиагроклавиана- 1 формулы r N-СНз И :Н культивируют гриб Penicillium согуlophilum ИБФМ-Р 152 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и фосфора, отделяют биомассу и выделяют эпоксиагроклавин-1 ИЗ культуральной жидкости известными методами. Гриб Р.corylophilum Dierckx ИБФМF-152 хранится в коллекции микроорганизмов ИБФМ АН СССР. Морфологические признаки Р.согуlophilumDierckx ИБФМ- -152. Колонии на Чапек-агаре (10 дней, 25°С) имеют диаметр 3 см, радиально изрезанные, сначала войлочные, плотные, с развитием конидиальных структур становятся бархатистыми. Зональность выражена. Центральная часть сначала кремовая, с возрастом оливково-коричневых тонов, края более светлые, сначала бирюзового, затем серовато-зеленоватого (голубоватого) оттенка. Эксудат образуется ограниченно, в очень мелких бесцветных каплях. Запах заметный, но неопределенный. Обратная сторона коричневатоили серовато-черного цвета. Конидиеносцы поднимаются от субстрата (в маргинальных областях) или отходят как веточки от тесно сплетенных гиф (в других частях колонии), Длина варьирует от 40 до 200 м, а диаметр около 2 или 3 м. Кисточки изменяются по форме и размерам от типично бивертициллятных и ассиметричных до моновертициллятных структур. Метулы 12-16 2-2,5 м, стеригмы 812-2 м. Конидиии округлошаровидные 2-2,5 м, гладкостенные, в длинных цепочках. Пример . Условия культивирования Р.corylophilum Dierckx ИБФМ-Р-152. Культуру Р.corylophium Dierckx ИБФМ--р-152 поддерживают в пробирках со скошенным сусло-агаром. Выращивание осуществляют в течение 5-7 дней при 24-С. Полученную культуру высеивают в колбы объемом 750 мл со 150 мл среды следующего состава, г/л: маннит - 50, янтарная кислота - 5,4, MgSOц 7Hj,n - 0,3, КН2РО(-1,0, вода дистиллированная 1 л, значение рН среды доводят до 5,2 концентрированным аммиаком. Кул тивирование проводят на качалке в течение 9 суток. : Выделение и очистка эпоксиагроклавина. 5,5 л культуральной жидкос ти отфильтровывают под вакуумом. На тивный раствор подщелачивают концентрированным аммиаком до рН 7,5 и экстрагируют хлороформом трижды по 1,7 л. Контроль за полнотой экстрак ции осуществляют с помощью реактива Ван Урка. Объединенный хлороформенный экстракт высушивают над безводным Na2S04,упаривают в вакууме. Остаток от упаривания - 645 мг суммар ной смеси алкалоидов, выделенных из культуральнойжидкости, разделяют методом колоночной хроматографии силикагель Л (5-40 м, ЧССР), вес 250 г, диаметр колонки 30 мп, элюен хлороформ:метанол:конц.аммиак 90: 10:0,1) объем Лракций 15-17 мл. Кон троль за ходом разделения осуществляют методом тех на пластинках Silufol UV 254, обнаружение алкалоидов проводят с помощью реактива Ван Урка. Фракции 33-122, содержащие эпоксиагроклавин, объединяют и упаривают в вакууме. Выход эпоксиагроклавина 494 мг. Дальнейшую очистку проводят высаживанием эпок сиагроклавина из хлороформа гексаном. Вещество дает положительную реакцию на эргоалкалоиды с реактивом Ван Урка (.-Фиолетовое окрашивание) , является основанием, экстрагируетс органическими растворителями при щелочных значениях рН. Оно хооршо растворимо в хлороформе, ацетоне, спиртах, в зтилацетате, хуже - в г сане, гептане. Плохо растворяется в воде при щелочных значениях рН, легко растворимо при кислых значениях рН. Вещество вступает в реакции, типичные для эпоксисоединений Эпоксиагроклавин представляет собо после очистки из смеси хлороформ/г сан белый аморфный порошок. Ниже приведены его физико-химические характеристики. Хроматографические характеристики тех, Silufol UV 254:метанол:хлороформ 1,4, RfO,4; лиэтиламин:хлороформ 1,9, Rfc 0,61, метанол-хлорог форм:конц.аммиак 20:80:О,2, R 0,61, окись алюминия (% акт этанбл :хлороформ 4,9б, 0,48. Масс-спектр, m/в % : 154 (81)., 168(52),182(42), 196 (27), 197 35 , 211(70), 239(44), 254(100,М). Брутто-формула C HigNgO определена масс-спектрометрически (Найдено 254,14189; рассчитано 254,14191). Уф-спектр i макс, нм ():-этанол 226(4,60), 276(3,76), 282(3,79), 292(3,72), 0,01 NHCgB спирте - 274 (3,79), 281 (3,81), 291 (3,75), OjOlAKaOH в спирте - 226(4,60, 276 (3,76), 282(3,79), 292(3,72). СпектрПМР ( . M.Q.):7,8l с (IH, NH) 7,1-6,8 м. (3H,l2-, 13-, 14-H)j 6,54 с (IH, 2-H) 3,6-2,6 м (7H, , 4(3, 5-, 7ei-,7/i,9-,10-H) . ИК-спектр, ( CM-M :3420, 2965-2800,1625, 1610, 1475, 1450, 1350. Данное вещество представляет практический интерес как исходное соединение для получения ряда производных по эпоксигруппе-, биологическую активность которых можно варьировать, меняя характер заметистелей в кольце Э эрголина. При нагревании эпоксиагроклавина1 в водном растворе соляной кислоты найдены продукты присоединения ней по эпоксигруппе 8-Сб,9-ОН-агроклавин-1 и 8 - ОН, 9 - С8- агроклавин-1. При нагревании растворов эпоксиагроклавина-1 в этиловом спирте в присутствии катализатора происходит образование продуктов присоединения этилового спирта по эпоксигруппе. Образование гликоля-3,9диоксиагроклавина водным раствором . При взаимодействии эпоксиагроклавина-1 с уксусной кислотой образуются оксиацетаты и диацетат агроклавина-1. Все перечисленные соединения Получены с хорошими выходами (не менее 50%), охарактеризованы .физико-химическими методами.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭПОКСИАГРОКЛАВИНА-1 формулы о4Х N-CH, заключающийся в том, что культивируют гриб Penici.lium согу 1 otiVi з 1 urn ИБФМ -F - 152 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и Лосфора, отделяют биомассу и выделяют эпоксиагроклавин-1 из куль- Q туральной жидкости известными метода S ми. ел