Способ получения полисахарида, обладающего противоопухолевым действием Советский патент 1980 года по МПК C12D13/04 

В Случае погруженного культивирования с использованием жидкой сре ды мицели не оаспростпаняется на п верхности среры с образованием боль iuHX масс, а формируется в виде йебольших шарикоподобных или волокнис тых масс, создаваемых петэемешиванием. В ходе такого процесса, полисахарид образуется .не только внутри мигхелия, но также в самой соеде. Затем питательную среду подверг ют сушке, которую проводят при тем йературе от 60 до . Для сушки испЬльзуют барабанные газоструйные сушилки и тонкопленочные выпарные ;аппараты, . В результат такой обработки упр щается экстракиия воднкм паф:вЬрите лем, а также сбор полисахарида посредством очистки экс ракиионного ра вора . После обработки сушкой осумествляют экстракцию водным раствором, содержащим щелочь , соль {наппимер хлористый натрий, ацетат натрия) , пблярныгл органическим растворителем (например метанол, этанол) . Наиболе эффективной является экстракиия с нагреванием водой или разбавленным раствором щелочи. Полученный экстрактный раствоо затем подвергают обработке с целью очистки этого раствора путем удаления из него веществ с молекулярны весом менее 5000, что позволяет получить целевой полисахарид. Такую обработку пооводят высаливанием, диализом, ультра ильтраиией, гелевы фильтрованием или осаждением органическим растворителем. После удаления низкомолекулярны компонентов (с мо.лекулярным весом менее 5000) из экстрактногб р аство ра его подвергают распылительной сушке или сушке вымораживанием с последукщим приготовлением техниче кой продукции. Полисахариды, полученные ппедлагаемъФ1 способом представляют собой вещества печеночно-копичневого цвета с содержанием азота от до в% , полисахариды не имеют точки плавления, а постепенно темнеют и разлагаются при температуре, превы шающей Приблизительно 120°с. Beirec во рартвОриМо в воде, но почти нер ворим fi спирте, пиридине, хлорофо бензоле и гексане, оно почти безвкусно и не обладает запахом. Молекулярный вес находится в п делах от 5000 до 300000. . . Азотосодержащий полисахарид обл дает очень сильным противоопухолевым действием,, проявляемым при лечении мьннейне только при внутри брюшинном введении в организм , но также и при введении через рот. Предлагаемое вещество может быть использовано не только для предотвращения нежелательных побочных аффектов в химиотерапии рака и повышения чувствительности к радиотерапии, но также для предотвращения отклонений восприимчивости или физического здоровья пациента, возникающих после хирургических операций или переливания крови, а также для борьбы с вирусными и бактериальными заболеваниями. Пример. 1600 л питательной среды, содержащей 10% глюкозы, 1,5% дрожжевого экстракта, 0,1% первичного кислого фосфата калия и 0,1% гептагидрата сульфата магния, загружают в ферментор, после чего питательную среду инокулируют 20 л шлама грибков штамма CorJoIus versjcolor (FrJ Quel. iEEPM-P-Z414, полученного встряхиванием культуры с последующим культивированием в течение 7 дней при температуре 26 С,скорости аэрации 0,5 л/мин/л среды и скорости вращения мешалки 150 об/мин. Приготовленный таким обоазом бульон (шлам) делят на 500-литровые порции, после чего каждую из этих поЬцй сушат в сушилке типа с двойным барабаном. Температуоу поверхности барабанной сушилки регулипуют таким образом, что температура поверхности питательного бульона (поверхность бульона определяют формированием тонкого слоя бульона- на поверхности барабана) равна сЬотве.тственно 65°, 80°, 90°, ИО и 145С и содержание воды в каждой порции высушенного продукта составляет менее 20 вес.%. Затем вкаждую из этих порций высуше нного продукта добавляют по 250 л горячей воды и проводят- экстракционную обработку при температуре 95±1С в течение 3 ч, а после охлаждения мицелиальный остаток Отделяют от экстрактного тЬаствора с использованием декантатора шнекового типа и с разделением в центробежном сепараторе пластинчатого типа. Полученные полисахаридные продукты представляют собой коричневый порошок , легко растворимый, в воде. Полисахарид, полученнь й с -применением сушки при температуре 60-150 обладает высокой ингибируюшей активностью . . Полисахарид подавляет рост опухолей . Бьали проведены следующие опыты. Клетки опухоли саркомы-180 трансплантируют внутрибрюшинно в организм мыши и после 7-дневного удовлетворительного роста этих клеток вновь трансплантируют под: кожу аксиллярной области другой мыши с получением твердых опухолей. Предлагаемое ве-щество вводят внутрибрюшинно в количестве 10 мг/кг один раз в день в течение 20 дней при общей дозе 0,2 мл/20 г (вес мыши), а при пероральном введении это вешество дают количестве 1000 мг/кг,в день в течение 20 дней с введением обтего количества 0,2 мл/20 г (вес мыпи) .

Ядра клеток всех опухолей погибают по истечении 25 дней после трансплантации, степень подавления опухоли рассчитывают по среднему весу опухолей в группах мьттей, которым вводят предлагаемое веиестгво и среднему весу опухолей мкшей контрольной группы.

Предлагаемый способ позволяет получить препарат, обладающий высоко противоопухолевой активностью. Так, величина активности препарата, полученного известным и предлагаемым способами 100% и 95-98% соответственно, но при этом доза введения предлагаемого препарата 10 мг/кг, т. е. в 60 раз меньше дозы известного (600 мг/кг) .

Препарат может быть использован в медицине при лечении злокачественных опухолей.

Формула изобретения Способ получения полисахарида. Обладающего противоопухолевым действие, путем глубинного культивирования продуцента с последующей экстракцией и очисткой целевого продукта, отличающийс ятем, что, с целью повышения проти0воопухолевой активности, в качестве . продуцента используют штамм Corlolus versicolor (Fr) Ouel. FERM-P-2414, Coriolus consors (Berk.) amaz. FERM-p-988, Corjolas hlrsutus

5 (FrJ Quel. FERM-P-2711 или CorJol.us pargamenus (Ft.) Pat. FEBM-p-27i2 класса ВазЗбЮтусеЪез и пеЬед экстракцией полученную культуральную жидкость без отделения мицелия вы0сушивают при температуре 60-150 0.

Источники информации, принятые во внимание ппиэкспертизе

. 1. Заявка Японии 5Г1-323 4, кл. 30 А 32, опублик. 1975.