Способ получения азотсодержащих полисахаридов, обладающих противоопухолевым действием Советский патент 1980 года по МПК A61K35/66 

Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается получения лекарственных пре паратов . Известен способ получения азотсодержащих полисахаридов, обладающих противоопухолевым действием, путем экстракции из грибов класса базидиомицетов горячим экстрагентом с по следующим выделением и очисткой целевого продукта 1. Однако при этом способе выход целевого продукта незначителен - 3,5% Целью изобретения является повы.шение выхода целевого продукта. Это достигается тем, что экстракцию ведут из грибов Coriolus genus of Polyporaceae водным раствором щелочи в концентрации 0,01-2 н. и очистку ведут ультрафильтрацией и/ил обратимым осмосом. Кроме того, из грибов, относящих ся к Coriolus genus of Polyporaceae берут Coriolus Versicolor (Fr) Quel a a качестве водного раствора щелоч используют раствор гидроокиси натри в количестве, превышающем грибы в 5-200 раз (по весу). Ультрафильтрацию ведут под давлением 0,5-5 кг/см, а обратимый осмос по давлением 25-35 кг/см. Способ осуществляют следующим образом. Проводят экстракцию грибов из класса базидиомицетов Coriolus genus of Polyporaceae водным раствором щелочи в концентрации 0,01-2 Н. При температуре 50-110°С, предпочтительно 80-98 С, в течение 20-600 мин. Для получения щелочного раствора применяют различные щелочные соединения такие, как гидроокись натрия, гидроокись калия, гидроокись аммония или кальция, предпочтительно применение гидроокисей калия и натрия. Полученный жидкий экстракт нейтрализуют обычным методом, применяя минеральную кислоту, например разбавленную соляную кислоту, и затем подвергают этот нейтрализованный экстракт ультрафильтрации или обратимому осмосу, чтобы(Получить низкомолекулярные вещества (с мол.вес. менее 5000) в экстракте. Для этого компоненты продукта фракционируют под давлением по молекулярному весу с применением мембраны, представляющей собой тип молекулярного сита.

Процесс ультрафильтрации осуществляют под давлением 0,5-5 кг/см, предпочтительно 1-4 к г/см з, и при температуре 5-70°С.

В случае применения обратимого осмоса, применяют давление порядка 2035 кг/см, предпочтительно 20 25 кг/см, при температуре 5-20°С.

Ультрафильтрацию применяют для фракционирования материала с молекулярным весом свыше iOOOO , а обратимый осмос применим для фракционирования материала с молекулярным весом менее 1000.

Экстракт, из которого удаляют вещества с низким молекулярным весом (менее 5000), подвергают распылительной сушке или лиофилизации и затем переводят в товарные продукты.

Полученные полисахариды имеют красновато-коричневый цвет и содержат азот в количестве 2-8%, в ряде случаев 3-6%. Они не имеют четкой точки плавления и постепенно темнеют и разлагаются при температуре выше 1200с.

Полисс1хариды растворимы в воде, почти нерастворимы в спирте, пиридине, хлороформе, бензоле и гексане, не имеют вкуса и запаха.

Молекулярный вес полисахаридов составляет 10000-100000.

Азотсодержащие полисахариды обладают высокой противbcfhyxoлeвoй активностью с высоким коэффициентом задержания против -саркомы- 80 на мышах при внутрибрюшинном введении, но также обеспечивают эффективность лечения и при оральном применении.

Полученные азотсодержащие полисахариды могут быть использованы для предупреждения побочного действия в хемотерапии рака.или повышения эффективности радиотерапии и предупреждают инфекционные заболевания, вызываемые вирусами или бактериями, улучшают функцию печени, аппетит, регулируют внутренние нарушения.и поддержание урологических функций.

Пример 1.К 200 г сухого мицелия Coriolus Versicolor (Fr) Quel (FERM - P № 2414) прибавляют 4 л Ofl и. раствора NaOH и экстрагируют при перемешивании на кипящей водной бане при температуре экстрагируемой массы ЭО-55 С в течение 1 час ; и затем охлаждают до 50®С и порциями прибавляют 1 Н. раствора, НСе для поддержания рн 7,0. Затем удаляют твердую фазу фильтрацией под;разрежением и полученный твердый продукт промывают 500 мл воды, получая 4,2 л жидкого экстракта. Этот жидкий экстракт подвер гают ультрафилътрации с применением, специального ультрафильтра при перемешивании и охлаждении, проводя фильтрацию под давлением 1/5 кт/см при 10°С с отделением низкомол екул яр ных соединений с молекулярным весом менее 5000 и последующим концентрированием, получая 300 м раствора, который затем подвергают лиофилизации и выделяют 26,6 г красновато-коричневого порошка (выход 13,5%). Этот порошок содержит 7,5% влаги и имеет следующий элементный анализ: С - 40,5%, Н - 6,2%,N - 5,8% О - 47,5% (процентное содержание кислорода определяют, вычитая из 100 суммарное процентное содержание остальных элементов). Это вещество легко растворяется в воде и обладает примерно 90%- .ым задерживающим коэффициентом против твердой опухоли саркома-180 у мышей при внутрибрюишНном введении и 65%- ,ым при оральном применении .

Антиопухолевый эффект соединений определяют обычным методом. Клетки опухоли саркомы-180 трансплантируют в брюшную полость мыши и после того, как эти клетки разрастутся в достаточной степени в течение 7 дней, 10 таких клеток трансплантируют под кожу подмьлякой другой мыши, где образуется твердая опухоль.

Лечение препаратом, который испытывают, начинают через 24 часа после трансплантации. В случае лечения интраперитонально препарат вводят в дозе 10 мг/кг за курс лечения один раз в день, либо каждый второй день в течение 20 дней общей дозой 0,2 мл/20 живого веса мыши, а в случае перорального применения препарат вводят дозой 1000 мг/кг за курс лечения, т.е. один раз в день в течение 20 дней общей дозой 0,2 мл/20 г живого веса мыши. В опухоли образуется ядро на 25-ый день после трансплантации, коэффициент задерживания роста опухоли вычисляют из среднего веса опухоли мыши, которую лечат препаратом, и среднего веса опухоли контрольной мыши. Для сравнения экстракцию и очистку производят при тех же условиях, но применяя воду вместо 4 л 0,1 Н. раствора NaOH, Выход продукта составляет 7,8% или около 60% от выхода, получаемого согласно способу изобретения.

Пример2.К 500 г живого мицелия Coriolus versicolor (Fr) Quel FERM - P № 2414 (содержание влаги 70,8%, общее содержание азота, 2,6% в расчете на сухой материал) прибавляют 2 л воды и измельчают в смесителе для сока 10-20 мин. и к этой смеси затем постепенно прибавляют 500 мл 1 Н. раствора NaOH и экстрагируют 2 часа на горячей водяной бане при температуре экстрагируемой массы ЭО-ЭБ С, затем нейтрализуют соляной кислотой, промывают и обрабатывают как описано в примере 1 Полученный экстракт подвергают ультрафильтрации на специальном ультрафильтре для отделения низкомолекуляр