Способ получения иммобилизованной пероксидазы Советский патент 1980 года по МПК C07G7/02 C07G7/22 

Изобретение относится к области получения иммобилизованных ферментов, в частности, пероксидаз. Пероксидазы, иммобилизованные на полимерных носителях, в настоящее время используются для предотвращения роста микроорганизмов в реакторах, для холодной стерилизации жидкостей (например, пища и медицинские жидкости), для повышения стойкости пива к холодному помутнению. Наиболее близким к изобретению по технической сущности и достигаемому ре зультату является способ получения иммобилизованной Пероксидазы путем обра- ботки полимерного носителя на основе модифицированного полистирола водным раствором Пероксидазы хрена в присутствии бикарбоната натрия при О-4 С . Про должительность обработки 2О ч р.. Недостатками этого способа являются использование Пероксидазы из хрена (сло ность и дороговизна получения фермента) длительность обработки носителя раствором пероксйдазы, проведение процесса иммобилизации при низких температурах, а также использование синтетического полимерного носителя, процесс получения которого длителен и многостадиен. Цель изобретения - упрощение процесса. Это достигается известным способом получения иммобилизованной пероксйдазы путем обработки полимерного органического носителя, в качестве которого используют альгинатное волокно, культу- ральным фильтратом базидиального гриба Cerrer a maxima при 18-22°С в течение 10-ЗО мин. Предлагаемый способ отличается от известных, использованием пероксйдазы - продукта микробиологического синтеза культурального фильтрата Сеггепа matirna использованием, в качестве носителя аль- гинатного волокна, проведением процесса обработки при 18-22°С в течение 1О30 мин. Предлагаемый способ позволяет ис пользовать более доступную и дешевую пероксидазу, -отсутствует пеобходимосгь осуществления слож}юго синтеза носите ля, процесс проводят при комнатной тем- пературе и в течение небольшого проме- жутка времени. Способ отличается простотой и хоро« шим качеством получаемого продузгга (выход по. активности достигает 8О100%). Способ осуществляют следующим об« разом. Фермент пероксидаза получают выра™ щйванием базидиального гриба Сеггепа ma.ivbaB культуре пoвepкнocтны I спо собом на питательной среде, содержащей Юг глюкозы,. 3 г пептона, 1 г КН.РОд,, 0,5 г Mg-SO и 1 л водопроводной воды. Продолжительность Быращ1шания гриба составляет 7-8 сут при температуре 26°С. Данный штамм гриба синтезирует внеклеточную пероксидазу. Активность фермента составляет 6,37 ед/мг белка, Активность фермента определяют по окис леншо бензидина. Навеску альгинатного воло1ша обрабатывают в течение мин культураль ным фильтратом, полученным в результа те выращивания гриба Сеггепа тампю По окончании сорбции продукт промываю дистиллированной водой. Анализ полученных данных показывае наличие высокой антимикробной активнос ти препарата иммобилизованной перокси дазы, пол ученного по предлагаемому спо собу. Волокна обладают высокой степенью чувствительности в отношении грамо трицательньзх бактерий (EscherichiacoE-i . что определяет возможность использования его для санации жидких сред. Пример 1. О,2г альгинагного олокна обрабатывают в течение 10 мин при 22 С 5 мл культурального фильтрата базидиального гриба Сеггепа moMhidc активностью 0,357 ед/мл. Продукт отмывают дистиллированной водой. Получают препарат с активностью 0,139 ед/мг носителя (88% от исходной). Пример 2. 0,2 г альгинатного волокна выдерживают в 5 мл культураль- ного фильтрата базидиального гриба при температуре 20 С в течение 20 мин. Продукт отмывают дн- стиллированной водой. Получают препарат с активностью 0,158 ед/мг носителя (1ОО% от исходной). Пример 3. 1г альгинатного волокна выдерживают в 15 мл раствора культурального фильтрата базидиального гриба (i,errev a maxima , содержащего пероксидазу, при в течение 30 мин. Продукт отмывают дистиллированной водой. Получают препарат с активностью 0,095 ед/мг носителя (1ОО% от исходной) , Формула изобретения Способ получения иммобилизованной пероксидазы путем обработки органического полимерного носителя раствором, содержащим фермент - пероксидазу, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, в качестве носителя используют альгинатное волокно, в качестве раствора, содержащего пероксидазу культуральный фильтрат бааиаиального гриба Cerrerid , а обработку им носителя осуществляют при 18-22С в течение 10-30 мин. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Патент США № 3860486, кл. 195-68, опублик. 1975 (прототип).