Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий Советский патент 1980 года по МПК C12N1/20 

Изобретение относится к макробиоло гической и молочной промышленности и .может быть применено при производстве заквасок с использованием бифидобакте рйй. Бифидобактерии являются облигатными анаэробами и отличаются чрезвычай сложными Питательными потребностями. Известна среда для выращивания бифидобактерий, включающая гидролизо ванное панкреатином молоко, пептон 2% поваренную соль 0,3% цистеин 0,02%, агар-агар .0,075%. В этой среде дефицитный и дорогостоящий печеночный бульон заменен более дешевым и досту ным панкреатиновым гидролизатом обез жиренного молока ijСреда МЯИИЭМ не устраняет всех не достатков печеночных сред, так как в ее состав входят дефицитные и дорогостоящие цистеин и пептон. Кроме .того, приготовление гидролизованного молока по Богданову занимает-не менее 24 ч, что создает определенные трудности на производстве. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому является питательная среда для накопления био массы молочнокислых бактерий, в том числе и бифидобактерий, включающая ферментативный гидролизат обезжирен-, ного молока, глюкозу и трехзамещенную соль натрйя За основу предлагаемой среды взято обезжиренное молоко, белки которого гидролизованы протомезентерином или какой-либо другой нейтральной протеиназой. Хорошие результаты были также получены при гидролизе белков молока, пепсином, однако, при использовании пепсина рН молока следует доводить до 4,5 с последующим раскислением среды до значения рН 7,2-7,4. Гидролиз белков молока продолжается в течение 2 ч при оптимальных температурах и рН для каждого протеолитического фер мента 21 . Однако эта среда также не устраняет отмеченных недостатков и недостаточно богата ингредиентами, обеспечивающими быстрое накопление биомассы. Цель изобретения - повышение выхода биомассы. Поставленная цель достигается тем, что известная среда дополнительно содержит кормовой концентрат витаминов группы В, кукурузный экстракт. .агар-агар манннт, гидрат сернокислой закиси железау соль этилендиаминотетрауксусной кислоты, а из солей на рия используют трехзамещенный цитрат натрия, при следующем соотношении компонентов, вес.%: Трехзамещенный 0,9-1,0 цитрат натрия Глюкоза 0,9-1,0 Кукурузный экстракт 0,9-1,0 Кормовой концентрат 0,03-0,06 витаминов группы В Соль этилендиаминотетрауксуной кислоты 0,008-0,012 0,075-0,08 Агар-агар Гидрат сернокислой 0,01-0,015 закиси железа 0,0008-0,000 Маннит Ферментативный гидролизат обезжиОстальноеренного молока В качестве источника солей этилендиаминотетрауксусной кислоты использ ют препарат - трилон-Б. Сущность изобретения состоит в сл дующем .« В гидролизаты обезжиренного молока вводят 0,3-0,6% КМБ-12- кормовой концентрат витаминов группы В, серий но выпускаемый промышленностью, кото рый оказывает стимулирующее действие на рост бифидобактерий. Компоненты среды - 0,9-1% глюкозы которая обладает заметными редуцирую щими свойствами и является хорошим энергетическим источником для бифидо бактерий, и 0,9-1% трехзамещенного цитрата натрия, который обеспечивает буферность среды и поддерживает ее белковые компоненты в растворенном состоянии. Последнее обстоятельство очень важно при отделении биомассы бифидобактерий от культуральной среды. В качестве дополнительного источника ростовых веществ в среду дабавляют 0,9-1% кукурузного экстракта Для обогащения сред анаэробов 5Нгруппами и снижениях их редокс-потен циала применяют некоторые хелатные соединения, например зтилендиаминоте рауксусная кислота (ЭДТА), которые связывают ионы меди и поддерживают SH-группы в активном состоянии в при сутствии кислорода. Поэтому в среду вносят соли ЭДТА в виде промышленног препарата Трилон--Б, широко используемого в промышленности для смягчения воды в котельных установках. Кроме того, в среду для бифидобак терий включают 0,01-0,015% Fe 04 7 (0,002% Fe ) и 8-9 мг/л маннита Для уменьшения скорости диффузии .кислорода из воздуха в среду вносят 0,075 агар-агара. Пример . ВЮОл водопроводной воды вносят 3 кг обезжиренного молока распылительной сушки. После тщательного перемешивания смесь нагр вают до 55°С, доводят рН с помощью 20%-ного раствора NaOH до 6,7fO,l. Добавляют 11 г протомезентерина активностью 200000 ед, и вьвдерживают 2 ч. После чего в смесь быстро вносят 1 кг глюкозы, 1 кг трехзамещенного цитрата натрия, 1 л кукурузного экстрата, 50 г КМБ-12, 10 г FeS04 , 0,75 г агар-агара, 10 г трилона - Б и 800 г маннита и все содержимое перекачивают ферментер. Получают среду следующего состава , Обезжиренное восстановленное молоко (3 кг сухого обезжиреного молока на 100 л ВОДЫ), белки которого гидролизуют в течение 2 ч при 55С и рН б,7±0,1 протомезентерином до 100 Глюкоза1 Трехзамещенный цитрат натрия Кукурузный экстракт КМБ-12 Трилон-Б Fe5O4-7H2 0 Лгар-агар Ман.нит 0,0008 рН среды 6,7. Стерилизация 15 мин при 121С. Готовую среду в 100-литровом ферменте, марки ЛКБ инокулируют 10% культуры бифидобактерий (штаммы № 1, используемые при профилактике и лечении желудочно-кишечных заболеваний). Накопление биомассы бифидобактерий осуществляют в течение 24 ч с периодическим раскислением среды. Дальнейшие технологические операции по приготовлению сухого препарата бифидобактерий ведут по заданному отделом микробиологии ВНИИМСа режиму. В результате испытаний установлено следующее: предлагаемая среда не предсталяет каких-либо трудностей для приготовления, не содержит дефицитных компонентов; среда обеспечивает нормальные условия для роста бифидобактерий; из 100.л испытуемой среды получено 600 г сухого препарата, содержащего в 1 г 500 млн колонийобразующих единиц бифидобактерий; предлагаемую среду можно использовать для промышленного производства препаратов бифидобактерий. Формула изобретения Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий, включающая ферментативный гидролизат обезжиренного молока, глюкозу и трехзамещенную соль натрия, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода биомассы, она дополнительно содержит кормовой концентрат витаминов группы В, кукурузный экстракт,

агар-агар, маннит, гидрат сернокислой закиси железа, соль этилендиаминотетрауксусной кислоты, а из солей натрия используют трехзамещенный цитрат натрия, при следующем соотношении компонентов, вес.%: Трехзамещенный цит0,9-1,0 рат натрия 0,9-1,0 Глюкоза 0,9-1,0

Кукурузный экстракт Кормовой концентрат

0,03-0,06 витаминов группы В Соль этилендиаминотетрауксусной кис0,008-0,012 лоты 0,075-0,08

Агар-агар Гидрат сернокислой закиси желе0,01 -0,015 за

Маннит0,0008-0,0009

Ферментативный гидролизат обезжиренного молока Остальное 2. Питательная среда по п, 1, отличающаяся тем, что в качестве источника солей этилендиаминотетрауксусной кислоты используют препарат - трилон-Б.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Богданов В.М.Микробиология молока и молочных продуктов, М,, Пищевая промышленность, 1969, с. 296.

2.Авторское свидетельство СССР

5 № 490814, кл. С 12 В 3/00, 1973 (прототип;.