ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ВЫДЕЛЕНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ Российский патент 2003 года по МПК C12N1/20 A61K35/74 

Описание патента на изобретение RU2203944C2

Изобретение относится к медицине, а именно микробиологии, и может быть использовано для выращивания бифидобактерий и количественного определения их при диагностике дисбактериоза кишечника.

Известно использование для выращивания бифидобактерий казеиново-дрожжевой среды и гидролизованного молока (1, 2), среды Блаурокка (в модификации Гончаровой) (3).

Недостатком этих сред является трудоемкость в их приготовлении в лабораторных условиях.

Наиболее близким решением задачи того же назначения к заявляемому изобретению по совокупности признаков является питательная среда для накопления биомассы, содержащая источник азотистого питания - ферментативный гидролизат обезжиренного молока, глюкозу, источник витаминов группы В - кормовой концентрат витаминов группы В, кукурузный экстракт, натрий лимоннокислый трехзамещенный, железо сернокислое 7-водное, трилон Б, маннит, агар-агар (4).

Задача предлагаемого изобретения - повышение вегетирующих свойств среды и упрощение технологии ее изготовления.

Указанный технический результат при осуществлении изобретения достигается тем, что предлагаемая среда дополнительно содержит воду дистиллированную, соду кальцинированную, в качестве источника азотистого питания - питательный бульон сухой, в качестве источника витаминов группы В - экстракт кормовых или хлебных дрожжей, при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:
Питательный бульон сухой - 20,0-30,0
Д (+) глюкоза - 15,0-25,0
Экстракт кормовых или хлебных дрожжей, сухой - 5,0-8,0
Цистеин - 0,45-0,7
Железо сернокислое 7-водное - 0,13-0,18
Агар микробиологический - 1,5-2,0
Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 0,8-1,2
Сода кальцинированная - 0,8-1,2
Среду получают следующим образом.

Пример 1. В 1 л дистиллированной воды последовательно растворяют 20,0 г питательного бульона, 15,0 г Д (+) глюкозы, 5,0 г экстракта кормовых дрожжей, 0,45 г цистеина, 0,13 г железа сернокислого 7-водного, 0,8 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1,5 г агара микробиологического, 0,8 г соды кальцинированной. Смесь нагревают, кипятят 2 мин до полного расплавления агара, фильтруют через ватный фильтр, разливают по 9 мл в стерильные пробирки и во флаконы по 50,0 мл, 100 мл, стерилизуют 30 мин при 112oС.

Перед употреблением среду регенерируют (кипятят на водяной бане в течение 45 мин).

Перед употреблением среду регинирируют (кипятят на водяной бане в течение 10 мин и остужают под струей холодной воды).

Для контроля качества среды использовали культуру второй генерации лиофилизированного тест-штамма Bifidobacterium bifidum-I, полученного из ГИСК им. Л. А. Тарасевича.

При получении первой генерации маточной культуры тест-штамм стерильно вскрывали и в ампулу пастерованной пипеткой вносили 5 мл стерильного 0,85 % раствора хлористого натрия.

По 1,0 мл микробной взвеси пересевали в пробирки с 9 мл предлагаемой и контрольной средами и титровали каждую среду до разведения 10-5 для определения жизнеспособности культуры В.bifidum- 1. Пипетку с культурой опускали на дно пробирки со средой и постепенно освобождали культуру, перемешивая содержимое пробирки, не аэрируя. В процессе разведения перенос микробной взвеси в следующую пробирку производили новой стерильной пипеткой вместимостью 1 мл.

Через 48-72 ч инкубации при (37±1)oС учитывали рост культуры по 4-бальной системе. Затем производили титрование каждой культуры до разведения 10-5 из первых пробирок в соответствующих средах. Дополнительно выращивали культуры (2-я генерация) при той же температуре при инкубации (48±1) ч. После инкубации определяли визуально характер роста культуры В. bifidum-1, учитывали их количество в разведениях с изолированным ростом колоний.

Для культуры бифидобактерий характерен рост колоний в полужидкой среде в виде штрихов размером от 3 и более мм.

Пример 2. Отличается от примера 1 тем, что в 1 л воды растворяют экстракт хлебных дрожжей в таком же (5,0) г количестве вместо экстракта кормовых дрожжей. Далее согласно примеру 1.

Пример 3. Отличается от примера 1,2 тем, что в 1,0 л воды растворяют 25,0 г питательного бульона, 20,0 Д (+) глюкозы, 6,5 г экстракта кормовых дрожжей, 0,55 г цистеина, 0,15 г железа сернокислого 7-водного, 1,7 г агара микробиологического, 1,0 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1,0 г соды кальцинированной. Далее согласно примеру 1.

Пример 4. Отличается от примера 3 тем, что в 1,0 л воды растворяют экстракт хлебных дрожжей в таком же (6,5 г) количестве вместо экстракта кормовых дрожжей. Далее согласно примеру 1.

Пример 5. Отличается от примера 1 и 3 тем, что в 1,0 л воды растворяют 30,0 г питательного бульона, 25,0 г Д (+) глюкозы, 8,0 г экстракта кормовых дрожжей, 0,7 г цистеина, 0,18 г железа сернокислого 7-водного, 2,0 г агара микробиологического, 1,2 г натрия лимоннокислого трехзамещенного, 1,2 г соды кальцинированной. Далее согласно примеру 1.

Пример 6. Отличается от примера 5 тем, что в 1 л воды растворяют экстракт хлебных дрожжей в таком же (8,0) г количестве вместо экстракта кормовых дрожжей. Далее согласно примеру 1.

Результаты биологического контроля предлагаемой и контрольной сред представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемая среда обеспечивала типичный рост маточной культуры В. bifidum-1 и обладала лучшими вегетирующими свойствами по сравнению с контрольной средой.

Предлагаемая среда экономически выгодна, проста в приготовлении, не требует дополнительных затрат в приготовлении. Использование ее в практике здравоохранения будет способствовать улучшению диагностики дисбактериоза кишечника и правильной тактики его лечения.

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ
1. Калина Т.Э. Автореферат (Ростов-на-Дону), 1995 г.

2. Богданов В.М. Микробиология молока и молочных продуктов. - М.: Пищевая промышленность, 1969 г., с. 296.

3. Эпштейн-Литвак Р. В. Методические рекомендации. Вильшанская Ф.Л. (Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника). - М., 1977 г.

4. Эрвольд Т.М., Перфильев Г.Д., Гудков А.В., Белова Г.А. Автор.свид-во 789580, кл. С 12 N 1/20, 23.12.80.0

Похожие патенты RU2203944C2

название год авторы номер документа
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛАКТОБАКТЕРИЙ 2001
  • Балаклеец В.С.
  • Алиева Х.М.
RU2213779C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ Cl. PERFRINGENS 2001
  • Меджидов М.М.
  • Темирханова З.У.
  • Аджиева А.А.
RU2203939C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА (МБТ-БУЛЬОН) 2001
  • Меджидов М.М.
  • Темирханова З.У.
  • Балаклеец В.С.
  • Алиева Х.М.
  • Шоломинская Т.Д.
RU2193061C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АНАЭРОБОВ 1992
  • Курбанова И.З.
  • Кочеровец В.И.
RU2086646C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ШИГЕЛЛ И САЛЬМОНЕЛЛ 2002
  • Меджидов М.М.
  • Аджиева А.А.
  • Курбанова М.И.
  • Сайбудинова З.С.
RU2233885C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ 2001
  • Меджидов М.М.
  • Аджиева А.А.
  • Курбанова М.И.
  • Сайбудинова З.С.
RU2192461C1
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ НАКОПЛЕНИЯ СИБИРЕЯЗВЕННОГО МИКРОБА 2001
  • Омарова С.М.
  • Ахмедова Э.М.
  • Муртузалиева П.М.
RU2214453C2
ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ СЕЛЕКТИВНОГО ВЫДЕЛЕНИЯ САЛЬМОНЕЛЛ 2002
  • Меджидов М.М.
  • Аджиева А.А.
  • Адилова М.А.
RU2233884C2
Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий 1979
  • Эрвольдер Тамара Михайловна
  • Перфильев Геннадий Дмитриевич
  • Гудков Анатолий Васильевич
  • Белова Галина Александровна
SU789580A1
Двуслойная питательная среда для родовой идентификации энтеробактерий 1989
  • Балаклеец Валентина Степановна
  • Шеломинская Татьяна Дмитриевна
SU1631090A1

Иллюстрации к изобретению RU 2 203 944 C2

Реферат патента 2003 года ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ВЫДЕЛЕНИЯ БИФИДОБАКТЕРИЙ

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической микробиологии, и может быть использовано для выращивания бифидобактерий и количественного определения их при диагностике дисбактериоза кишечника. Среда содержит при заданном соотношении компонентов в качестве источника азотистого питания микробов питательный бульон сухой, в качестве источника витаминов группы В экстракт кормовых или хлебных дрожжей, в качестве растворителя белковых компонентов среды трехзамещенный цитрат натрия, D(+) глюкозу, соду кальцинированную, в качестве оксиданта и прооксиданта сернокислое железо, цистеин, а также воду дистиллированную и агар микробиологический. Изобретение обеспечивает улучшение ростовых свойств питательной среды и упрощение способа ее получения. 1 табл.

Формула изобретения RU 2 203 944 C2

Питательная среда для культивирования и выделения бифидобактерий, содержащая источник азотистого питания, источник витаминов группы В, Д(+) глюкозу, цистеин, натрий лимоннокислый трехзамещенный, железо сернокислое 7-водное, агар микробиологический, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит воду дистиллированную, соду кальцинированную, в качестве источника азотистого питания - питательный бульон сухой, в качестве источника витаминов группы В - экстракт кормовых или хлебных дрожжей при следующем соотношении компонентов, г/л дистиллированной воды:
Питательный бульон сухой - 20,0-30,0
Д(+) глюкоза - 15,0-25,0
Экстракт кормовых или хлебных дрожжей сухой - 5,0-8,0
Цистеин - 0,45-0,7
Железо сернокислое 7-водное - 0,13-0,18
Натрий лимоннокислый трехзамещенный - 0,8-1,2
Агар микробиологический - 1,5-2,0
Сода кальцинированная - 0,8-1,2

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2003 года RU2203944C2

Питательная среда для накопления биомассы бифидобактерий 1979
  • Эрвольдер Тамара Михайловна
  • Перфильев Геннадий Дмитриевич
  • Гудков Анатолий Васильевич
  • Белова Галина Александровна
SU789580A1
МОЛОЧНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИДКОГО КОНЦЕНТРАТА БИФИДОБАКТЕРИЙ 2000
  • Ильина Р.М.
  • Молокеев А.В.
  • Байбаков В.И.
  • Никулин Л.Г.
  • Карих Т.Л.
RU2169763C1
КУЗОВ ВАГОНА ПОДВИЖНОГО СОСТАВА И СПОСОБ ЕГО ИЗГОТОВЛЕНИЯ 1992
  • Клаус Альтенбург[De]
  • Йоханн Иванаускас[De]
  • Роман Мюллер[De]
  • Ханс-Петер Кольманн[De]
  • Вольф-Дитер Кобельт[De]
  • Вальтер Хеера[De]
  • Рудольф Плампер[De]
RU2087352C1
Питательная среда для выделения бифидобактерий 1989
  • Критская Ирина Владимировна
  • Гиршович Евгений Семенович
  • Рязанова Лидия Александровна
  • Бевз Нина Ивановна
  • Бордашевская Ирина Анатольевна
  • Гончарова Галина Ивановна
SU1705341A1
Бифидобактерии и их использование в клинике, медицинской промышленности и сельском хозяйстве
Сборник научных трудов МНИИЭМ им
Г.Н.Габричевского
- М., 1986, с.49, 79-82.

RU 2 203 944 C2

Авторы

Балаклеец В.С.

Алиева Х.М.

Даты

2003-05-10Публикация

2001-07-30Подача