Способ определения количества извлекаемого аденозинтрифосфата из почвы Советский патент 1980 года по МПК C12M1/36 C12N1/00 

(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ИЗВЛЕКАЕМОГО АДЕНОЗИНТРИФОСФАТА ИЗ ПОЧВЫ

изобретение относится к почвенной микробиологии и биохимии, в частност к определению содержаний адеяозинтри фосфата в почвах.. Известен способ определения количестна извлекаемого аденоэинтрифосфа та из почвы, включающий внесение навески аденозинтрифосфата в почву с последующей экстракцией и определением аденозинтрифосфата в экстракте по люциферин-люциферазной реакции 1 Для этого в природные субстраты (глину, песок и т.д.) вносят раствор аденозинтрифосфата, экстрагируют аде нозинтрифосфат серной кислотой и затем определяют количество извлекаемо го аденозинтрифосфата. Недостатком-известного способа яв ляется невысокая точность определения аденозинтрифосфата, а также невозможность применения способа для определения количества извлекаемого Аденозинтрифосфата (АТФ) из почв из-за разложения части внесенного АТФ в почве. Цель изобретения - повышение точности определения извлекаемого адено зинтрифосфата. Поставленная цель достигается тем, что навеску вносят в почву в виде лиофилизированных культур микроорганизмов с известным количеством аденозинтрифосфата, перемешивают и обрабатывают кипящей водой в течение 1-2 с. Сущность предлагаемого способа заключается в следующем. К навеске почвы 100 мг добавляют навеску лиофилизированной культуры микроорганизмов (дрожжей или бактерий) , содержащую 1-3 мкг аденозинтрифосфата. Затем аденозинтрифосфат экстрагируют 4-5 мл кипящей воды, центрифугируют полученный раствор и в супернатанте определяют аденозинтрифосфат по люциферин-люциферазной реакций . Выход аденозинтрифосфата определяют с введением поправочного коэффициента по формуле , где X - выход АТФ с учетом поправочного коэффициента; к - поправочный коэффициент, равный (а. - &}jc; а - количество АТФ в почве с внесенной культурой; в - количество АТФ в почве без . учета коэффициента; с - количество АТФ, внесецное в почву в виде лиофилизированной культуры. . П р и м -е р 1, к 100 мг почвы (вышелоченный чернозем) добавляют 1 мл раствора АТФ в концентрации 1 мкг/мл. Затем добавляют 4-5 мл кипящей воды и выдерживают 2 с,извлекают АТФ и определяют люциферин-люци фераэным методом. Параллельно опреде ляют АТФ в почве. Количество АТФ сос тавляет соответственно 0,32 и 0,30 мкг/г, т.е..в почве произошел практически полный распад внесенного АТФ, поправочный коэффициент в данном случае равен единице. Следовательно, известный способ определения АТФ в субстрате не может быть применен для оценки- количества извлекаемого аденозинтрифосфата- из почвы. П р и м е р 2. К 100 мг почвы (выщелоченный чернозем) прибавляют лиофи лизированную культуру бактерий содержащую 1 мкгАТФ. Д:|дее все операции проводят как в примере 1, только в кипящей воде навеску выдерживают1 с Количество выделенного АТФ из почвы с культурой составляет О j9 мкг,а содержание АТФ в черноземе - 0,3 мкг. Поправочный коэффициент, рассчитанный по -приведенной выше формуле, равен 0,6, а содержание АТФ в ч рноземе с учетом поправки - 0,5 мкг, вместо О,3 мкг. Примерз, к дерново-подзолистой почве (100 мг) добавляют лиофилизированную культуру дрожжей в коли- честве 3 мкг, выход АТФ равен 0,13 мкг а после введения поправочного коэффициента, равного 0,8-0,16 мкг. Таким образом, при внесении в почву аденозинтрифосфата в виде лиофиЯизированных культур микроорганизмов точность определения аденозинтрифос-. фата повышается на 20-40% . Формула изобретения Способ определения количества из-г влекаемого аденозинтрифосфата из почвы, включающий внесение навески аденозинтрифосфата в почву с последующей экстракцией и определением аденозинтриф,осфата в экстракте по люциферин-люциферазной реакции, о т л и чающийся тем, , с целью повышения точности определения, навеску вносят в почву в виде лиофилизированных культур микроорганизмов с известным количеством аденозинтрифосфата, перемешивают и обрабатывают кипящей водой в течение 1-2 с. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе, 1. Ausmus В.. The use of the ATP , ssay in Terrestrial Decomposition Studies, Bull. Ecol. Res. Comm 7, 223-234. 1973.