0-Трифосфорный эфир 4-метил-5- @ -оксиэтил-N-(2 @ -метил-4 @ -аминопиримидил-5 @ -метил) тетрагидротиазолия полуфосфат,обладающий в @ -антивитаминной активностью Советский патент 1981 года по МПК C07F9/09 A61K31/675 

МатографИрованием полученной смеси фосфатовтетрагидротиамина.

Пример 1. Получение 0-Трифосфорного эфира 4-метил-5 -окси 3T«n-N-(2 -метия-4 -аминопиримидил-5 -метил)-тетрагидротиазолйя-яолуфо фата.

К однородной массе, содержащей ,4,0 рртофосфррной кислоты, обезвоженной в аакууме при в течение 6 ч, и 4,0 г фосфорного ангидрида, прибавляют 2,0 г (0,074 моль) тетрагидротиамина, синтезируемого из фармакопейного препарата . Реакционную смесь при 107 С перемешивают 30 МИН, затем охлаждают до , прибавЯ51Ют 9,6 г измельченного льда и перемешивают до полного растворения. РйСтвор выливают в 160,0 мл безводноIO ацетона при температуре и оставляют на холоду до следующего дня. Отстоявшийся водно-ацетоновый слой отделяют и в остатке получают 4,0 г смеси фосфатов тетрагидротиамина, включающей в виде побочного

йродукта реакции фосфорилирования 0-трифоЬфорный эфир 4-метил-5-1 -окси этил-М- (2 - метиЛ-4 -аминопиримидил-5-метил) -тетрагйдротиазолйя полуфосфат. На колонке 1 20 см катионообменйой смолы Dowex SOW фирмы Don Chemical Со USA 50-100 меш (Н -форма) при автоматическом отборе фракций при скорости истечения 18 мл/ч выделяется 125 мг 2 х целевого продукта..

На фиг. 1 представлен полный профиль элюции смеси тетрагидротиаминфойфатов. В качестве элюента используют воду. Контроль выхода 0-трифосфррйого эфира 4-метил-5 (3-окси.этил§(2 -Метиламинопирим 1дил-5 -метил) -уеф,рагаярЬтиазолия полуфосфата осу14ёствляют спектрофотометрически (дли на волны 269 им, фиг. 2) и методом бумажной- восходящей хроматографии в системе н-пропиловый спирт вода: :Д/15- М цитратный буфер рН : 5,0 в соотношении 7:2:1 на ватмане FHtr.ah.11 за 10-12 ч. Кислый водный раст.Sop препарата упаривают на роторном испарителе при комнатной температуре

.высушивают в вакуум-эксикаторе до :состояния стеклообразного вяз.кого масла желтого цвета, хорошо растврримого в воде.

Найдено,%: Р 19,8; N 9,5.

,N40lof9S 1/2 НзР04. . . Вычислено,%: Р 19,5; N 10,0.

(Зоотношение грамм-атомов органически, связанного фосфора к числу rp tMM-молей тётрагйдрртиамина из аликвоты водного раствора с максимальным содержанием препарата равно

:2,99. ТрифоСфаттетрагидротиамина полуфосфат хроматографически однрроден Ив указанной системе разделения имеет R 0,094. Ультрафиолетовый СПе-ктр поглощения 7,4 X раствоа препарата в 0,02 М К, Na-фосфатом буфере,снятый на регистрирующем вухлучевом спектрофотометре UV Vis Specord (фиг. 2, позиция 2) очти идентичен спектру поглощения самого тетрагидротиамина (фиг. 2,позиция 1) и при длине вРлны 269 им 6080 см.

Пример 2 . Определение В -антивитаминной активности 0-трифосфорногр эфира 4-метил-5 р-оксиэтил-Г -(2 -метил-4-аминопиримидил-5-метил) -тетрагйдротиазолйя полуфосфата (ТГТ-ТФ).

в качестве объекта испытаний выбран наиболее чувствительный В,-витаминзависимый фермент - пируватдегидрогеназа печени и сердца животных. Для сравнительной оценки биологической активности описываемого соединения в тех же условиях и дозах испытывали сильнейшие антивитаминные аналоги тиамина окситиамин (ОТ) и пиритиамин (пт), В опыте использовали белых мышей обоего пола средним весом 18,0 г в количестве: группа с ОТ - 7, группа с ЦТ - 7, группа С тгТ-ТФ - 11, контрольная группа животных -24.Способ введения препаратов - одноразовая подкожная инъекция при физиологическом значении рН водных растворов. Доза введения - 1 мг/100,0 г веса животного. Через 3 ч после одноразовой подкожной инъекции окситиамина, пиритиамина и описываемого соединения животных забивали методом декапитации..Исследуемые ткани печени и сердца гомогенизировали на холоду с 0,15 М .раствором хлористого калия в приготовленных гомогенатах определяли активнрсть в - витаминзависимого фермента пирубатдегидрогеназы. Угнетение активности этого фермента .критерий глубин авитаминоза В,. Ак- . тивность фер-мента выражается в мкмоль феррицианида калия, восстановленного в соответствующий ферроцианид при окислении пирбвиноградной кислоты.

В табл. 1 представлены абсолютные значения активности фермента и.данные по величине активности фермента, выра кенные в процентах по отношению к Контролю (контрольные данные приняты за. 100%). Символом Р обозначен критерий достоверности Стьюдента, характеризующий значимость различий. Величины Р . 0,05 принимаются за достоверные .

Активность пируватдегидрогеназы (мк МОЛЬ K.)5 на мг белка за 20 мин) в тканях белых мышей при введении разли 1ных антивитаминов Bj

В табл. 2 представлены данные по Токсичности описываемого соединения и рксйти-амина. .

К.ак видно из данных табл. 1, Описываемый 0-тркфосфорный эфир 4-метил-5 -оксиэтил-N-(2-метил-4-аминопич,иш Дил-5 метил) -тетрагидротиазолия полуфосфат обладает почти в 2 раза более сильным антйвйтамииным воздействием на пируватдегидрогенаэу печени и сердца по сравнению с биологически неактивными а этой дозе изве;|;тными антивитаминами тиамина - оксИтиаминЬм и пиритиаи шном. Сам тетрагидротиамин, его моно- и дифосфорный эфиры антивитаминной активностью практически не обладают после введения животным даже в очень высокой дозе f2..

Таблица 1

Токсичность ЛД мг/кг окситиамина и 0-трифосфор;юго эфира 4-метил-5-й-оксиэтйл-Я-(2 -метил-4 -аминопиримидил-5 -метил)-тетратиазолия полуI

Исследуемый препарат

Окситиамии

0-трифосфорный эфир 4-метил-5 р-оксиэтил Н-(2 -метил-4 -амш нопиримидил-5-метилС-тетрагидротиазолия пояуфосфат Формула изобретения 0-Трифосфорный эфир 4рметил-5 .оксиэтмл-М-(2-метил-4 -амИнопири мидил-5тметил)-тетрагидротиазодия полуфосфат формулы GHa-N-ЮН 4/2HjPOjN f NHi t.CH5)i-0-|-0-f-0-l-OH

Т а б л и ц а 2 фосфата

Эффективная доза ЛД,. мг/кг

340 293 ±394

730 707 :750 обладающий В. -aнтивитa в ннoй активностью. Источники информации, Принятые во внимание при экспертизе 1.Островский Ю.м. Антивитамины в экспериментальной и лечебной практике. Издательство Наука и техника, Минск, 1973. 2.Доста Г.А. и др. Материалы 5-го 1 дненского симпозиума 20-22.09.78. . %1, S5. .