Способ исследования энергообмена сердечной мышцы Советский патент 1989 года по МПК G01N33/48 

I

Изобретение относится к биохимии, в частности к экспериментальной витаминологии и кардиологии, и может быть использовано для ингибирования активности пируватдегидрогеназы сердца лабораторных животных при изучении роли различных энергодающих механизмов, обеспечивающих работу сердца.

Цель изобретения - повышение степени ингибирования активности пируватдегидрогеназы сердца животных за счет использования тетрагидроокси- тиаминтрифосфата.

Пример 1. Тетрагидроокси- тиамин. Раствор 5 г (0,02 моль) тет- рагидротиамина в 50 мл 20%-ной НС1 кипятят в течение 6 ч. По охлаждении раствор упаривают под уменьшенным давлением (10-20 мм рт. ст., 50- ), остаток высушивают в вакуум- эксикаторе над и дважды кристаллизуют из этанола. Выделяют 5,6 г (98%) хлоргидрата тетрагидро- окситиамина (С ,Н ,gN ) в виде бесцветных кристаллов ст. пл. 182-

183 С и Rf 0,48 (н-бутанол:этанол: . вода 2:1:1), бумага FN5). Полученную соль растворяют в 15 мл воды и ней- . трализуют 2 н. раствором едкого наг- . ра (9 мл) . Выпавший в осадок тетра- , .гидроокситиамин - основание отфильтровывают и перекристаллизовывают из горячей воды. Выход 4,2 г (85%), т. пл. 215-21 7 С и Rf 0,74 (н-бутанол: этанол: вода 2:1:1, бумага FN5).

Тетрагидроокситиаминтрифосфат. К однородной массе, содержащей 4 г (41 ммоль), обезвоженной при Н2Р04 и 4 г (28 ммоль) , прибав.ляют 2 г (7,5 ммоль) тетрагидроксити- амина.Реакционную смесь перемешивают в течение 15 мни при 1 Ю С,охлаждают до

и прибавляют 10 г измельченного

льда.Полученный раствор выпивают в 200 мл охлажденного до (-5)-(10) С без- водного ацетона.Через 1 сут маслообразный осадок отделяют, растворяют в 5 мл воды, нейтрализуют 25%-ным раствором до рН 5-6, наносят

на колонку (1,5 х 4,0 мм) с Dowex 50

(Л

(ь I

00

3

(Н -форма) и элюируют водой. Фракщ с Rf 0,25 (н-пропанал°:К Na -фосфатный )ep рН 5: вода 7:2;:1, бумага FN5) упаривают под уменьшенным давлением (8-10 мм рт. ст.., 20-30°С)5 остаток дважды обрабатывают безводным ацетоном. Получают 0,3 г (8%) целевого продукта в виде аморфного бесцветного гигроскопичного порошка нерастворимого в углеводородах, эфире и ацетоне. УФ-спектр (рН 7,4), Лл,о,кс , нм (lgE):227 (3„66), 270 (3,54); ИК-спектр (суспензия в вазелиновом масле), л), 3460- 3270(ОН„сс), 2740-2620 (Р-ОН«ос), 1633, 1540(, ), 1373(C-N), 1250(), 1080, 893(Р-0-С).

Пример 2, Используют 5 груп (по 6 животных в каядой) белых мыше самок массой 18-20 г. Препарат вводят животным в виде водного раствора объемом 0,2 мл однок1)атно подкожно в дозах 10 мг/кг (1 группа). и 100 мг/кг (2 группы). В качестве контроля используют йнтактных живот ных (2 группы), Забой животных (дек питацией) проводят одновременно в опытной и контрольной группах через 3 ч и 3 сут после инъекхщй, т.е. в сроки максимального падения активности соответственно пируватдегидро теназы и транскетолазы тфи применен различных, известных антагонистов ти мина.

Активность пируватдегидрогеназы определяют по методу Гублера транск толазы по методу Брунса, а содержание белка - по Лоури. i Экспериментальные данные обраба- тьшают статически с применением t- критерия Стьюдеита.

Активность пируватдегидрогеназы (в мкмоль (CN)J/r белка за- 20мин) и транскетолазы (в мкмоль седогепту- лозо-7-фосфата/г ткани за 1 ч) в с.ердце белых мышей после однократного подкожного введения тетрагидроокси- тиаминтрифосфата и тиохромтрифосфа- та приведена в табл.

Анализ экспериментальных данных (таблица) показывает, что введение тетрагидроокситиаминтрифосфата в предлагаемом способе и тиохром- трифосфата в известном способе в

дозе 10 мг/кг вызьшает практически одинаковый ингибирующий эффект в отношении Пируватдегидрогеназы сердца, снижая ее активность на 43 и 38% соответственно. .Увеличение вводимой дозы препарата в известном способе до 200 мг/кг позволяет увеличить ингибирующий эффект лишь до 57%, в предлагаемом способе в два раза меньшая доза тетрагидроокситиаминтрифосфата (100 мг/кг) позволяет практически полностью заингибиро- вать активность пируватдегидрогеназы сердца (на 87%), не изменяя при этом активности транскетолазы.

Ф ормул а из об ре т е н и

Способ исследования знергообмена сердечной мьшщы путем ингибирования пируватдегидрогеназы сердца животных йареятеральньм введением антагониста тиамина, отличающийся тем, что, .с целью повьштения степени ингибирования, в качестве антагониста тиамина вводят тетрагидроокси- тиаминтрифосфат в дозе 10-100 мг на 1 кг массы.

Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - повышение степени ингибирования. Препарат вводят животным в дозе 10-100 мг/кг и определяют активность пируватдегидро- геназы. Использование тетрагидроок- ситиаминтрифосфата позволяет на 87% ингибировать активность пируват- дегидрогеназы сердца, не изменяя при , этом активности транскетсшазы. 1 табл.