Способ получения конъюгированногоС бЕлКОМ АМиНАзиНА Советский патент 1981 года по МПК G01N33/48 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОНЪЮГИРОВАННОГО С БЕЛКОМ АМИНАЗИНА Получение конъюгированного антигена аминаЗИН-бычий сывороточный альбумин , К смеси 260 мг (0,5 моль) п-аминодифенилазоаминазина и 10 мл концентрированной соляной кислоты при температуре -10 С добавляют 35 мг (о, 55 моль) нитрита натрия в 2 мл воды. Реакционную смесь выдерживают при охлаждении и перемешивании в течение 30 мин. Полученный раствор прибавляют при температуре 0-10°С к раствору 500 MI- (0,072 ммоль ) бычьего сывороточного альбумина в 10 мл воды, под держивая рН 7-9 добавлением 10%-ного раствора гидроокиси натрия. Смесь оставляют на ночь при температуре 0-4 С Полученный яркоокрашенный раствор конъюгированного антигена аминазинбычий сывороточный альбумин очищают от низкомолекулярных примесей диализом против дистиллированной воды в течение 6 сут. После удаления воды лиофильной сушкой получают 500 мг сухого порошкообразного целевого про дука. Содержание ковалентно связанного аминазина в синтезированном конъюгированном антигене определяют спект- рофотометрически по разнице введенного в реакцию и непрореагировавшего п-аминодифенилазоаминазина по извест ному способу . Устанавливают удельное поглощение низкомолекулярной фракции выделяемой после диализа из реакционной смеси. Для этого п-аминоДифенилазоаминазин обрабатывают в условиях, аналогичных условиям реакции ковалентного связывания, но в отсутствии белка, и изучают УФ-спектр полученной смеси. Установлено, что пог лощение ее в концентрации 1 мг/мл в пересчете на исходный п-аминодифенилазоаминазин при 280 нм составляет 10,0. Количество п-аминодифенилазоаминазина (в мг) , не вступившего в реакцию с белком, рассчитывают пЪ фор где V и EV - объем и поглощение при 280 нм низкомолекулярной фракции, выделенной после реакции. По данным спектрофотометрии рассчитывают, что из 260 мг производного аминазина в реакцию с белком вступило 80 мг. Таким образом, при указанном соотнсяиении исходных компонентов получают конъюгированный антиген аминазин-бычий сывороточный альбумин, содержащий 21 остаток аминазина ковалентно связанные с 1 моль белка. Пример 2. По вышеописанной методике из 300 мг (0,58 моль) памиаодифенилазоаминазина и 3 г (0,045 моль) бычьего сывороточного альбумина получают конъюгированный антиген аминазин-бычий сывороточный альбумин, содержащий 9 моль производного аминазина, ковалентно связанных с белка. Применение предлагаемого способа позволяет повысить конверсию реакционноспособного производного аминазина в б раз, исключить из процесса целый ряд реактивов и растворителей, удешевить способ получения конъюгирован|ных антигенов аминазин-белковый антигенный носитель . Формула изобретения Способ получения конъюгированного с белком аминазина путем проведения реакции комштексообразования реакционноспособного производного аминазина с белком, отличающийс я тем, что, с целью повышения содержания аминазина в конъюгате и упрощения способа, в качестве реакционноспособного производного аминазина используют п-аминодифенилазоаминазин и реакцию коплексообразования ведут с бычьим сывороточным альбумином. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Патент США № 3976763,кл .424-1,5 , 24.08.76.