Способ получения монотерпенов Советский патент 1981 года по МПК C12P7/64 

1

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно, к способу получения монотерпенов: гераниола, нерола и линалоола, используемых в парфюмерной, мыловаренной, пищевой и фармацевтической промышленности.

Известен способ получения монотерпенов путем культивирования их продуцентов - низших грибов на питательной среде, содержашей источники углерода, азота и минеральные соли, в условиях аэрирования 1.

Известный способ предусматривает получение смеси монотерпенов с помощью низшего гриба Ceratocystis moniliformis при выращивании его на питательной среде, содержащей в 1 л 30 г декстрозы, аминокислоты в количестве, эквивалентном по азоту 1 г мочевины, минеральные соли, микроэлементы, 0,1 г тиамина и 5 мкг биотина. При этом максимальное накопление смеси терпенов происходит на пятый день и составляет для гераниола, нерола и линалоола в сумме 26 кг/л жидкой среды.

Педостатками этого способа являются относительно невысокий выход смеси терпенов, использование дорогой питательной среды и значительная продолжительность времени культивирования (5 дней).

Цель изобретения - повышение выхода монотерпенов.

Цель достигается тем, что в качестве продуцента используют штамм Eremothecium ashbyii, а в качестве источников углерода и азота - соответственно глюкозу и янтарную кислоту, пептон и хлористый аммоний.

Способ заключается в следующем. Монотерпены синтезируются грибом Eremothecium ashbyii, развивающимся аэробно при 25-30°С в жидких питательных средах, содержащих в качестве источника углерода глюкозу (7,5-10 г/л) и янтарную кислоту (1-2 г/л), в качестве источника азота - пептон (4 г/л) и хлористый аммоний (0,5-1 г/л), а также минеральные соли: MgSO4 0,05-0,1 г/л и К2НР04 0,2-0,5 г/л. Начальная величина рП среды 5,5-6,5. После 2,5-3 сут культивирования синтезируемые грибом монотерпены накапливаются в культуральной жидкости в количестве 57,5-96,5 мг/л в соотношении гераниол : нерол : линалоол 1:1:0,4. Для идентификации монотерпенов используют методы газо-жидкостной и тонкослойной хроматографии.

Следовательно, при меньшей продолжительности культивирования на более дешевой питательной среде выход монотерпенов

возрастает в 3,5-4 раза на 1 л питательной среды.

Пример 1. Двухсуточную культуру гриба Eremothecium ashbyii, выращенную в колбах на качалке 28°4:1°С в среде, содержащей мясной бульон 90-100 мг % по NH2; глюкоза 0,25 г; NAC1 0,5 г; готовый посевной материал (2 об. %) нереносят в ферментационную среду (по 100 мл среды в колбах емкостью 750 мл). Состав ферментационной среды г/л: глюкоза 7,5; пептон 2,0; янтарная кислота 0,1; NH4C1 0,5; MgSO4 0,05; К2НРО4 0,2 г. Значение рН 5,5 (устанавливается раствором 1 н. NaOH ). Культивирование гриба (ферментацию) ведут на качалке с 220 об/мин при 28 + ГС в течение 72 ч. К концу ферментации в культуральной жидкости накапливается 25 мг/л гераниола, 25 мг/л нерола и 7,5 мг/л линалоола.

Пример 2. Условия приготовления посевного материала и засева ферментационной среды те же, что и в примере 1. Состав ферментационной среды г/л: глюкоза 10,0 г; пептон 4,0 г; янтарная кислота 2,0 г; iNH4Cl 1,0 г; MgSO4 0,1 г; К2НРО4 0,5 г; рН 6,5. Ферментацию ведут, в 750 мл колбах с 60 мл среды на качалке с 220 об/мин при 28+1°С в течение 66 ч. К концу ферментации в культуральной жидкости накапливается 42 мг/л гераниола, 42 мг/л нерола и 12,5 мг/л линалоола.

Использование низшего гриба Eremothecium ashbyii для получения монотерпенов позволяет повысить выход терпенов в 3,5-4 раза при сокращении времени культивирования почти в 2 раза. Таким

образом, способ является не только продуктивнее, но и производительнее по сравнению с прототипом. Кроме того, питательная среда, используемая для выращивания Eremothecium ashbyii, дешевая и содержит доступные для промышленного получения компоненты.

Формула изобретения

Способ получения монотерпенов путем культивирования их продуцентов - низших грибов на питательной среде, содержащей источники углерода., азота и минеральные соли, в условиях аэрирования,

отличающийся тем, что, с целью повышения выхода монотерпенов, в качестве продуцента используют штамм Eremothecium ashbyii, а в качестве источников углерода и азота - соответственно глюкозу и

янтарную кислоту, пептон и хлористый аммоний.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Lanza Е., Palmer J. К., Biosynthesis of monoterpenes by Ceratocystis moniliformis Phytocemistry, v. 16, p. 1555-1560, 1977.