Способ определения активностиглюКОзО-1-фОСфАТАзы /K.ф.3.1.3.10/ B СпЕРМЕ Советский патент 1981 года по МПК C12Q1/42 

30 мин пробы фильтровали. Влияние концентраций арсената натрия и фтористого Активность фосфатазы глюкозо-1-

натрия на активность неснецифнческих фосфотаз показано в табл. 2. фосфата (к. ф.З.Ч.;з.;10) в свежей и храненной сперме хряка Таблица 1

Цифровые данные обработаны статистически по методу М. А. Ойвина (1960) Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1960, № 4, с. 76-85 ,95 (,01) К 2 мл трихлоруксусного фильтрата добавляют 2 мл молибденового реактива, смешивают в соотношении 1 : 1 5%-ный рас- 5 твор молнбденовокислого аммония |ЫН4|бМо7О24-4Н2О1 с 5%-ным раствором серной кислоты (H2S04). В качестве восстановителя вносили 1 мл насыщенного раствора тиомочевины (H2CSNH2), раство- 10 ряют 9 г тиомочевины в 100 мл дистиллированной воды. Содержимое пробирок хо-. рошо смешивали и ставили в водяную баню на 10 мин при 38°С. После охлаждения до комнатной температуры пробы калориметрнровалн на ФЭКМ при 590-610 ммк (красный светофильтр). Одновременно ставили слепую пробу, где вместо фильтрата брали дистиллированную воду и стандартную пробу с известной концентрацией фос- 20 фора. Для приготовления стандартного раствора фосфора брали навеску калия фосфорнокислого однозамещенного (КН2Р04) 0,4394т и растворяли в 1 л дистиллированной воды, в однолитровой мерной колбе. 25 1 мл раствора содержит 0,1 мг или 100 мкг (микрограмм) фосфора. После по пропорции высчитываем концентрацию фосфора в 1 мл фильтрата, которое умножаем на 4,5 и получаем количество .30 15 Например, в 1 мл исследуемого материала выявлено 0,6190 мг неорганического фосфата, концентрация спермиев в 1 мл, подсчитанных при помощи камеры Горяева 0,212 миллиарда. Высчитываем rio пропорции активность на 10 спермиев. 0,212-0,6190 1000-л: 1000x0,6190 2,920 мг о; 212 Если учесть, что 1 спермий хряка имеет 125 кубических микрона и полученное количество отщепившегося неорганического фосфата в микрограммах разделить на 125, тогда получим активность, выраженную в микрограммах, неорганического фосфата на 2920 мг 23,36 мкг/ммз. мм массы спермиев Если учесть, что микромоль глюкозо-1фосфата соответствует 31 микрограмму неорганического фосфата, тогда мы делим 23,26 мгк ,,„..„,„ „- и,/оЗ мкм/моль на мм массы спермиев. Кроме того, полученные данные в 1 мл исследуемого материала умножаем на 100 и получаем активность на 100 мл спермы.

(N

« Я E Ч Ю га Н

g« а

i-

s

g«

Ss

|

Н 5 u-Sо u

к о

if S

fi

S ч Я tftsO

S f-°

iSa

u ЯГ-. S ЛП

ss«

t4 M Q4

s.

li

e

So

,

и в e S

l§.i

B

S f OR

R a: S S R a Cu Cu at

H ХЮ

ее ,.

IS gg-s

ss

a

S«

«2

§M 12

R)

H| X g

l§

§e ж

II

as 1

я 5

gt

ч о «9

Формула изобретения

Способ определения активности глюкозо-1-фосфатазы (к. ф. 3.1.3.10) в сперме, преимущественно хряков, включающий введение пробы спермы в реакционную смесь, содержащую трис-НС1-буфер, калиевую соль глюкозо-1-фосфата с последующим инкубированием, добавлением раствора трихлоруксусной кислоты для прекращения реакции, отличающийся тем, что,

с целью повь1шения точности оцреДеления активности, церед введением пробы спермы в реакционную смесь вносят фтористый натрий и арсенат натрия при следующем соотнощении компонентов, мкг/мл:

Фтористый натрий139,97-279,93

Арсенат цат-риц34,67- 69,33

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Асатиани В. С. Ферментные методы анализа, 1969, с. 503-507 (прототип).