Способ определения гидрокортизона Советский патент 1981 года по МПК G01N33/15 

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения гидрокортизона - лекарственного препарата. Известен спектрофотометрический способ количественного определения гидрокортизона, заключаЕощийся в измерении поглощения при длине волн около 525 нм после взаимодействия гидрокортизона с раствором синего тетразолиния l. Недостатки способа - невысокая чувствительность (3 мкг/мл) и неселективность, так как все стероиды которые имеют восстанавливающие функциональные группы oi-кетольного типа (кортизон, преднизолон, прегнин, преднизон и т.д.) мешают опре делению. Известен способ определения гид рокортизона путем обработки пробы анализируемого вещества смесью конц трированной серной кислоты и спирт последующим измерением флюоресценции полученного раствора 2. Недостатки способа - невысокая чувствительность (0,6 мкг/мл) и неселективность,так как все производные циклопентапергидрофенантрена (.преднизон, преднизолон, кортизон, метилпреднизолон, гексаметазон и др в указанных условиях образуют флюоресценцию. Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности способа. Поставленная цель достигается тем, что в :С пособе количественного определения гидрокортизона, заключающемся в обработке анализируемой пробы химическим реагентом с . последующим измерением флюоресценции полученного раствора, в качестве химического реагента используют перекись водорода в солянокислой среде. Спектр флюоресценции полученного при iSTOM раствора лежит в области от 440 до 620 нм с 1максимумом 541 нм, а спектр возбуждения от 320 до 440 нм с максимумом 391 нм. Зависимость между концентрацией гидрокортизона и флюоресценцией, полученная после взаимодействия продукта реакцииJпредставлена в табл.1.

Т а б л и

Ц а

Продолжение табл. 4 ,

Продолжение табл.5

Пример 3. Определение гидрокортизона Б преднизблоне.

0,1 г. (точная навеска) исследуемого образца переносят в мерную колбу на 50 мл, прибавляют 30-40 мл концентрированной соляной кислоты и энергично встряхивают 5-10 мин. Затем концентрированной соляной кислотой доводят до метки. К 10 мл данного раствора прибавляют 1-2 капли 0,Т%-ного раствора перекиси водорода, перемешивают и через 20 мин. флюориметрируют по отношению к стандартному раствору с содержанием 20 мкг/мл гидрокортизона.

Результаты определения гидрокорти зона в преднизолоне (искусственная смесь, содержащая 1% гидрокортизона) представлены в табл.5.

Таблица5

Использование предлагаемого способа позволяет отличать гидрокортизон от других стероидов, а также определять наличие гидрокортизона

в качестве примеси в других стероидах (чувствительность способа 0,01 мкг/мл гидрокортизона).

Формула изобретения

Способ определения гидрокортизо- . на путем обработки пробы анализируемого вещества химическим реагентом с последующим измерением флюоресценции полученного раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения селективности спосо- ба и его чувствительности, в качестве химического реагента используют

перекись водорода в солянокислой среде.

Источники информации, ринятые во внимание при экспертизе 1. Международная фармакопея. Женеа, 1969, с. 275, 767.

2. Папков Ю.А. и Усватова И.Я. Флюориметрический метод определения 11-окси-кортикостероидов в плазме периферической крови. Методы исследования некоторых гормонов и медиаторов. Сборник. М., 1965, с. 137-145 (прототип) .