Штамм LертосрIRа ромоNа ВГНКИ-6 Советский патент 1983 года по МПК A61K39/00 C12N1/00 

Изобретение относится к производству ветеринарных биологических препаратов и представляет собой новый штамм лептоспир, используекый для приготовления вакцин против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных.

Высокая, иммуногенная активность штаммов лептоспир, из которых изготавливается вакцина, является из основных условий, обеспечивающих получение активной вакцины против лептоспироза животных.

В настоящее время в биологической промышленности изготавливают убитую вакцину против лептоспироза из 2439 штаммов лептоспир, относящихся к 6 серологическим группам и содержащую 8 штаммов серологической группы Pomona tl . .

Недостатками известных штаммов лептоспир являются их низкая иммуногенная активность и трудоемкость Процесса получения вакцины из них, связанная с необходимостью применения для их выращивания малопроизводительного баллонного метода.

Цель изобретения - получение штамма лептоспир серологической группы Pomon обладающего высокоактивными в иммуногенном и антигенном отношении свойствами, который можно, использовать при приготовлении поливалентной вакцины против лептоспироза животных, заменяющий штаммы: П-148, П-45, П-8, П-12, П-24, Гиацинт, Вега-2, П-Молдавская, импользуемые в настоящее время, и который позволяет реализовать менее трудоемкий реак0торный метод выращивания лептоспир при изготовлении вакцины;

Для этогоиспользуют штамм Leptospira Ропюпа ВГНКИ-6, который выделен от подсвинка в Московской об5ласти в 1966 году и хранится в коллекции микроорганизмов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов.

Штамм Leptospira Pomona ВГНКИ-6

0 характеризуется следующими признаками.

Морфологические признаки. Обладает характерными для лептоспир морфологическими признаками. При микро5скопии в темном поле микроскопа представляет собой серебристо-белые йлотные .спирали с утолщениями в виде крючков на концах. Витки спирали незаметны при увеличении в 200-0 400 раз, но они хорошо видны в электронном микроскопе. Длина лептоспир 8-17 мк, диаметр 0,1-0,15 мкр. Наиболее отчетливо видны при микроскопии в темном поле и менее отчетливо - при фаэовоконтрастной микроскопии , невидимы при обычном освещении, плохо окрашиваются анилиновыми красками, при импрегнировании серебром становятся темно-коричневыми.

Физиологические свойства. Растет на среде, содержащей 4-5% сыворотки баранов или кроликов с фосфатно-буферной основой при рН 7,2-7,4. Максимум роста при 26-27°С. На 510 день роста накопление 10x10 IG IO лептоспир в 1,0 мл. В последующие сроки роста происходит лизис бактериальных клеток. В жидкой среде подвижны, у них характерное быст.рое ротшдионное движение вокруг оси

и перемещение без полярной дифференциации.

Антигенные свойства. Штамм Leptospira Pomona ВГНКИ-6 сравнивали по антигенным свойствам со смесью производственных штаммов: П-148, П-45, П-8, П-12, П-24, Гиацинт, Вега-2, П-Молдавская в опыте на овцах. Семидневную культуру лептоспир консервирвали 0,5% фенола ивводили овцам внутримышечно в дозе 5,0+5,0 мл двукратно с интервалом 7 и 21 день. При этом установили, что иммуногенные свойства штамма Leptospira Pomona ВГНКИ-6 в 2-5 раз выше, чем иммуногенные свойства смеси производственных штаммов.

Результаты опыта приведены в табл. 1.

Таблица 1

1:640 L. Pomona ВГНКИ-6 Смесь: П-148, П-4 П-8, П-12, П-24, Гиацинт, Вега-2, 1:120 , П-Молдавекая

Антигенные свойства изучали также в опыте на кроликах. Семидневную культуру лептоспир доводили сыво- 40 роточной средой до концентрации 75000 лептоспир в 1 мл, консервировали фенолом до 0,5% концентрации и вводили четырем кроликам весом 2,5кг внутривенно по 1 мл. Через 7, 14,д

21 и 28 дней после введения культуры у кроликов брали кровь и исследовали сыворотку в реакции микроагглютинаиии-лнзиса. При этом сравL. Pomona ВГНКИ-6

Смесь: П-148, П-4 , П-В, П-12, П-24, Гиацинт, Вега-2, П-Молдавская

нивали титр антител кроликов, которым вводили культуру штамма Leptospira Pomona ВГНКИ-6 и смесь производственных штаммов: П-148, П-4Ь, П-8, П-12, П-24, Гиацинт, Вега-2, П-Мол-давская. Установлено, что антигенная активность смеси производственных штаммов в 2-3 раза ниже антигенной активности штамма Leptospira PoFTwna ВГНКИ-6.

Результаты опыта приведены в

табл. 2.

Таблица 2

1:830+170

1:2500+500 1:6401:1801:40 1:3201:80

Как видно из табл. 1 и 2, штамм Leptospi га Ропюпа ВГНКИ-6 отличается от смеси производственных штаммов более активными антигенными свойствами.

Из шести селекционированных штаммов лептоспир, в том числе Leptospira Pomona ВГНКИ-6, были приготовлены опытные серии поливалентной вакцины, иммуиогенные свойства которой изучали на сельскохозяйственных животных в сравнении с вакциной, приготовленной из смеси производственных штаммов. Установлено, что вакцина, изготовленная из шести селекционированных штаммов, создает в 25 раз более напряженный иммунитет, чем вакцина, приготовленная из смеси производственных штаммов лептоспир . :

Внедрение предлагаемого штамма серологической группы Ропхэпа взамен используемлх в настоящее время 8 штаммов лептоспир дает возможность заменить при изготовлении вакцины трудоемкий бсшлонный метод выращивания лептоспир (в 10-12 литровых объемах) реакторным методом выращивания (в объеме 1-2 тыс.л), что значительно упрощает и удешевляет изготовление вакцины.

Формула изобретения

ШТс1ММ Leptospira Pomona ВГНКИ-6, нспользуекый для приготовления вакцин против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных. Хранится в коллекции микроорганизмов Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов.

Морфологические признаки. При микроскопии в темном поле представляет собой серебристо-белые плотные спиреши с утолщениями в виде крючков на концах. Витки спирали незаметны при увеличении в 200-400 раз и хорошо видны в электронный микроскоп. Длина лептоспир 8-17 мкр, диамотр 0,1-0,15 мк. Наиболее хорошо видны при микроскопии в темном поле и менее отчетливо при фазовоконтрастной микроскопии. Невидимы при обычном освещении, плохо окрашиваются анилиновыми красками. При импрегнировании серебром становятся темно-коричневыми Физиологические свойства. Рас0тет на среде, -содержащей 4-5% сыворотки баранов или кроликов на фосфатно-буферной основе при рН 7,27,4. Максимум роста при 26-27 с. На 5-10 день роста накопление 10«10 5 лептоспир в 1 мл. В последующие сроки роста наступает лнзис бактериальных клеток, в жидкой среде очень подвижны, у .них характерно быстрое ротационное движение вокруг оси и перемещение без полярной диф0ференциации .

Антигенные свойства. В опыте на овцах установлено, что антигенные свойства штамма Pomona ВГНКИ-6 в 5 2-5 раз выше, чем антигенные свойства смеси производственных штаммов серогруппы Ропюпа (П-148, П-4, П-8, П-12, П-24, Геацинт, Вега-2, П-Молдавская ). В опыте на кроликах установлено, что антигенная актив0ность бактериальных клеток Leptospira Ропюпа ВГНКИ- в 2-3 раза превосходит антигенную активность смеси производственных штаммов лептоспир.

Иммуногенная активность. Поли5валентная вакцина, изготовленная из данного штамма, содержащегося в числе шести селекционированных штаммов, имела иммуногенную активность в 2-5 раз выше, чем вакцина, приго0товленная из смеси 39 производственных штаммов лептоспир.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

5 и контролю поливалентной вакцины против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных, утверждена 27.05.1968, с. 6.