Водорастворимые декстраны, содержащиеАМиНОАлКильНыЕ пРОизВОдНыЕ ТиОфОСфОРНОйКиСлОТы для РЕгулиРОВАНия ОбРАТиМОйОКСигЕНАции ВНЕэРиТРОциТНОгО гЕМОглО-биНА, и СпОСОб пОлучЕНия ВОдОРАСТВОРиМыХдЕКСТРАНОВ, СОдЕРжАщиХ АМиНОАлКильНыЕпРОизВОдНыЕ ТиОфОСфОРНОй КиСлОТы Советский патент 1981 года по МПК C08B37/02 

- NH(CH4)u- SPOjj H i , где ,2,3,5, и обработку проводят в 0,02 М морфолиновом буфере при рН 7,5-8 и 1530 С с последующими диализом и лио ильной .сушкой целевого продукта. В табл.. 1-:3 приведены данные о влиянии рН среды, температуры и мольности буферного астзора на примере присоединения гаммафоса S-TN - (3-аминопропил) 2-аминоэтил тиофосфорной кислоты к диальдегиддекстрану (м.в. 20000, степень окисления 12).

Таблица 1

Рассуждения, приведенные для данных табл. 1, справедливы и для данных табл. 2.

Таблица2

Оптимальным вариантом условия протекания реакции является такой, при котором гидролиз S-Р-свяэи практически заторможен (), а скорост реакции аминОгруппы с альдегидной достаточно высокая, т.е. процентные содержания фосфора .и серы максимальны и равны (так как их атомнйе веса близки). Из табл. 1 следует, что этому условию удовлетворяет рН 7,5-8. При ,5 уменьшается содержание фосфора по сравнению с серой, что ука/зывает на протекание побочной реакции гидролиза S-P-связи. При увеличении , хотя содержание серы и фосфора одинаково (гидролиза нет), процент присоединенного продукта ниже, в конечном счете увеличивается время проведения реакции. В табл. 2 показано влияние температуры на содержание в конечном продукте серы и фосфора, что также указывает на количество присоединенного аминоалкилтиофосфата.

60000

Т а б,л и ц а 4

2,0 2,0 1,7 1,9 Оптимальный температурный интервал 15-ЗООс. В табл. 3 приведено влияние молярности мррфолинового буфера на время реакции и время диализа. Т а б л и ц а 3 Из данных табл. 3 видно, что суммарное время проведения реакции и диализа наименьшие при использовании 0,02 м морфопинового буфера. При молярности менее 0,01 М трудно поддерживать рй 7,5-8 из-за низкой буферной емкости. Коэффициенты тип округляют при расчете до целых чисел. Коэффициенты m,n,k и содержание серы и фосфора для конкретных синтезированных веществ приведены в табл. 4.

60000

12

20

60000

40000

12

40000

20

40000

20000

20000

20000

20

Условия получения образцов, указанных в табл. 4, аналогичны условиям, описанным в.примерах. Граничные значения т, п, k приведены, исходя из практически синтезированных производных водорастворимых декстранов. Как видно из данных табл. 4, количество пришиваемого аминоалкилтиофосфата к диальдегиддекстрану определяется только количеством альПродолжение табл. 4

Количество ,Е моль

г вёщёства

Сера

Фосфор

5,5

336

17

5,5 5,4 5,5 336

17 336

17

5,5 5,5

17 336 5,3 5,6 8,1

24 8,0 322 8,2

25 8,0 320 8,0

24 322 7,8

24 7,8 322 7,6

2;о 239

4 1,8

1,8 239

4 2,0

4 2,0 239 .1,9 1,8

4 1,8 239 5,8 5,4

12 223 5,4 5,3 225

11 5,6 225 5,3

11 225 5,3 5,6

11 8,4 213

17 8,2 8,3 8,2

17 213 8,5 8,5 213

17 215 8,2 8,2

16 1,9 121 2,0

2 2,0 121

2 2,1 2,2 2,0 121

2 2,9 1,9 121

2 5, 5

6 5,2

111 5,5 5,7

6 111 5,4 113 5,1

5 5,3 5,3 113

5 8,0 8,0

8 107 8,1 8,4 107

8 7,8 8,0

8 107 7,9 8,0

8 107

дегидных групп (пришивка практически одинакова для всех образцов с одной степенью окисления) и не зависит от молекулярного веса декстрана. Сл довательно, способ получения аминоалкилтиофосфатдекстранов справедлив и для всех промежуточных значений т, п, k.

Пример. 5 г диальдегиддекстрана, полученного из полиглюкина.

с м.в. 60000 и степенью окисления 4, растворяют в 60 мл 0,02 М морфолинового буфера (рН 7,5) при 20 С. К этому раствору добавляиот О,, г гаммафоса {8-(Ы-(3-амйнопропил) 2-амиНОЭТИЛ ТИОФОСФОРНОЙ КИСЛОТыЗ; .

Реакционную смесь при постоянном перемешивании выдерживают в течение 5 ч при 20°С. Затем реакционную смесь

переливают в диализный мешок объёмом на 150 мл и погружают в сосуд диализатора объемом 10 л, заполненный дистиллированной водой. Диализ осуществляют в течение 15 ч. После диализ-а реакционную смесь зг юраживают и сушат лиофйльно. Получают 4,1 г диальдегиддекстрангаммафоса общей формулы Анализ SF 1,3810 г-экв г- веществ РО 1,3«-10 ,г-экв Г веществ Процент пришивки гаммафОса к альдегидным группам диальдегиддекстрана 81. Пример2. 5 г диальдегиддекстрана, полученного из декстрана с м.в. 20000 и степенью окисления 12, растворяют в 80 мл 0,02 М морфолинового буфера (рН 7,5) при . К этому раствору добавляют 1,1 г цистафоса S -(2-аминоэтил) тиофосфорной кислоты мононатриевой соли. .Далее, аналогично примеру 1 получают 4,3 г диальдегиддёкстранцистафоса общей формулы

о

Н ОН

76

Jl2 5,40-10 Анализ SH РО г веществ г-экв 5,12-10 вещества Процент пришивки цистафоса к альдегидным группам 83. Влияние высокомолекулярных аминоалкилтиофосфатных производных декстрана на процесс обратимой оксигенации гемоглобина показано в табл. 5. в графе 5 приведейы значения парциального давления кислорода при 50%-ном насыщении им гемоглобина при разных соотношениях исследуемого образца и гемоглобина. Парциальное давление кислорода определяется спектрофотометрически на спектрофотометре Perkin-Elmer - 402 (измерения проводятся в кюветах-тоноИз данных графы 5 (табл. 5) видн что при отношении количеств фосфатных групп исследуемых аминоалкилтиофосфатдекстранов и гемоглобина более 30 наблюдается увеличение величины Pgo О, что характеризует уменьшение сродства гемоглобина к кислороду, т.е. исследуемые аминоалкилтиофосфатдекстраны обладают свойством регулировать обратимую оксигенацию гемоглобина. Для сравнения в графе б приведено парциальное давление кислорода при 50%-ном насыщении гемоглобина в присутствии известного низкомолекулярного регулятора обратимой оксигенации гемоглобина - пиридоксальфосфата. Результаты свидетельствуют, что полисахаридные производные аминоалкилтиофосфатдекстранов обладают сравнимыми регуляторными двойствами с пиридоксальфосфатом.- Но пиридоксальфосфат выполняет функцию регулятора окисигенации внеэритроцитарного гемоглобина только в очень узком интервале кислотности (рН 7,2), что усложняет его применение. В растворах, содержащих производное декстрана и гемоглобин, при уменьН

н он

№

метрах в области 500-800 им, длина оптического пути 0,5-1 см) и газохроматографически на хроматографе Perkin-Elmer-900, снабженном интегратором Sip-1.

Т а. б л и ц а

шении рН с 7,2 до 6,1 (графы 7,5) значительно увеличивается величина PSD О2 , т.е. наблюдается эффект Бора. Это очень важно с физиологической точки зрения.

5

Данные табл. 5 показывают, что парциальное давление кислорода в присутствии аминоалкилтиофосфатдекстрана практически не зависит от значений т, п, k.

0

Следовательно,можно сделать вывод, что свойством регулировать обратимую оксигенацию гемоглобина обладает вся группа водорастворимых декстранов, содержащих ковалентно

5 присоединенный аминоалкилтиофосфат.

Практически синтезированы аминоалкилтиофосфатдекстраны с т 107-358, п 2-25, k 0,2,3,5.

Предлагаемым способом можно по0лучить любое высокомолекулярное производное водорастворимого декстрана с возможнь1м сочетанием.

Формула изобретения

5

еяв

к он 11 где R - Ы(СН2)к NH(CH,, L 8РО„Н„ ; m 107-358; n 2-25; k 0,2,3,5, дЛя регулирования обратимой оксигенации внеэритроцитного гемоглобина, 2. Спрсоб получения-водорастворимых декстранов, содержащих аминоалкильные производные тиофосфорной кислоты, обработкой диальдегид декстрана аминоалкилсодержащими реагентами, отличающийс тем, что, с целью получения декстр нов, содержащих аминоалкильные про изводные тиофосфорной кислоты, для 5 регулирования обратимой оксигенации внеэритроцитного гемоглобина, в качестве аминоалкилсодержащих реагентов используют аминоалкильные производные тиофосфорной,кислоты общей формулы (СН,з,)к-NH(CHQ)4 -5РО5Н2,где k 0,2,3,5, и обработку проводят в 0,02 М морфолиновом буфере при рН 7,5-8 и 15-30с с с последующими диализом и лиофильной сушкой целевого продукта. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР 437774, кл. С 08 В 37/02, 1972 (прототип).