Водорастворимые производные декстрана для снижения средства внеэритроцитного гемоглобина к кислороду при сохранении кооперативности связывания кислорода и способ их получения Советский патент 1983 года по МПК C08B37/02 A61K31/721 

ные элементного анализа и расчета i коэффициентов тип для синтезированных соединений представлены в табл. 1. Коэффициенты тип округлены при расчете до целых чисел, В результате получают 1-декстраноам ноэтилиден-1,1-дифосфоновые кислоты (даЭДФ,ДАЭДФ -I, ДАЭДФ-ц) и 1-декс раноамино-2-карбоксиэтилиден-1,1-дифосфоновые кислоты (ДАКЭДФ-I, ДАКЭДФ-11) содержащие 5-30 дифосфонатных .групп на 100 АГЕ полимера или 0,3-1,5 м-экв. дифосфонатных групп (ДФ) на 1 г полимера . . Пример 1. К 5%-ному водном раствору полиглюкина (16 г .декстран 3 320 мл воды) в течение 15 мин при .энергичном перемешивании прибавляют водный раствор перйодата натри (7,98 г 300 мл воды) и 12,8 мл 1 H.NaOH так, чтобы рН смес составляло 7,1. Затем реакционную массу диализуют через целлофан против воды в течение 4 сут. Окончание диализа контролируют реакцией наионы JOo. После лиофильной сушки получают 14,6 г (91%) диальдегиддек страна, содержащего 40 альдегидных групп на 100 ангидроглюкозных едини полимера (у 40), Определение количества альдегидных групп осуществляют реакцией с гидроксиламином. К 2%-ному водному.раствору диаль дегиддекстрана (5 г ДАД в 250 мл воды) прибавляют 11%-ный водный раствор АЭДФ, имеющий рН 8,5(6,4 г ЛЭДФ в 10 мл воды и 40 мл iH.IIaOO) и затем в течение 15 мин еще 1 мл iH.NaOH при энергичном перемешива НИИ так, чтобы рН смеси составляло 9,0, Реакционную массу перемешивают в течение 64 ч при рН 9,0 и 20 °С,, а затем добавляют 2,36 г NaBH и 40 мл iH.HCl так, чтобы рН смеси составляло 7,0. Раствор выдерживают еще 1 ч и диализуют в режиме ультра фильтрации (2 атм N, 8°С, фильтр PSAC фирмы Millipore) В течение 5 сут. После лиофильной сушки получают G,14 г ДАЭДФ.в виде аморфного порошка.,При элементном анализе най дено 9 ,9% Р и 2 ,24% N, что соответствует 30 дифосфонатным группам на 100%-/1ГЕ полимера. Пример 2. 70 мг ДАЭДФ растворяют в 1,5 мл воды, нейтрализуют щелочью до рН 7,ь-7,8 и прибав ляют 5 мл 20%-ного водного раствора внеэритроцитарного гемоглобина (В-Н рН смеси составляет 7,4. Полученный 15%-ный раствор В-НЬ разбавляют в 100 раз 0,1М трис-буфером, содержащим 0,1КС1 и имеющим рН 7,35, и , измеря}эт поглощения деокси- и окси формы НЬ в его 0,15%-ном растворе на спектрофотометре Перкин-Эльмер модель 402 (11веция). Раствор содержит 70 мг ДАЭДФ на 1 г В-НЬ. После вычисленийполучают g РС-Д 0,70 (PsoOj 5,01), п 3,0 при рН 7Д5. П р и р 3. Получают ДАЭДФ-1 и ДАЭДФ-11 как в примере 1, но реакционную массу перемешивают при рН 9,О при 18-25°С в течение 24 ч. Пример 4. Получение ДАКЭДФ-I. Получение диальдегиддекстрана из -полиглюкина осуществляют аналогично описанному в примере 1. 1C 70 мл водного раствора диальдегиддекстрана, содержащего 2 г ДАД,. прибавляют 20 мл водного раствора АКЭДФ, содержащего 4 г АКЭДФ и имеющего рН 8,5 и 1,7 мл 2М NaOH для получения в реакционной смеси рН 9. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2-х сут. 1C полученному раствору добавляют порциями в течение 4-х ч 1,5 г NaBH и 31 мл 1м НС1 так, чтобы в растворе было рН 7. Очистку и выделение осуществляют подобно примеру 1. При элементном анализе найдено Н 0,83% и Р 3,69%, что соответствует 11 дифосфонатным группам на 100 АГЕ полимера. Пример 5. Получение ДЭАКЭДФ-11. Получение диальдегиддекстрана из реополиглюкина осуществляют анало- . гично описанному в примере 1,Синтез ДАКЭДФ-11 осуществляют аналогично синтезу ДАКЭДФ-1, описанному в при- мере 4, но смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 сут. Очистку и выделение полимера проводят так же, как в примере 1. Приэлементном анализе найдено N 0,42% и Р 1,87%, что соответствует 5 дифосфонатным группам на 100 АГЕ полимера. В табл. 2 представлены сравнительные данные по эффективности дейстВИЯ в качестве регуляторов обратимой оксигенации В-НЬ декстрановых производных содержащих тиофосфорную кислоту (прототип) и новые дифосфонатные производные декстрана. Пз табл. 2 видно, что изобре тение Обеспечивает 3-х кратное увеличение эффективности действия регулятора обратимой- оксигенации гемоглобина. Табл. 3 представ;1ены функциональные характеристики внеэритроцитарного гемоглобина в растворах, содержащих дифосфонатные производные декстрана, в сравнении с прототипом.

Таблица 1

1. Водорастворимые производные декстрана общей формулы где п 110-223; п 6-57; R . -KHCF, FO( -ОН 1 -CHjCCOH для снижения сродства внеэритроцитного гемоглобина к кислороду при сохранении кооперативности связывания кислорода. 2. Способ получения водорастворимых производных декстрана обработкой -диальдегиддекстрана аминоалкилпроизвoдны.1И фосфорсодержащих кислот с последующим диализом и лиофильной сушкой целевого продукта, отличающийся тем,, что, с целью С получения производных декстрана для снижения сродства внеэрнтроцитного (Л гемоглобина к кислороду при сохранении кооперативности связывания кислорода, в качестве аминоалкилпроизводных фосфорсодержащих кислот используют 1-аминоэтилиден- или 1-амино-2-карбоксизтилиден-1,1-дифосфоновую кислоту,, а обработку проводят при рН 8,9-9,1 в течение 1-3 сут при комнатной темиературе при соотношении диальдегиддекстрана и кислоты 1:2-2,5, и полученные соединения.обрабатывают 2-4 ч при рН 6,9-7,1 трехкратным мольным избытком боргидО СО рида натрия при комнатной температуре .

40000

134 57

CHj 197/

40000 CHj 223 12 40000 CHi

t

40000

СНдСООК 197

25 б

20000

CHgCOOH 110

,:ДР5 р2 при одинаковом количестве м-экв. фосфорсодержащих . групп

В-НЬ+ДАДГФ (прототип, опыт 10; табл.3)

В-НЪч-ДА-ЭДФ

В-НЬ+ДАКЭДФ-1

В-НЬ

В-НЫ-ДЛЭДФ

В-НЫ-ДЛЭДФ

в-НЫ-ДАЭДФ В-НЪн-ДАЭДФ-1 В-НЬ+ДАЭДФ-11

.В-НЪ+ДАКЭДФ-1

В-НЫ-ДАКЭДФ-1

В-ПЫ-ДАКЭДФ-11

0,16

9,90,32

1,5

30

.ОДб

3,,16

11 5 0,6

а,03

0,06 3,690,12

11 5 0,6

0/03

Таблица 2

Эффективность

200

70

(опыт 4,табл.3)

60

(опыт 5.табл.3)

Т а б л и ц- а .примечани

Продолжение табл. 3 я. ДАКЭДФ-1 - ДЛКЭДФ; содержание 11 лифосфонатньЛ групп на 100 ЛГЕ полимера; ДЛКЭДФ-11 - ДЛТгэДФ, содержащие 5 дифосфонатных групп на 100 ЛГЕ полимера; ДФ - коли чество дифосфонатных группировок в полимере;,лР50 On разница между данного раствора и раствора, содержащего только в-нъ (оп.1), мм рт.ст.