Способ определения свободного гидрокси-пРОлиНА B плАзМЕ КРОВи Советский патент 1981 года по МПК G01N33/52 

3S3 кость нейтрализуют 6 н. едким натром по фенолфталеину и цовооят объем ао 2мл. К 2 мл нейтрализоэанной смеси добавляют 0,5 мл 5% водного раствора хлорамина I или Б. Через 3-4 мин в пробирку добавляют 2 мл 3 н, серной кислоты и 0,5 мл 1О% раствора парадиметиламинобензальдегида в 96% этаноле. Пробу тщательно перемешивают, нагревают 75-80 с при 98-100°С и охлаждают до 18-22С, Затем к смеси добавляют 1 мл, четьфеххлористого углерода и 3мл Н-бутанола, Содержимое пробирки тщательно встряхивают и центрифугируют 10 мин при ЗООО-4000 об/мин. Верхнюю фазу пробы, которая содержит характерны для гидроксипролина хромоген, фото мет-----руют при длине волны 560 нм или синим светофильтром фотоэлектроколориметра в кюветах с толщиной рабочего слоя 1 см против смеси четыреххлористого углерода и Н-бутанола (I : 3). Контроль ставят водой. Окраска хромогена не теряет своей ингейсивности ЗО мин. Расхождени между результатами параллельных акализов составляет не более 3%. Предлагаемый способ позволяет увеличить точность правильной диагностики заболеваний, сопровождающихся деструктивными процессами в соединительной гка ни {ревматизм, системная склеродермия, опухоли кости) особенно на ранних стадиях заболевания, когда гидроксипролина в плазме крови еще мало« Точность пред4агаемого способа по сравнению с известым повышается в 1,5 - 2 раза. Формула изобретения .Способ определения свободного гидроксипролина в плазме крови путем внесения 1з нее трихлоруксусной кислоты (ТХУ) с последующим отделением надосадочной жидкости и добавлением к ней окислителя, оалее образующийся продукт окисления гидроксипролина конденсируют с парадиметилбензальдегидом и измеряют егооптическую плотность, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, плазму крови перед внесением ТХУ нагревают в течение 2,0-2,5 мин, до 98-100 0, затем охпаждают до 1822 , ТХУ вносят в концентрации 20% совместно с 55% .хлорной кислотой, конденсацию ведут при нагревании смеси до 98-10О С в течении 75-8О с, а продукт конденсации перед измерением оптической плотности экстрагируют смесью четыреххлористого углерода и H-6yTaHOJ:ia, взятых в соотношении 1:3. Источники информации, принятые во внимание при эксрертизе 1. Крель А. А.Фурцева Л. Н. Методы определения оксипролина в биологических жидкостях и их применение в клинической .практике.- Вопросы медицинской химии, т. 14, вып. б, 1978, с. 635-64О.