Вакцина для специфической профилактики и лЕчЕНия ТРиХОфиТии пушНыХ зВЕРЕй иКРОлиКОВ-MEHTABAK,СпОСОб изгОТОВлЕНияВАКциНы и СпОСОб EE иСпОльзОВАНия Советский патент 1981 года по МПК A61K39/00 C12N1/14 C12R1/645 

Возбудител трихофитии, вызывающие заболевание

у основных сельскохозяйственных, домашних животных,

птиц и человека

Таблица

Мелкий рогатый

скот Лошадь Собака Копгка Серебристо-черна

лисица Песец Шиншилла Кролик Куриные

Примечал и е. Ччеловек, животные, заболевшие при заражении

этимг возбудителями.

В результате длительной направленно проведенной работы был получен высокоиммуногенный штамМ гриба Trichophyton gypseum 135/1963 с повышенными энергией роста, накоплением биомассы « спороношением, полезно измененными культурально-морфолопическими свойствами, резким снижением вирулентных свойств для животных :и человека при сохраненин иммуиогенной активности. Этот штамм был выделен Б 1963 г. от серебристо-черной лисицы, больной трихофитией, принадлежащей зверосовхозу «Сомовский Воронежской области, .Полученный штамм зарегистрирован в коллекции культур дерматофитов во Всесоюзном ордена Ленина институте экслериментальиой ветеринарии.

Предлагается вакцина для специфической :профилактики и лечения трихофитии .пушных зверей и кроликов, содержащая культуру гриба штамма Trichophyton gypseum 135./1963 и защитную среду при концентрации микроконидий указанного штамма гриба МЛИ. на 1 мл защитной среды следующего состава, вес, %: Сорбит или

сахароза10- 40

Желатин2,0-10,0

Вода Остальное.

Предлагается также способ изготовления такой вакцины, включающий приготовление питательной среды, выращивание культуры гриба, съем культуры, дозировку биомассы и лиофилизацию, отличающийся тем, что выраш,ивание гриба проводят при 26-28° С в течение 15-30 суток.

Кроме того, предлагается способ исПользования этой вакцины, отличающийся тем, что вакцину вводят животным внутри+

мышечно с .внутренней стороны бедра в дозах 0,5-10 мл на голову двукратно с интервалами между введениями в 7-10 дней. Для получения живой сухой вакцины 5 против трихофитии пушных зверей и кроликов ириготовляют две смеси комионентов, содержащие:

1)го,могенат живой культуры гриба иммуногеииого штамма Т. mentogrophytes 135.i963 в стерильиой воде с содержанием в 1 ли МЛН, живых микроконидий;

2)защитную среду, включаюшую 10- 40% сорбита или саха.розы « 2-10% желатина, растворенных в 10 мл воды и нростерилизованных.

Смесь первого « второго компотенто-в в соотношениях 0,6-il,0 к 0,5--1,0 после лиофильного высушивания представляет собой вакцину для специфической профилактики трихофитии пушиых зверей и кроликов.

Процесс изготовления предлагаемой вакцины включает выполнение следующих операций;

а)приготовление питательной среды;

б)засев матровых колб и |Выращивание гриба;

в)приготовление среды высушивания;

г)съем культуры с поверхности питательной среды;

д).измельчение гр.йбницы;

е)соединение гомогената с защитной средой;

ж)дозированный розлив во флаконы;

3)лиофилизация материала;

и) укупорка, этикетировка флаконов; к) контроль вакцины. aj Для .приготовления .питательной среды стерильное неохмеленное пивное сусло разводят водопроводной водой до содержания 7-8% углеводов по Баллингу, подщелачивают до рН 7уО-7,4 и растворяют, -добавляя при нагревании 2,5-3,0% микробиологического агар-агара, затем фильтруют и разливают до 300 мл в матрасы. Стерилизуют при 0,7 атм в течение 40 мин. б)Засеянные матрасы выдерл ивают в термостате при 26-28° С минимально Г5, максимально 30, оптимально 20-25 дней. Эти колебания во многом зависят от использованного сусла, сезона года и др. в)В качестве среды высушива ния применяют стерильные водные растворы 10- 40% сорбита или сахарозы и 2-10% пищевого желатина -или пептона. Для приготавления этой среды в горячую дистиллированную воду добавляют необходимое количество желатина или пептона и после растворения сорбит или сахарозу фильтруют и устанавливают рН 7,0-7,4. Стерилизуют три дня подряд: первый день текучим паром 30 мин, второй и третий день 20 мин текучим паром, затем 40 мин при 0,7 атм. г)Съем культуры проводят в стерильных боксах, для чего специальным скребком снимают грибницу с поверхности сусло-агара и помещают в банки с крышками. Грибную массу снимают, стараясь ие захватывать поверхность питательной среды. Сразу после съема грибницу измельчают. д)Размол грибной массы проводят в гомогенизаторах различных систем и коллоидных мельницах, обеспечивающих «ужное измельчение и стерильность в работе. Температура во время работы не должна лревыщать 30°С. Аппараты загружают из расчета (в конце измельчения): съем грибницы с пяти матрасов в 300 мл стерильной воды. е)Гомогенат соединяют с защитной средой в отношениях 1 :, 0,5: 1 или 1 : 0,5 в специальной бутыли, оборудованной воронкой и сифоном для стерильного розлива. ж)Бутыль со смесью устанавливают в щуттель-аппарат и тщательно перемешивают. Затем при периодическом помещива«ии разливают :во флаконы по 50; 100 или 200 доз, что при концентрации микроконидий в вакцине 400 млн/мл составляет соответственно (2,5, 5 и 10 мл. з) Кассеты с флаконами под двухслойными марлевыми салфетками после розлива незамедлительно помещают в охлажденную до (-40) - (-50)° С камеру холодильника для быстрого замораживания. Через 12-16 ч хорощо промороженные флаконы с вакциной быстро (не допуская оттаивания биопрепарата) перегружают в подготовленную и охлажденную камеру сублиматора (типов ;КС-30, ТГ-50 н др.), подключают датчики, закрывают камеру и включают вакуумные насосы. Спустя ч . при достижении показателей вакуума 8- 10 мВ ВЕ-слючают нагрев полок до 30-40° С. Нагрев поддерживают таким, чтобы в продукте температура каждый час повышалась на 1-3° С, при температуре продукта 8-10° € нагрев снижают до 25° С и поддерживают до окончания сущки. Температура продукта не должна превышать 25° С. Продолжительность сушки в аппарате КС-30 при полной загрузке и разливе во флаконы по 10 мл (.200 доз) составляет SO-96 ч. и) Лосле завершения сушки флакояы закрывают резиновыми пробками, фольговыми колпачками и закатывают. к) Для проверки показателей качества препарата от каждой серии отбирают по 20 флаконов, 10 используют для испытаиия качества, другие 10 хранят в архиве. Вакцину контролируют на следующие показатели: определяют внешний вид, наличие механических примесей, растворимость, остаточную влалсиость, чистоту в бактериальном отношении и в отнощении плесени, содержание и жизнеспособность микроконидий, безвредность и иммуногенная активность. Содержимое флаконов при внесении в них стерильной воды или физраствора должно раствориться без остатка в течение 2-3 мин и н-е содержать механических примесей (осколки стекла ,и др.). При высевах на сусло-агар, агар Чапека, МПА, МПБ и Китт-Тароцци посевы должны быть чистыми и не давать роста посторонней микрофлоры. Остаточная влажность должна составлять не менее 1,0 и не более 3,6%. Концентрация микроконидий в разведенной для употребления ва кцине 10-:20 млн/л-гл, жизнеспособиость ие менее 10 илтл1мл. Безвредность и иммуногенную активность проверяют на кроликах. Пяти кроликам весом 2,5-3,0 кг внутримышечно в область бедра вводят по 1,0 мл вакцины, повторно через 7 дней в той же дозе в то же место. Через дней после второго введения на месте инъекции на коже может образоваться поверхностная корочка диаметром до 5-.10 мм. Спустя 30-40 дней 5 иммунизированных и 5 контрольных (не иммунизированных) кроликов подвергают экопериментальному заражению путем втирания в скарифицированный участок кожи гомогената вирулентной культуры гриба Trichophyton gypseum. Срок наблюдения 30- 35 дней. Из 5 иммунизированных кроликов 4 не должны заболеть трихофитией, не менее 4 контрольных должны проявить клинические признаки трихофитии, которые подтверждают результаты микроскопкческих исследований. Пример конкретного выполнения вакцины и способа ее изготовления. Для приготовления одной серии предлагаемой вакцины в количестве 300 тыс. дов производят засев 200 матрасов культурой г f-- - f-- richophyton gypseum 135/1963. Через 20- 25 дней матрасы с выросшей культурой тщательно просматривают и при малейшем подозрении на загрязнение выбраковывают. Приготавливают 4,5 л защитной среды и проверяют ее на чистоту. ПрО:Водят пробный размол съема культуры с 5 матрасов в 300 мл стерильной воды и подсчет количества микроконидий и определяют необходимое для размола количество матрасов с культурой с тем, чтобы содержание микроконидий в гомогекате составляло 400 млн/лгл. Если содержание микрокониднй выше 400 У1лн/мл, то количество матрасоБ уменьшают, если ниже, то увеличивают. Затем с матрасов снимают необходимое количество грибницы. Установлено, что с одного матраса минимально .можно получить 1600, максимально 2400 и оптимально 20QO доз вакцины (одна доза - I мл разведенной вакщгны, содержащей 20 У ЛН/МЛ микроконидий). Таким образом, максимальное количество матрасов для приготовления одной серии вакцины в количестве SOO тыс. лоз 190, минимальное 125 и оптимальное 150. К го.могенату добавляют защитную среду, перемещлвают и разливают во флаконы. .При розливе по 10 мл (200 доз во флакон) количество составляет 900 щт., 5 мл (100 доз) - 1800, 2,5 мл (50 доз) - ЗбаО шт. Возможен и другой метод нивелировки количества микрокоиидий в вакцине путем изменения соотношения гомогената с защитной средой. Лри этом также определяют содержание микроконидии в гомогенате культуры и за счет уменьшения или увеличения точно рассчитанного кол.ичества защитной среды (но не более чем соотношения 0,5 : 1 и 1 : 0,5) достигают нужного соотношения.

Итоги испытания вакцины против трихофитии пушных зверей в неблаготолучных звероводческих хозяйствах (1976-1977 гг) Лримечамие: В указанных хозяйствах в заболевало от 10 до 40 % голы, предшествующие применению пакципы, трихофитией животных. Вакцина сохраняет иммуногенную активиость и годна к применению не менее одного года при хранении при 4-8° С. Вакцину применяют с профилактической и лечебной целью для иммунизации молодняка, взрослых лисиц, песцов и кроликов Путем двукратного с интервалами в 7-10 дней внутримышечного введения с внутренней стороны бедра в следующих профилактических дозах, мл: Молодняк серебристо-черных лисиц, песцов возраста 1-4 мес. Старше 4 мес. и взрослые Кролики с 45 дней1 С лечебной целью вакцину вводят по той же методике в удвоенных дозах. На месте введения у животных наблюдается образование спустя 10-15 дней небольшого (диаметром до мм) трихофитиеподобного пятна - специфическая реакция на введение, которая спонтанно проходит через дней. Иммунитет у привитых животных наступает через 20 аней после вакцинации. Продолжительность имм нитета не менее двух лет. В соответствии с разрешениями Главных управлений ветеринарии МСХ СССР и РСФСР было изготовлено 437 тыс. доз опытных серий вакцины, которая была испытана на 87,4 тыс. лисиц и песцов, 10,8 тыс. кроликов в пяти круциых зверосовхозах и двух кроликокомнлексах, стационарно Неблагополучных по трихофитии. ПрИ этом установлено, что вакцина безвредна, не реактогенна, не оказывает отрицательного действия на воспроизводство, создает у 99,2-99,6% животных напряженный иммунитет, что иозволяет предохранить их от заболевания (см. табл. 2). Таблица 2

Формула изобретения

Вакцина для специфической профилактики и лечения трихофитии пушных зверей и кроликов, отличающаяся тем, что содержит культуру гриба штамма Trichophyton gypseum 136/1963 и защитную среду при концентрации микроконидий указанного штамма гриба 100-600 млн на 1 мл защитной среды следующего состава, -вес. %:

Сорбит или сахароза10-40

Желатин2,0-10,0

ВодаОстальное.

Примечание: Изобретение носит комплексный характер и его целесообразно защитить как состав, способ его изготовления и способ использования.

Источники информации, принятые во вн-имание при экспертизе:

4.Авторское свидетельство СССР 548947, А 61 К 39/00, 1976.