ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ТРИХОФИТИИ КРУПНОГО, МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА И ОЛЕНЕЙ Российский патент 2003 года по МПК A61K39/00 A61K39/116 

Изобретение относится к области ветеринарной микологии, в частности, к получению вакцины против трихофитии крупного, мелкого рогатого скота и оленей.

До настоящего времени трихофития крупного, мелкого рогатого скота и оленей продолжает иметь распространение как в нашей стране, так и за рубежом. Трихофития наносит огромный ущерб, складывающийся из потери веса, порчи кожевенного сырья, снижения жизнеспособности животных, недополучения приплода, поэтому разработка эффективных вакцин против трихофитии указанных животных является актуальной проблемой.

Известна вакцина ТФ-130К против трихофитии крупного рогатого скота, включающая антиген из живой иммуногенной культуры Trichophyton verrucosum штамм 130Л, разбавитель - физиологический раствор, антибиотики - пенициллин и стрептомицин и наполнитель - сахарозу, желатин и воду.

Вакцину ТФ-130К вводят внутримышечно в дозе 1-8 мл двукратно с интервалом 10-14 дней (1).

Известна также комплексная вакцина против трихофитии крупного и мелкого рогатого скота.

Вакцина представляет собой смесь антигенов культуры гриба Trichophyton verrucosum 478 и культуры гриба Trichophyton verrucosum 145, взятых в равных соотношениях в концентрации 60-160 млн микроконидий в 1 мл 4-5% солевого раствора NаCl, и адьювант - гель гидроокиси алюминия (ГГА).

Вакцину готовят следующим образом: с матрасов, засеянных культурой штамма гриба Trichophyton verrucosum ВИЭВ 478, и с такого же количества матрасов, засеянных культурой гриба Trichophyton verrucosum ВИЭВ 145, проводят съем грибницы, которую гомогенизируют в стерильном 4-6% солевом растворе NaCl, содержащем после гомогенизации от 300 до 800 млн микроконидий в 1 мл. Гомогенат разводят таким же солевым раствором до концентрации 60-160 млн микроконидий в 1 мл и добавляют гель гидроокиси алюминия 0,5-0,6 мл на 100 мл антигенной смеси. Полученную таким образом вакцину разливают во флаконы и закатывают.

Вакцину можно готовить в сухом виде. Ее готовят обычным способом путем смешивания гомогената антигенов с защитной средой обычного для трихофитийных вакцин состава.

Вакцину вводят внутримышечно с профилактической целью двукратно с интервалом 10-14 дней в дозе 1 мл, с лечебной целью вакцину вводят в двойном объеме (2).

В задачу наших исследований входило - получить вакцину для профилактики и лечения трихофитии, обеспечивающую создание в организме крупного, мелкого рогатого скота и оленей напряженного и длительного иммунитета и не обладающую реактогенностью. Это удалось достичь благодаря тому, что нами получен новый штамм Trichophyton verrucosum 507, выделенный из трихофитийного очага на коже северного оленя из Якутской обл. в 1994 г. Штамм Trichophyton verrucosum хранится в музее культур ВИЭВ в лаборатории микологии и антибиотиков под 507 "Якутия".

Штамм Trichophyton verrucosum 507 "Якутия" обладает следующими вакцинными свойствами:
Культурально-морфологические свойства. Колонии порошистые, светло-бежевые, приподнятые, слабоскладчатые, обратная сторона более темная, бежевая, край звездчатый. 1-месячная культура 16-18 мм в диаметре. Слабо врастает в агар. Плодоношение обильное. Микроконидии овальные, грушевидные, булавовидные, палочковидные с закругленными концами 2-3,5•3-11 мкм. Макроконидии единичные, неправильной формы, имеют 2-5 перегородок. Артроспоры в простых или ветвящихся цепочках или гроздьями. Характерно наличие обильного количества артроспор как в первичных культурах, так и в последующих генерациях 4-7 мкм в диаметре. Хламидоспоры одиночные в первых генерациях и обильные в последующих генерациях 20-35 мкм в основном округлой формы. Мицелий толстый, распадающийся на артроспоры и тонкий, прямой и ветвящийся.

ВИРУЛЕНТНЫЕ СВОЙСТВА. При нанесении на скарифицированную кожу морской свинки или кролика гомогенизированной культуры в количестве 3-4 мл с концентрацией 300-600 млн/мл наблюдают покраснение кожи, шелушение и выздоровление через 1-1,5 недели.

ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА. При двукратной иммунизации живым антигеном в дозе 60-160 млн иммуногенных клеток микроконидий КРС, овцам, козам и оленям развивается напряженный и длительный иммунитет (срок наблюдения 3 года).

АНТИГЕННЫЕ СВОЙСТВА. Через 1 месяц после иммунизации в РА наблюдается накопление титров антител 1,640, 1:1280, которые сохраняются длительное время. В РДП и ИЭФ данный штамм имеет 4-6 общих антигенов с культурами эпизоотических штаммов, выделенных от КРС, овец, коз и оленей, что свидетельствует о его широком спектре иммуногенного действия против возбудителей трихофитии крупного рогатого, мелкого рогатого скота и оленей.

Вакцина представляет собой смесь антигенов культуры гриба Trichophyton verrucosum "Якутия" 507 и культуры гриба Trichophyton verrucosum 145, взятых в равных соотношениях в концентрации 60-160 млн микроконидий в 1 мл 4-5%-ного солевого раствора NаCl и адьюванта - геля гидроокиси алюминия (ГГА) 0,5-0,6 мл на каждые 100 мл вакцины.

Пример 1
С матрасов, засеянных культурой штамма гриба Trichophyton verrucosum 507 "Якутия" и 145 проводят съем и гомогенизацию грибной пленки в стерильном 4-6% солевом раствора NаCl, содержащем после гомогенизации в нем грибной пленки от 300-800 млн микроконидий в 1 мл.

Гомогенат разводят таким же солевым раствором до концентрации 60-160 млн микроконидий в 1 мл и добавляют ГГА из расчета 0,4-0,6 мл геля на 100 мл антигенной смеси. Полученную таким образом вакцину разливают во флаконы и закатывают. Хранят при минусовой температуре -3-8^oC. Допускается однократное оттаивание при транспортировке, поскольку хранение не замороженной жидкой живой вакцины в течение 14 мес (срок наблюдения) не снижает ее качества. См. патент 2084241 от 12.07.94 г.

Полученную вакцину применяли двукратно с интервалом 15 дней внутримышечно в дозе 0,8-1,2 мл для крупного рогатого скота - 1500 голов. Эффективность составила 98,7%, на овцах 3700 голов в дозе 0,8-1,2 мл, эффективность составила 96,5%; на козах в тех же дозах 780 голов, эффективность 98,7%; на сев. оленях 3000 голов в той же дозе эффективность составила 100%. Длительность иммунитета 3 года (срок наблюдения).

Пример 2
Вакцину готовят таким же способом, как в примере 1. После посева на чистоту гомогенат помещают в холодильник при минусовой температуре и проверяют жизнеспособность иммуногенных клеток микроконидий через 3 мес после замораживания, через 9, 12, 14 мес, через 1,5 года, через 3 года. Жизнеспособность составила 89,1-90, 88,3, 88,1, 87,2, 87,3, 87,1% соответственно.

Полученную после разных сроков хранения вакцину проверяли на профилактический эффект на КРС, козах, овцах и оленях, который практически не изменялся и составил 85-98%, с длительностью иммунитета 3 года (срок наблюдения).

Способ изготовления вакцины при хранении гомогенатов после посева его на чистоту при минусовых температурах до момента надобности описан нами в ранее поданной заявке 2001115011/13 (016186) от 5.06.2001 г.

Вакцина может быть использована с лечебной целью, в этом случае доза удваивается.

Срок хранения жидкой вакцины 3 года (срок наблюдения).

Вакцину можно готовить в сухом виде. Ее готовят обычным способом путем смешивания гомогенатов антигенов с защитной средой обычного для трихофитийных вакцин состава. Хранение сухой вакцины в условиях минусовой температуры является практически бессрочным, несколько высушенные лиофильно штаммы трихофитонов, сохраняющиеся в лаборатории микологии и антибиотиков ВИЭВ (28 лет срок наблюдения), не снизили жизнеспособности иммуногенных клеток микроконидий.

Хранение вакцины при низких температурах в любых широтах, особенно в условиях Крайнего Севера не является проблемой, обеспечит длительное надежное и удобное хранение и использование вакцины, сделать необходимые запасы, сохранить денежные средства.

Предложенная вакцина обеспечивает создание иммунитета против трихофитии крупного, мелкого рогатого скота и оленей, является безвредной и ареактогенной. Вакцина апробирована с положительным эффектом на 2800 головах КРС с эффективностью 98,8%, на козах 593 головы с эффективностью 98,7%, на сев. оленях 3 тыс. голов с эффективностью 100%, на овцах 4100 голов в хозяйствах РФ (например, Якутия) и странах СНГ (Узбекистан, Таджикистан) с эффективностью 96,5%. Длительность иммунитета 3 года (срок наблюдения).

Вакцина найдет применение в государственных и частных хозяйствах и фермах России и СНГ.

Источники информации
1. Авторское свидетельство СССР 955571, кл А 61 К 39/00, 1984 г.

2. Патент РФ 2093178, А 61 К 39/116, 1997 г.

3. Патент РФ 2084241, А 61 К 39/00, 1997 г.

Изобретение относится к области ветеринарной микологии. Вакцина содержит антигены штамма гриба Trichophyton verrucosum 145 ВИЭВ и штамма гриба Trichophyton verrucosum 507 "Якутия", взятые в равных соотношениях с конечной концентрацией 60-160 млн микроконидий в 1 мл 4-5%-ного солевого раствора NaCl и 0,5-0,6 мл геля гидроокиси алюминия на каждые 100 мл вакцины. Вакцина обладает высокой иммуногенной активностью, безвредна, имеет длительный срок хранения.

Ассоциированная вакцина для профилактики и лечения трихофитии крупного, мелкого рогатого скота и оленей, отличающаяся тем, что она содержит антигены из штамма гриба Trichophyton verrucosum ВИЭВ 145 и из штамма гриба Trichophyton verrucosum 507 "Якутия", взятые в равных соотношениях с конечной концентрацией 60-160 млн микроконидий в 1 мл 4-5%-ного солевого раствора NaCl, и адъювант гель гидроокиси алюминия в количестве 0,5-0,6 мл на каждые 100 мл вакцины.