Изобретение относится к способу получения новых фармакологически активных производных триоксихолеста-5,7- диена, которые также могут быть использованы в качестве исходного продукта для синтеза диоксихолекальциферола, являющегося активным аналогом витамина uj Использование известного метода бромирования оксихолестерина по 7 по ложению и последующего дегидробромирования позволяет получать новые фармакологически активные производные IcX. , 3 Ь , 24-(S или К)-триоксихолеста-5,7-диена 13. Способ получения lot , 3(Ь i 24-(S или к)-триоксихолеста-5,7-диена или его производных общей формулы где F , RIJ и RO, - одинаковые или ра личные и представляют собой водород или защитную группу, заключается в том, что производное 1,24-(S или R)-диоксихолестерина общей формулы где Нд, RS 6 одинаковые или различные и представляют собой защитную группу, подвергают взаимодействию с бромирующим агентом, выбранным из группы, включающей N-бромсукцинимид, 1,З-дибром-5,5-диметилгидантойн и N-бромкапролактам, при температуре от комнатной до 14СРс и полученную реакционную смесь обрабатывают дегидробромирующим агентом, выбранным из группы, включающей S-коллидиН, триметилфосфит и диэтиланилин при 80250С и полученный пррдукт выделяют или подвергают гидролизу или восстановительному разложению для отщепления защитных групп. Примерами защитных групп могут служить остатки алифатических или аромати-ческих карбоновых кислот С, CYI и их нитро-, галоид- и алкоксизггмещенные производные, бензильная, тетрагидропиранильная и силильные группы, Пример 1а. Синтез lot, 1 р , 24-триацетоксихолест-5-ена. 300 мг lot- -24-диоксихолестерина используют для проведения реакции с 40 мл уксусного ангидрида и 125 мл пиридина в течение 3 ч при . Далее в реакционную смесь добавляют 25 мл воды и экстрагируют ее 250 мл диэтило вого эфира. Эфирнуюфазу промывают кислотой, а затем щелочью, высушива и выпаривают для удаления эфира, в результате чего получают сырой lot// 3 ft , 24-трибензоилхолест-5-ен. Этот сырой продукт подвергают хрома тографической обработке в колонне, .которая содержит силикагель в качес ве носителя, с использованием для элюйрования растворителя, состоящего из бензола, в результате чего по лучают 325 мг очищенного lot , 3|}f , 24-триацетоксихолест-5-ена в виде маслянистого очищенного продукта. б Синтез lot, 3 15, 24-триацетоксихолеста-5,7-диена (вторая стадия). 300 мг lot , 3jJ , 24-триацетоксихолест-5-ена используют для прове дения реакции с 90 мг 1,3-дибром-5,5-диметилгидантоина в 4,5 мл н-гексана при кипячении с применени ем обратного холодильника в течение 15 мин. Реакционную смесь охлаждают, а образовавшийся.5,5-диметилгидантоин в избыточном количестве 1,З-дибром-5,5-диметилгидантоина удаляют фильтрованием. Фильтрат кон центрируют при пониженном давлении с получением 349 мг желтого маслянистого вещества. К нему добавляют 2,5 мл ксилола для образования раст вора. Приготовленный раствор по кап лям в течение 15 мин добавляют в ра вор, температуру которого поддерживают на уровне (0,85 мл втор, коллидина в 1,9 мл ксилола), после чего реакцию проводят в течение дополнительных 10 мин . После завершения реакции гидробромид втор.коллидина удаляют фильтрованием, а вто коллидин и ксилол выпаривают при пониженном давлении. Остаток раство ряют в диэтиловом эфире. Эфирную фазу/ промывают нормальным раствором СОЛ5ФОЙ кислоты и 5%-ным водным рас вором бикарбоната натрия, а затем вновь водой. После этого ее обрабатывают активированным углем, а серный эфир выпаривают при пониженном давлении с получением 310 мг желтого маслянистого вещества. Его далее подвергают двукратному осторожному разделению путем хроматографической обработки в колонне (элюирование осуществляют бензолом) с использованием кремневой кислоты, в результате чего получают 69 мг (23%-ный выход) некристаллического очищенного продукта. С использованием спектральных данных этот продукт идентифицируют как loC-, Зр , 24-триацетоксихолеста-5,7-диен, Пример 2. Синтез 1(,3 , 24-триацетоксихолеста-5,7-диена (вторая стадия). Проводят реакцию 150 мг 1сх , 3fb , 24-триацетоксихолест-5-ена с 45 мг 1,3-бром-5,5-диметилгидантоина в 3 мл н-гексана в течение 15 мин при кипячении с применением обратного холодильника. Далее реакционную смесь охлаждают, а образовавшиеся кристаллы удаляют фильтрованием. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении, в результате чего получают желтое маслйнистое вещество. К этому веществу добавляют 1,3 мл ксилола. Приготовленный раствор по каплям в течение приблизительно 15 мин добавляют в раствор 0,25 мл триметилфосфита в 4 мл ксилола при кипячении с применением обратного холодильника, после чего реакцию продолжают еще 90 мин. Затем реакционную смесь концентрируют при температуре ниже с получением 148 мг маслянистого продукта. Этот продукт далее обрабатывают аналогично примеру 1. Пример 3. Синтез 1о6 , 3). , 24-трибензоилксихолеста-5,7- диена (вторая стадия). 200 мг lot., 3j2, 24-трибензоилксихолест-5-ена получают аналогично примеру 1а, после чего нагревают в течение 15 мин при кипячении с применением обратного холодильника совместно с 55 мг N-бромсукцинимида в 15 мл четыреххлористого углерода.далее реакционную смесь охлаждают, а образовавшиеся кристаллы удаляют фильтрованием. Фильтрат концентрируют и в остаток добавляют 5 мл ксилола. Приготовленный раствор добавляют по каплям в течение 15 мин в раствор 0,2 мл триметилфосфита в 4 мл ксилола при кипячении с применением обратного холодильника, после чего смесь подвергают кипячению с применением обратного холодильника в течение дополнительных 90 мин. Далее реакционную смесь концентрируют при температуре менее , а остаток подвергают осторожной двукратной хроматографической обработке в колонне, которая содержит кремневую кислоту, с использованием бензола в качестве элюирукицего растворителя, в результате чего получают 50 мг (25%-ный выход) очищенного некристаллического продукта. Этот продукт характеризуется спектральными данными и идентифицируется KaKj
let Зр , 24-трибенэоилоксихолеста-5,7-диен.
1 Пример 4. Синтез 1о(,., 3)& , 24-(S)-триацетоксихолеста-5,7-диена (вторая стадия), loi-окси-3 jb-24-(S)-дибензоилоксихолест-5-ен восстанавливают с использованием LtAIH в сухом диэтиловом эфире с получением 1с6 , , 24-(S)-тpиoкcиxoлecт-5-eнa. После этого проводят реакцию 180 мг этого- продукта с 24 мл уксусного aнгидt идa и 75 мл пиридина при 950с в течение 3,5 ч. Этот продукт подвергают обработке по аналогии, с изложенным в примере 1а и хроматографической обработке в колонне, содержащей в качестве носителя силикагель, в результате чего получают 195 мг 1о6 , Зр , 24-(5)-триацетоксихолест-5-ен.
150 мг этого продукта очищают аналогично примеру 3, в результате чего получают 43,5 мг (29%-ный выход) очищенного продукта, который идентифицируют как 1о6 , 3 fj , 24-(S)-триацет6ксихолеста-5,7-диен.
Пример 5. Синтез lot / 3|Ь , , 24- (S) -трибензойлокс1 холеста-5,7-диеiHa (вторая стадия) 100 мг lot- , 3 , 24-(S)-трибензоилоксихолест-5-ена,
полученного по аналогии с изложенным в примере 16, подвергают кипячению с применением обратного холодильника в течение 15 мин совместно с 23 мг 1,3-дибром-5,5-диметилгидантоина в 16 мл четыреххлористого углерода. Реакционную смесь охлаждают , а образовавшиеся кристаллы удаляют фильтрованием. Фильтрат концентрируют и в остаток добавляют 2,5 мл ксилола. Этот раствор по каплям в течение 15 мин добавляют при кипячении с применением обратного холодильника в раствор 0,3 мл вторг коллидина в 2 мл ксилола с последующим кипячением с обратным холодильником в течение дополнительных 10 мин.
После завершения этой реакции гидробромид втор.коллидина удаляют фильтрованием, а втор.коллидин и ксилол выпаривают при пониженном давлении. Остаток растворяют в диэтиловом эфире. Эфирную фазу промывают нормсшьным раствором соляной кислоты и 5%-ным водным бикарбонатом натрия с последующей повторной промывкой водой. .После этого эфирную фазу высушивают и серный эфир выпаривают при пониженном давлении, в результате чего получают желтый маслянистый продукт.
Этот маслянистый продукт подвергают далее осторожной хроматографической обработке в колонне, которая содержит кремневую кислоту, с использоваинем бензола в качестве элюирующего растворителя с получением 28 мг (28%-ный выход) очищенного кристаллического продукта. Этот продукт идентифицируют как let , 3)Ь , 24-(Sj-l -трибензоилксихолеста-5,7-диен.
Пример 6..Синтез loC -ацетокси-3gi V 24- ( S) -дибензоилоксихолеста-5,7-диена (вторая стадия). 106-окси-3& ,24-(S)-дибензоилоксихолест-5ен используют для проведения с уксусным ангидридом и пиридином по аналогии с изложенным в примере 1а. Реакционный продукт
0 очищают по аналогии с изложенным в примере 1(3), в результате чего получают lot -ацетокси-31Ь ,24-(S)-дибензоилоксихолест-5-ен. 1 Проводят реакцию 462 мг loi-ацетокси-Зр) -24- (S )-дибензоилоксихолест5-5-ена с 188,6 мг N-бромсукцинимида в 16 ил четыреххлористого углерода при кипячении с обратным холодильником в течение 30 мин. Далее реак ционнуюсмесь охлгикдают, а образо0вавшиеся кристаллы удаляют фильтрованием. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении с получением желтого маслянистого продукта. К этому продукту прибавляют 6,8 мл
5 ксилола с об азованием раствора. Этот раствор по каплям добавляют при кипячении с обратным холодильником в раствор 0,4 мл триметилфосфита в 8 мл ксилола, после чего реакцию
0 проводят в-течение дополнительных 90 мин. После завершения реакции реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении с получением маслянистого продукта.
5
П,р и м е р 7. Синтез 1ос/ , Зр) , 24- (R)-тригщетоксихолеста-5,7-днена (вторая стадия), lot -окби-Зи ,24- (R)-дибензоилоксихолест-5-ен подвергают обработке аналогично примеру 4. Таким образом получают очищенный
0 продукт, котораК характеризуется практически теми же данными спектров УФ, ЯМР и масс-спектра, что и соответствующие данные для 5-эпимера, полученного по аналогии с изло5женным в примере 6, с достижением 28%-ного выхода. Этот продукт идентифицируют как l(i. , , 24-(К)-триацетоксихолеста-5,7-диен.
Пример 8. Синтез , Зр) ,
0 24-(К)-трибеизоилоксихолеста-5,7-диена (вторая стадия), lot , 3 (Ь , 24-(К)-трибензоилоксихолест-5-ен подвергают обработке аналогично примеру 5. Очшценный пpoдykт характе5ризуется практически теми же данными для Уф-спектра, спектра ЯМР и массспектра, что и соответствующий S-эпимер, полученный аналогично примеру 5, причем достигается 27%-ный выход.
0 Этот продукт идентифицируют как lot 3 jb , 24-(Я)-трибензоилоксихолеста-5-диеи.
Пример 9. Синтез let -ацетокси-3 ,24-(R)-дибензоилоксихолеста-5,7-диеиа (вторая стадия). lot-ок5
си-3 р ,24-{К)-дибенэоилоксихолёст-5-ен подвергают обработке по аналогии с изложенным в примере 6. .
Очищенный продукт характеризуется -практически теми же данными для УФ- и масс-спектра, что и соответствующий S-эпимер, полученный по аналогии с изложенным в примере 6. Этот продукт идентифицируют как lot-ацетOKCH-3j2 ,24- (К)-дибенэоилоксихолеста-5,7-диен.
Пример 10а. Синтез lot, 3Jb -24-триацетоксихолеста-5,7-диена из loC/ , 3{Ь, 24-триацетоксихолест-5-ена,
В соответствии со способом, который описан в примере 1б, проводят реакцию 1с6 , 3 |Ь , 24-триаиетоксихолест-5-ена, с 1,3-дибpoм-5,5-димeтилгидaнтoинoм и втор.коллидином в н-гексане. Полученный реакционный продукт промывают кислотой и щелочью в серном эфире и обрабатывают активированным углем с получением сырой реакционной смеси, которая содержит lot- г 3fb -24-триацетоксихолеста-5/7-диен.
б) Гидролиз ioi , 3|5 ,24-триацетоксихолеста-5,7-диена. Сырой продукт который получают на вышеописанной стадии (а), подвергают гидролизу в 5%-ном метанольном растворе гидрата окиси калия с получением сырой реакционной смеси, которая содержит 1 об, 3 ft ,24-тpиoкcиxoлecтa-5,7-диeн,
с) Определяют степень чистоты 1о6 , 3 J,,24-триоксихолеста-5,7-диена. УФ-спектр 100%-ной степени чистоты lot , 3 |Ь ,24-триоксихолеста-5,7-диена составляет ((этанол) 282 Нт, а УФ-спектр 100%-ной степени чистоты lot , 3g , 24-триокси-4,6-диена составляет этанол ) 240 нм. Количественное соотношение в смеси между этими двумя соединениями можно определить путем сравнения их величин nigy .
Количественное соотношение между 5,7-диеновыми производным и 4,6-диеновым производнЕли в сырой реакционной смеси, пол5гченной на вышеописанной стадии (б), определяют по методике, в результате которой устанавливают, что молярное соотношение между lot, Зр ,24-триоксихолеста-5,7-Диеном и loG, Зр, и 24-триоксихолеста-4,6 -диеном составляет приблизительно 3:1.
д Разделение lot , 3 , 24-триоксихолеста-5,7-диена и let, Зр , 24-триоксихолеста-4,б-диена (третья стадия).
д-1) Разделение путем препаративной тонкослойной кроматографической обработки. Технически доступную пластину для препаративной тонкослойной хроматографической обработки силикагель, продукт фирмы Мерк компани, 20 X 20 х 0,5 см ) погружают в раствор нитрата серебра в ацетонитриле с целью ее пропитки в количестве приблизительно 1,5 вес.% в пересчете на нитрат серебра, после чего обрабатывают нагреванием пр в течение 2 ч. Подготовленную таким образом хроматографическую пластину используют для последуквдей операции разделения.
Сырую реакционную смесь (30 мг), полученную на вышеописанной стадии (б), адсорбируют на этой пластине и проявляют приблизительно на 20 см смешанным растворителем, т.е. смесью 6%-ного метанола с хлороформом. После сушки пластины на воздухе реационную смесь вновь проявляют тем же самым растворителем. Она характеризуется двумя полосами при Rf приблизительно 0,23 и приблизительно 0,33. Эти фракции экстрагируют из силикагеля этилацетатом. Таким образом, получают 17,1 мг (57%) белого твердого вещества (R 0,23) и 6,0 мг (20%) белого твердого вещества - (R,. 0,33).
Часть - этой пластины окрашивают, с использованием серной кислоты и получают полосу R приблизительно 0,38. Эту фракцию соскабливают и экстрагируют таким путем, как описано выше, в результате чего получают приблизительно 1 мг твердого вещества.
Эти продукты характеризуются нижеследующими данными. Продукт с R 0,23 идентифицируют как 1а6 , 3|Ь , 24-триоксихолеста-5,7-диен, продукт с Rf 0,33 идентифицируют как 1о , 3 Ь , 24-триоксихолеста-4,б-диен, а продукт с R 0,38 идентифицируют как lot , 24-диоксихолесте5рин.
д-2) Разделение хроматографической -обработкой в колонне.силикагель который технически доступен для применения при проведении хроматографической обработки в колонне (С-200, товарный знак для продукции фирмы Вако Йиуниаку Когио Кабуски Кайся) пропитывают приблизительно 2 вес.% нитрата с использованием его .в виде раствора, после чего обрабатывали нагреванием при 70с в течение 2ч. После этого силикагелем заполняют стеклянную колонну диаметром 1 см и высотой 30 см. В эту колонну заливают 40 мг сырой реакционной смеси, полученной в стадии (б), с последующим элюированием смешанным растворителем, который состоит из бензола и этилацетата. Смесь разделяют на две фракции (приблизительно по 20 мл объемом каждая). Эти фракции разделяют с целью контроля тонкослойной хроматографической обработки и полученных данных УФ-спектра. В том случае, когда объемное соотношение между бензолом и этилацетатом находятся в интервале от 2:1 до 1:1, получают 7,6 мг {19%-ны выход) продукта, который соответствует Rf 0,33 (g-1). В этом случае, когда это соотношение составляет 1:1, получают 19,6 мг (49%) продукта, который соответствует R{ 0,23. Эти продукты идентифицируют по данным различных спектров. Формула изобретения Способ получения 1сХ , Зр) , 24-(S или К)-триоксихолеста-5,7-диена или его производных общей формулы Т где Ft , и Й, - одинаковые или ра личные и представляют собой водород или защитную группу, о т л и ч а ющ и и с я тем,что производное 1,24-(S или R)-диоксихолестерина общей формулы II где , Q vi Rfe -, одинаковые или различные и представляют собой ту же защитную группу, подвергают взаимодействию с бромирующим агентом, выбранным из группы, включающей N-бромсукцинимид, 1,З-дибром-5,5-диметилгидартоин и N-бромкапролактам, при температуре от комнатной до 140С и полученную реакционную смесь обрабатывают дегидробромирующим агентом, выбранным из группы., включающей S-коллидин, триметилфосфит и диэтиланилин при 80-250 и полученный продукт выделяют или подвергают гидролизу или восстановительному разложению для отщепления защитных групп. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1 . Выложенная заявка ФРГ № 2326008, кл. 120 25/03, 1972.
