Способ получения сорбента Советский патент 1981 года по МПК B01J20/10 C12N7/02 

1

Изобретение относится к способу получения сорбентов для очистки вирусных препаратов и может быть использовано для хроматографической оЧист- j ки вирусных суспензий от примесных белков .

Известен способ получения сорбента путем обработки поверхности аминокремнезема модифицируняцими агентами .д

1 .

Наиболее близким к предлагаемому

по технической сущности и Достигаемому результату является способ получения сорбента путем обработки поверхности аминокремнезема сначала раство-. 5 ром глутарового альдегида, а затем ; раствором белка 2 .

К недостаткам известного способа относятся низкая стабильность сорбен- 20 та и адсорбция им примесных белков.

Цель изобретения - придание сорбенту инертности по отношению к белку и повышение его стабильности.

Поставленная цель достигается тем, 25 что в способе получения сорбента обработку поверхности аминокремнезема ведут сначала, водным раствором глицеринового альдегида, а затем боргидридом натрия.

Способ получения сорбента осуществляют следуюмим образом.

Аминокремнеэем смешивают с водным раствором глицеринового альдегида в 1/15 М фосфатном буфере с рН 6-7. Суспензию встряхивают при 40°С 2-3 ч, затем про «авгвот дистиллированной водой, добавляют 1/15 М фосфатной буфер с рН 6-7, обрабатывают порсяиком боргйдрида натрия и перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Полученный cojxSeHT промывают дистиллированной водой, загружают в хроматографическую колонку и уравновешивают буферомi Суспензию, содержащую вирус, вносят ff колонку и элюируют тем же буфером.

Пример. Для приготовления глицеросилохрома С-2 для очистки суспензии вируса клещевого зндефалита. к 5 мл силохрома С-2 с удельной поверхностью 74 м/г, удельным объемом пор Ij75 СМ7Г, средним диаметром пор 1000 А добавляют 10 мл 9%-ного раствора 3-аминопропнлтркэтоксисилана в этаноле. Суспензию кипятят в течение. 3ч, затем проьмвают этанолом. Количество аминогрупп на полученном аминркремнеземе составляет 0,55 ммоль/г. Аминосилохром промывают дистиллированной водой, обрабатывают 5 мл 10%-ного водного раствора глицеринового альдегида в 1/15 М фосфатном буфере с рН 6,3 при 40с в течение 3 ч Осадок промывают дистиллированной во дой, затем 1/15 М фосфатным буфером с рН 7, добавляют 200 мг порошка бор гидрида натрия, встряхивают при комнатной температуре в течение 1 ч и снова промывают дистиллированной водой. Этим сорбентом заполняют хроматографическую колонку 0,5 х 10 см и уравновешивают 0,1 м трис-буфером с 0,16 М NaCt с рН 7,8, Затем в колонку вводят 0,1-1,0 МП суспензии вирус клещевого энцефалита, и элюируют вирус тем же буфером. Во 2-3 мл элюата выходит до 90% очищенного вируса. Белковые примеси элюируются из колон ки в 3-4 m элюата. Выход белков полный. Пример 2. Для приготовления глицеростекла для очистки суспензий вируса клещевого энцефалита к б мл макропористого стекла МПС-ЮОО В-ГХ с удельной -поверхностью 50 м/г, удел ным объёмом пор 1,34 см/г, диаметром пор 1100 А добавляют 10 мл 6%-ного раствора 3- аминопропилтриэтоксисилан t в этаноле, смесь нагревают до 50-70°С в течение 3 ч, а затем промывают дистиллированной водой, Количество аминогрупп на поверхности сор бента 0,13 ммоль/г, Аминированное пористое стекло сме шивают (после пролмвки дистиллирован ной водой) с 6-10 М 5%-ного водного раствора глицеринового альдегида в 1/15 М фосфатном буфере с рН 6,3 и нагревают при в течение. 3 ч, Осадок промывают дистиллированной во дой, затем 1/15 М фосфатным буфером добавляют 100 мг порошка боргидрида натрия и встряхивают при комнатной температуре в течение 1ч, а затем снова промывают дистиллированной водой,Полученным глицеростеклом заполняют хроматографическую колонку 0,8 X 12 см, уравновешивают 0,2 М трисбуфером с 0,15 М Noce с рН 7,в, В колонку вводят 0,5-1,0 мл суспензии вируса клещевого энцефалита и элюируют вирус тем же буфером. Очюценный вирус полностью выходит после 2,5 мл элюата в объеме 1-1,5 мл. Примесные белки выходят полностью на 5-6 мл элюата, В ходе предлагаемого в примерах процесса жидкостно-ситовой хроматографии вирус клещевого энцефалита очищается от примесных белков на 99,6-99,7%. При использовании сорбента, полученного по известному способу, выход белков в первых опытах составляет 40-50%, в последующих 70%. Через 20 дней работы выход вируса из хроматографической колонки с известным аминокремнеземом снижается до 60-70%, а из колонок с предлагаемым ; сорбентом выход вируса остается полным . Таким образом, использование пред-, лагаемого способа получения сорбента позволяет получить стабильный сорбент, не адсорбирующий примесные белки вирусных суспензий. Формула изобретения Способ получения сорбента для очистки вирусных препаратов путем об работки поверхности аминокремнезема модифицирующими агентами, от ли чающийся тем, что, с целью придания сорбенту инертности по отношению к белку и повышения его стабильности, обработку ведут сначала водным раствором глицеринового-альдегида, а затем боргидридом натрия. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1,Авторское свидетельство СССР 651814, кл. А 61 К 47/00, 1977. 2,Авторское свидетельство СССР по заявке № 2461698/26, кл. В 01J 1/22, 1977 (прототип).