Способ определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях Советский патент 1981 года по МПК A61B10/00 G01N33/48 

t

Изобретение относится к медицинским и биологическим исследованиям и может быть использовано при определе НИИ содержания в различных биологических тканях ацетилхолина и его гомологов, а также в клинической диагностической практике, ветеринарии и зоотехнике, при определении холинергической активности материала биопсии.

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях, основанный на свойствах этих веществ вызывать сократительную реакцию изолированнцх мышечных тестпрепаратов, обладающих чувствител ностью к ацетилхолину и его гомолоГс1М .

Регистрируют величину сокращения мышечного препарата при воздействии . адетилхолиноподобных веществ. Один конец изолированного мышечного тестпрепарата жестко закрепляют, а другой соединяют с подвижной регистрирующей системой. При таком способе регистрации ответной реакции чувствительность способа составляет величину порядка г/мл ацетилхолинового эквивалента.

Однако низкая стабильность ответных реакций тест-препарата, обусловленная частыми спонтанными сокращениями его, а также низкая чувствительность данного параметра реакции не позволяют проводить определение ацетилхолиноподобных веществ, в частности, в микронавесках биологических тканей, поскольку для извлечения (экс10тракции) достаточного для биологического тестирования их количества необходимо переработать до 30 г ткани. Таким образом, способ не имеет высокой точности.

15

Цель изобретения - повышение точности способа, что предопределяет возможность количественного анализа ацетилхолиноподобных веществ в микронавесках биологических тканей.

20

Поставленная цель достигается тем, что ацетилхолиноподобные вещества экстрагируют из биологической ткани физиологическим раствором Рингера рН 3,9-4,1, а мышечный препа25рат перед определением концентрации веществ в экстракте растягивают до пред€1льного состояния (полного расслабления).

Способ осуществляется следующим

Ц образом.

1 мг биологической ткани помещают: в стеклянный капилляр объемом О , 1 мл, куда вносят 0,05 мл физиологического раствора Рингера, подкисленного до рН 4 однонормальной соляной кислотой. Капилляр запаивают в пламени спиртовки и погружают на 10 мин в кипящую воду для экстракции ацетилхолиноподобных веществ. По истечении времени экстракции капилляр с содержащимся в нем экстрактом извлекают из бани и охлаждают до комнатной температуры. Определение концентрации веществ производят обычным образом, т.е. исследуемый экстракт наносят на подготовленный препарат мышцы, а концентрацию гщетилхолиноподобных веществ определяют по характеристикам вызванного сокращения мышцы, сравнивая со стандартной калибровочной кривой. При этом как определение, так и построение калибровочной кривой производят на предельно растянутом препарате мыпцы.

Использование предлагаемого способа определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях существенно улучшает точность и воспроизводимость результатов, что повышает их достоверность, с одновременным увеличением чувствительности способа, которая делает возможным определение ацетилхолиноподобных веществ в микроколичествах биологических тканей.

Формула изобретения

Способ определения ацетилхолиноподобных веществ в биологических тканях путем их экстракции физиологическим раствором и определения концентрации по активности сокращения препарата мышцы, отличающийся тем, что, с целью по ышения точности способа, экстракцию ведут при рН 3,90-4,10, апрепарат мьницы перед определением концентрации веществ растягивают до предельного состояния. I

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Ивченко Г.М. К методике определения ацетилхолина. Морфологические и физиологические основы регуляции и восстановления функций организма. (ТРУДЫ научн. конф. 2-го МОЛГМИ).М., 1970, с. 48-49.