Способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохимии физиологически активных веществ, и может быть использовано для определения микроколичеств свободного ацетилхолина в структурах мозга. Известен способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолирован ную мышцу пиявки и электрографическо регистрации сокращений препарата 1J. Однако известный способ не обеспечивает достаточной точности, поско ку полученные известным способом препараты обладают недостаточной стабильностью высокой чувствительности. Цель изобретения - повышение точности способа. Указанная цель достигается тем, что при осуществлении способа определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолированную мышцу пиявки и электрографической ре(Гистрации сокращений препарата, пиявку предварительно выдерживают в воде при в течение k-6 сут, а затем изолированную мышцу - в растворе Рингера в течение ч. П р и -м е р. В день опыта изолированную спинную мышцу пиявки перемещают из охлажденного раствора Рингера в раствор Кребса-шрозерин такой же температуры на 1 ч. Непосредственно перед опытом изолированную мышцу пиявки помещают на пенопластовый препаровальный столик и поперечным разрезом с помощью спаренных лезвий, находящихся на расстоянии 8-12 мм, вырезают участок мышцы в области оральной присоски на 5 мм каудальнее головных ганглиев. Вслед за этим обрезают продольнобоковые участки мышцы с таким расчетом, чтобы препарат имел ширину 3- мм. Препарат укрепляют двумя серг финками в плексигласовой ванночке, заполненной аэрируемым раствором Кра са с прозерином, и присоединяют к ме ханической части электронного устройства. Исследование проводят при температуре раствора в ванночке 1015 С. Перед началом опыта готовят стандартные растэоры ацетилхолина (тестирующие) на растворе Кребса с прозерином. Опыт проводят в следующей последовательности, определение минимальной концентрации ацетилхолина, .вызывающей сокращение участка спинной мышцы пиявки; определение степени повторяемости отношения доза .эффект fдо четырех определений,оп ределение концентрации ацетилхолина в исследуемых растворах, затем в интервале между определениями раст вором Кребса с прозерином производят отмывание препарата от связанного с рецепторами ацетилхолина, а также мышцу освобождают от натяжения на срок не менее 15 мин. После -отдыха мышцу вновь натягивают и в натянутом состоянии стабилизируют в течение 10 мин. Регистрацию сокращения участка из лированной спинной мышцы пиявки производят на движущейся диаграммной ленте электронного чернильного регис ратора, соединенного с электронной системой преобразователя механического натяжения мышцы..Регистрацию проводят до получения прямой (нулево линии, характеризующей исходное натяжение мышцы. Показателем концентрации ацетилхолина является изменение тангенса угла, образованного в результате от клонения писчика от нулевой линии (исходный фон) после добавления опы ного или тестирующего раствора. Построив калибровочную кривую зависимости угла отклонения от концентрации ацетилхолина, определяют содержание ацетилхолина в опытных растворах. Предлагаемый способ дает возможность стабильно определять микроколичества свободного ацетилхолина (до 10 г/мл) в малых навесках (1-2 мг) ткани мозга с использованием широко доступного тест-объекта (медицинской пиявки), а также аппаратуры, изготовленной на базе стандартных устройств, что дает возможность внедрить его в практику не только научно-исследовательских, но и лечебных учреждений для определения функционального состояния парасимпатической нервной системы. Формула изобретения Способ определения концентрации ацетилхолина в структурах мозга путем воздействия испытуемой пробы на изолированную мьцццу пиявки и электрографической регистрации сокращений препарата, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, пиявку предварительно выдерживают в воде при k-6 С в течение 1-6 сут, а затем изолирюванную мышцу.в растворе Рингера в течение 46-50 ч. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Kadota К., Nagata М. Bioassay of acetyIcholine with thin muscle strip of the Japanese medical leecht a preliminary not.e of the reappraisal of the evailabili-ty of this method Jap.J.Pharmacol., 1975, 25.5, p. 602-605.