Способ разделения смеси ксантозина и гуанозина Советский патент 1981 года по МПК C07H19/16 

Изобретение относится к способу разделения смеси иуклеозидов, а именно ксантозина и гуанози1на, которые используют в биохимических исследованиях. Ксантозин получают дезами1нир0;ва,нием гуанозина и неполном дезаминировании необходимо разделение смеси .ксантозина и гуаиозина.

Известен способ селекти1вного разделения смеси ксантозина и гуанозина с применением ионообменной хроматографии I.

Такой способ заключается в следующем. Смесь ксантозина л гуанозина в водном растворе после установления рН 6,0-8,5 пропускают через сильно основной анионнт в форме соли. Колонку промывают водой и получают гуаиоз.ин с содержанием основного вещества 96,7% (выход .гуанозина 90,88%). Затем ионообменный материал элюируют 1н. соляной кислотой и получают 94 г ксактозина с содержанием основного ВеЩества 95% (выход ксантозина 89,3%).

Известный способ обеспечивает разделение ксантозина и гуанознна с помощью сорбции ксантозина на сильно основном аниовите, но он трудоемок, так «ак требуются приготовление, регенерация ионообменного -материала и упаривание элюаTOiB.

Недостатками этого способа также являются сравнительно невысокий выход (выход .ксантозина 89,3%, .гуанозина 90,88%) и сравнительно .низкая степень чистоты целевых продуктов (ксантозина 95%, гуанозина 96,7%).

Целью изобретения является повышение выхода и степени чистоты щелевых продуктов и упрощение процесса разделения компонентов.

Цель достигается тем, что при осущест10влении способа разделения смеси ксантозина и гуанозина, находящихся в водяной среде, исходную смесь подкисляют до рН 0,6-1,0 и перемешивают в течение 30- 35 мин при 15-25° С до полного растворе15ния гуанозина, затем отделяют ксантозин, находящийся в осадке, и доведением рН до 3,,0 осаждают дигидрат гуанозина, который нзвест1ным способо.м превращают в гуанозин.

Гуанозин и ксантозии в холодной воде

20 практически «е растворяются, а в процессе кристаллизации, когда растворение проводят при повышенной температуре, осаждаются совместно. Разделение смеси дости25гаетх;я использованием отличающейся растворимости различных форм нуклеозидов. Отличающиеся значения р/Са для гуанозина (1,6-1,8) и ксантозина () поз воляют установить рН среды 0,6-1,0, при которо.м 30 весь гуанозин практически будет образовывать протонированлую, более растворимую форму и даже при комнатной те-млературе может иерейти в раствер. Ксантозия в таких уславиях остается в осадке « может быть отделен фильтрованием от растворившегося ;гуанозина. После отделения ксантозина к раствору добавляют раствор щелочи и устаиащливают ipH в пределе, при которам гуанозин образует нейтральную мало растворимую .в воде фор)му, а именно рН 3,0-6,0. При таком злачевии рН «оличест.венио отделяют гуанозин от .маточника. Оба нуклеозида предлагаемым способом получают хроматог.рафичесюи чмстьгми без дополнительной перекристаллизадии.

Разделение проводят в две стадии: I стадия - выделение хроматографически чистого ксантозина; II стадия - выделение хро.матографически чистого гуаиозийа.

Фракционированное осаждение ксантозина и гуанозина обеспечивает высокий выход и чистоту целевых иродуктов.

Пример 1.2г .ксантозина и 0,44 г гуаиозина суспендируют .в 40 :мл дистиллироваъной воды, устанавливают рН 0,8 1н. соляиой .кислотой при 20° С я перемешивают в течение 30 мин. Отфильтровывают осадок, прО:МЫвают соляной Кислотой при рН 1,0, затем водой и этиловым спиртом. Промывные растворы не присоединяют к фильтрату. Получают 1,9 г (94%) хроматографически чистого ксантозина, содержание основного веш,ества 99%

1н. раствором гидроокиси натрия устанавливают :рН фильтрата 6,0 и осаждают дигидрат гуаиозина. Получают 0,45 г последнего. Дигидрат гуанозина превращают .3 гуанозкн .нагреванием в течение 3 ч при 60° С. Получают 0,4 г гуанозина, выход 90%. Содержание основного .вещества 100%.

Пример 2. 1,5 г ксантоз ина и 0,53 г гуанозина суспендируют в 50 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 1,0 1 н. соляной КИ.СЛОТОЙ при 15° С и перемешивают в течение 30 мин. Отфильтровывают гссантозин, промьивают соляной кислотой при рП 1,0, затем водой и этиловым спиртом. Про.мывные воды к фильтрату не присоединяют. Получают 1,44 г (95%) хроматогра.фически чистого ксантозина. Содержание основного вещества 99%.

1 н. раствором 1гидроо.ки.си натрия устанавливают рН фильтрата 3,0 и осаждают дилидрат гуанози.на. Получают 0,55 г последнего. Дигидрат гуанозина дрезращ ают 13 гуанозин нагреванием з течение 3 ч при 60° С. Получают 0,48 г (91%) хроматографически чистого гуанозина. Соде,ржание основного вещества 100%.

Пример 3. 4,0 г «сантозина и 1,0 г гуанозина суспендируют в ,100 мл дистиллированной воды, устанавливают рН 0,.6 1 н. соляной кислотой при 28° С и перемешивают в течение 3.0 мин. Отфильтровывают йсантозин, промывают на фильтре разбавленной соляной кислотой при рН 1,0, затем водой и этиловым спиртом. Промывные растворы не присоединяют к фильтрату. Получают 3,80 г (96%) хроматографически чистого ксантозина. Содержание основного вещества 99%.

1 н. раствором гидроокиси натр.ия устанавливают рП фильтрата 4,5 и осаждают дигидрат гуанозина. Осадо.к про.мывают на

фильтре водой и этиловым опиртом. Получают 1,03 г хроматотрафически чистого дигидрата гуанозина. Последний .превращают в гуанозин нагреванием в течение 3 ч при 60 С. Получают 0,9 г хроматографически

чистого гуанозина. Выход 91%. Содержание основного вещества 1009%.

Пример 4. Смесь 1 г ксантозина и 3 г гуанозина суспендируют з 50 мл .1,нсги- лированной воды, устанавливают рП 1,0

при 20° С и перемешивают в течение 30 мин. Затем фильтруют, нро.мывают разбавленной соля.ной кислотой (рН 1,0), .водой, этиловым спиртом. Промывные растворы к фильтрату не нрисоединяют. Получают

0,79 г (78%) хроматогра.фически чистого ксантозина. Содержание основного вещества 99%.

Устанавливают рН фильтрата 5,0 и отфильтровывают гуанозин. Получают 3,09 г

(91%) хроматографически чистого дигидрата гуанозина. Содержание основного вещества 100%.

Пример 5. Смесь 2,0 г ксантозина и 1,0 г гуанознна суспендируют IB 100 мл дистиллировапной воды, уста.навл гвают рН 0,6 при 20° С и перемешивают в течение 35 мин, затем фильтруют, осадок .промывают разбавленной соляной кислотой (рН 1,0), водой, этиловым спиртом. Промывные

растворы к фильтрату не присоединяют. Получают 1,86 г (94%) хро.матографически чистого ксантозина. Содержание основного веществ.а 99%.

Устанавливают рН фильтрата 5,0 и отделяют гуанозин. Получают 1,02 г (90,5%) хроматографически чистого дигидрата гуанозина. Содержание основного вещества 100%.

Пр.имер 6. Смесь 10 г Ксантозина и 1 г гуанозина суспенд/ируют. в 100 мл дистиллированной воды, устанавливают разбавленной соляной кислотой рН 10 при 18° С и перемещивают в течение 30 мин.,

затем фильтруют, промывают разбавленной соляной кислотой, водой, этиловым спиртом. Промывные воды к фильтрату не добавляют. Получают 9,6 г (95%) хро.матографически чистого ксантозина. Со.держание. основного вещест1ва 99%.

Устанавливают рН фильтрата 3,0 я отделяют гуа.нозин. Получают 1,01 г (90%) хроматографически частого дигидрата гуаноз ина. Соде.ржание основного вещества

100%.

Формула изобретения

1. Способ разделения смеси ксантозияа ;и гуанозина, находящихся в водной среде, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и качества целевого продукта ,и упрощения процесса, исходную смесь подкисляют до рН 0,6-1,0 и перемешивают в течение 30-35 мин при 15-25° С,

затем отделяют ксаитозин, находящийся в осадке, и доведением рН раствора до 3,0- 6,0 осаждают дигидрат гуанозина, который превращают в гуанозин.

Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:

1. Патент Японии № 73/21960, кл. 16 Е 33, опублик. 1973 (прототип).