Штамм вниигенетика-6,продуцирующий глюкоамилазу Советский патент 1980 года по МПК C12D13/10 C12K1/00 

(54) ШТАММ ЛбРЕКЦгиииЗ NIGER ВНИИГЕНЕТИКА-6, ПРОДУЦИРУЮЦЩЙ ГЛЮКОАМИЛАЗУ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно, к производству ферментов, и касается получения штаммов, продуцирующих г.пюкоамилазу.

Глюкоамилаза используется для гидролиза крахмального сырья и находит широкое применение в народном хозяйстве, главным образом, в хлебопекарной, крахмало-паточной, пищевой, текстильной промышленности. Известны способы производства глюкос1милазы, основанные на микробиологическом синтезе этого фермента, осуществляемом различными штаммами культуры 15 .

Наиболее близким по технической сущности к изобретению является штамм Kepei g ieeus niger , т-33, продуцируизщйй глюкоамилазу с активностью в 20 пределах 50-80 ед/мл на 144 ч роста (по глюкозооксидазному методу). Штамм Т-33 хранится в Центральном музее промьаштенных микроорганизмов института ВНИИгенетика под регистрационным 25 номером ЦМПМ F -95 1.

Одним, из недостатков использования известных штаммов Лар&гд|еСи5 1 8ег при промышленном получении глюкоамилазы является обильное споро-30

образование, которое загрязняет культурную жидкость и окружающую среду конидиями.

Использование олигоспорогенных (со значительно ослабленным образованием конидий) штаммов позволит совершенствовать технологию выделения и очистки глюкоамилазы из культурной жидкости, улучшит качество готовых препаратов и уменьшит загрязненность окружающей среды,

Цель изобретения заключается в создании высокоактивного, олигоспорогенного отечественного штамма, образующего глюкоамилазу в количестве, достаточном для ее производства методом микробиологического синтеза в промьшшенном масштабе.

Предложенный штамм ВНИИгенетика-6 Aspergillus niger является олигоспорогенным мутантом исходного штамма и получен в результате применения генетико-селекционных методов. Штамм хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов и имеет регистрационный номер ЦМПМ F - 104.

Новый штамм ВНИИгенетика-6 отличается от прототипа морфологией колоний, интенсивностью гидролиза крахмала и желатины, скорост.ью роста на ломтиках картофеля и более высокой глюкоамилаэной активностью при сокращении времени культивирования. Исходный штамм Т-33 характеризует ся обильным кончдиеобраэованием, черным цветом колоний, крахмал гидролизует на 3-й сутки, желатину на 15-е сутки, на ломтиках картофеля слабый рост на 5-е сутки, максимальный уровень образования глЮкоамилазы составляет 50-80 ед/мл к 144 ч ферментации при вырагдивании на среде, содержащей 10% крахмала. В отличие от прототипа заявленный ;штамм ВНИИгенетика-6 характеризуется ослабленным конидиеобразованием, светло-коричневым цветом колоний, крахмал гидролизует на 2-е сутки, же латину - на 12-е сутки, на ломтиках картофеля хороший рост на 2-е сутки, спороношение на 5-е сутки, максималь ный уровень образования глюкоамилазы составляет 80-110 ед/мл к 120 ч ферментации при выращивании на среде, содержащей 7% крахмала. Культурно-морфологические свойства.Синтетическая среда Чапэка с са харозой. На 10-е сутки роста при диаметр колоний 63-70 KIM.Поверх ность колоний сильно склгщчатая плос кая, край ровный.Воздушный мицелий ОЛИгоспоровый,слабо развит;цвет коло нии коричневато-серый по краям желтый.Конидии светло-коричневого цвета, локализованы в основном в центре колонии. Среда не окрашена. Синтетическая среда Чапека с крах малом. Диаметр колоний 78-80 мм. Поверхность колоний плоская, ровная, в центре складчатая, край колонии ровн Воздушный мицелий олигоспоровый, слабо развит, цвет колонии сероватожелтый. Конидии светло-коричневого цвета, расположены в основном в центре колонии. Среда не окрашена. Сусло-агар. Диаметр колоний б2-68 Поверхность колонии сильносклащчатая в центре выпуклая, край колонии неро ный; цвет коричневато-серый, по края колонии желтый. Воздушный мицелий ол госпоровый, развит слабо. Конидии светло-коричневого цвета, расположены в основном в центре колонии в р диусе 13-15 мм. На ломтиках картофеля на 2-е сутки роста субстратный мицелий хорЬшо развит, желтого цвета, на 5-е сутки роста конидии в небольшом количестве светло-коричневого цвета. Ломтики не .окрашены. Физиологические признаки. Желатину разжижает послойно на 12-е сутки Молоко пептонизйрует к 12-м суткам. Нитраты не восстанавливает. Крахмал гидролизует на 2-е сутки. Отношение к источникам углерода, Глюкозу, галактозу, лактозу, фруктозу, мальтозу, ксилозу, маннозу, амнозу, сахарозу, арабиноэу, сорбит, лицерин ассимилирует. Пример. Использование штамма НИИгенетика-6 для получения глюкоамиазы.. Для получения исходного посевного атериала культуру выращивают на скоенном агаре (среда сусло-агар) при 33°С Б течение 14 сут. Со скошенного сусло-агара культуру ереносят в жидкую питательную среду ледующего состава %: Крахмал кукурузный 10,0 Кукурузный экстракт 2,0 Дрожжи пивные1,0 Бактериальная амилаза1 (ед. А с/г крахмала) Ортофосфорна я кислота0,05 рН доводится водным раствором аммиака до 5,6. Культуру выращивают в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл, сСдержащих 100 мл средда, на качалке (220 об/мин) в течение 18 ч при . Инокулят (в количестве 5%) переносят в ферментационную среду следующего состава,%: Крахмал кукурузный Мука кукурузная Мука соевая (HH).j НРОд Бактериазная 1 (ед.А с/г амилаза крахмала) Вода водопроводная (рН 5,6) Остальное. Процесс ферментации проводят в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл при объеме среды 100 мл на качалке (220 об/мин) при 33°С. Через 120 ч ферментации уровень активности глюкоамилазы при определении глюкозооксидазным методом составляет 80-110 ед/мл. Таким образом, предлагаемый штамм ВНИИгенетика-6 характеризуется также способностью синтезировать более высокий уровень фермента за более короткий срок ферментации. Формула изобретения Штамм. ftspergieeus вниигенетика-6, продуцирующий глюкоамилазу, Хранится в Центральном музее промьпаленных микроорганизмов института ВНИИгенетика, регистрационный номер ЦМПМ F-104. --- Морфологические признаки.Синтетическая среда Чапека с сахарозой.На 10-е сутки роста диаметр колоний 63-70 мм, поверхность колонии сильно складчатая, плоская, край ровный.

Воздушный мицелий слабо развит. Цвет колоний коричневато-серый по краям желтый. Мицелий олигоспоровый, конидии йвйтло-коричневого цвета, локапизрваны преимущественн j в центре Колонии, Среда не окрашена.

Синтетическая среда Чапека с крахмалом. На 10-е сутки роста диаметр колоний 78-80 мм, поверхность колонии плоская, ровная, в центре складчатая, край ромый. Воздушный мицелий слабо развит цвет колонии серовато-желтый. :Мицелий олигоспоровый, конидии светло-коричневого цвета, локализованы в основном в центре; Среда не окрашена.

Сусло-агар. На 10-е сутки роста диаметр полоний 62-68 мм. Поверхност колонии плоская, сильно складчатая, в центре слегка выпуклая, край колонии неровн-яй. Воздушный мицелий слабо развит. Мицелий олигоспоровый, конидии светло- коричневого цвета, локализованы в основном в центре колонии. Среда не окрашена.

Среда Сабуро. На 10-е сутки рбста

.диаметр колонии 58-60 мм.Поверхность

колонии плоская,слабоскладчатая,край

колонии ровный.Воздушный мицелий плохо развит,белого цвета,в центре колонии окрашен в желтовато-коричневый цвет.Мицелий олигоспоровый,цвет конидий светло-коричневый.

Ломтики картофеля. На 2-е сутки роста субстратный мицелий хорошо развит, желтого цвета, на 5-е сутки роста конидий в небольшом количестве светло-коричневого цвета. Ломтики не окрашены.

o

Физиологические признаки.Желатину разжижает.Молоко пептонизирует.Нитраты не восстанавливает.Крахмал гйдроОтношение к источникам углерода.

5 Глюкозу,галактозу,лактозу,фруктозу, мальтозу,ксилозу,маинозу,рамнозу,сахарозу, арабинозу, сорбит, гли11ерин, ассимилирует.

0

Источники инфор««ации, принятые во внимание при экспертизе

1. Штамм I Ac,pergieeue Т-33. Хранится в Центральном музее npo№miленных микроорганизмов института

5 ВНИИгенетика под регистрациояньм номером ЦМПМ Р-95.