ШТАММ ASPERGILLUS AWAMORI - ПРОДУЦЕНТ ГЛЮКОАМИЛАЗЫ Советский патент 1994 года по МПК C12N9/34 C12N15/00 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм микроорганизмов Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцент глюкоамилазы.

Известна способность микроорганизмов вида Aspergillus awamori продуцировать глюкоамилазу [1] .

Известен штамм Aspergillus awamori 466-продуцент глюкоамилазы [2] . Максимальный уровень накопления глюкоамилазы в культуральной жидкости при использовании известного штамма 183 ед. /мл.

Цель изобретения - получение нового штамма - продуцента глюкоамилазы.

Штамм ВНИИгенетика 120/177 получен из производственного штамма Aspergillus awamori 466 в результате применения генетико-селекционных методов. В отличие от штамма 466 новый штамм ВНИИгенетика 120/177 является морфологическим и биохимическим мутантом: имеет конидии серого цвета, нуждается для роста в рибофлавине, обладает более высоким уровнем накопления глюкоамилазы, чем ранее известные штаммы Aspergillus awamori.

Морфологические признаки штамма Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы.

Штамм представляет собой мицелиальный гриб, гифы бесцветные, шириной 0,44-2,8 м, головки конидиеносцев круглые, их размер 1,2-2,8.

Сусло-агар. На 6 сутки роста при 30^оС диаметр колоний 87-90 мм. Поверхность колоний слабоскладчатая, плоская, край колонии неровный, цвет серый. Воздушный мицелий олигоспорогенный, развит хорошо. Конидии серого цвета.

Среда РТ с кукурузным экстрактом. На 6 сутки роста при 30^оС диаметр колоний 74-78 мм. Поверхность колоний слабоскладчатая, плоская, край колонии неровный, цвет серый, по краям колонии светло-серый ободок. Воздушный мицелий олигоспорогенный, хорошо развит. Конидии серого цвета.

Синтетическая среда Чапека с сахарозой. На 6-14 сутки культивирования при 30^оС рост отсутствует, нуждается для роста в рибофлавине.

Синтетическая среда Чапека с крахмалом. На 6 сутки роста при 30^оС диаметр колоний 85-90 мм. Поверхность колоний плоская, слабоскладчатая, край колонии неровный. Воздушный мицелий олигоспорогенный, хорошо развит. Цвет колоний серый. Среда не окрашена.

На ломтиках картофеля на 2 сутки роста субстратный мицелий хорошо развит, ярко-желтого цвета, на 3 сутки спороношение серого цвета. Ломтики не окрашены.

Физиологические признаки.

Желатину разжижает послойно на 6 сутки.

Молоко пептонизирует на 8 сутки. Крахмал гидролизует на 2 сутки.

Нитраты не восстанавливает.

Отношение к источникам углерода: глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, фруктозу, маннит, маннозу, глицерин ассимилирует.

Штамм не токсичен.

П р и м е р 1. Культуру штамма Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177, выращенную в течение 7 сут при 30^оС на агаризованной среде РТ с кукурузным экстрактом, переносят на жидкую посевную среду следующего состава, % :
Крахмал картофельный 6,00
NaNO₃ 0,91
KH₂PO₄ 0,10
KCl 0,05
MgSO₄ 0,05
FeSO₄ 0,01
Солодовые ростки 3,00
Вода - водопроводная.

Посевной материал выращивают в колбах емкостью 750 мл, содержащих 100 мл среды, на качалке, делающей 220-240 об/мин, в течение 20-24 ч при 28^оС. Инокулят передают в ферментационную среду в количестве 3-5 об. % .

Состав ферментационной среды, % :
Кукурузная мука 20,0
Бактериальная ами-
лаза 3 ед. /г крахмала
Кукурузный экстракт 0,5
Вода - водопроводная; рН доводят ортофосфорной кислотой до 5,6-6,0.

Процесс ферментации проводят методом глубинного культивирования в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл, содержащих 100 мл среды, при 28^оС на качалке, делающей 220-240 об/мин. Через 120 ч ферментации уровень активности глюксамилазы составляет 240 ед. /мл.

П р и м е р 2. Культуру штамма Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177, выращенную в течение 7 суток при 30^оС на агаризованной среде РТ с кукурузным экстрактом, переносят на среду с пшеничными отрубями. Выращивание на пшеничных отрубях производят при 30^оС в течение 6-7 сут. Споровый материал, выращенный на пшеничных отрубях, подращивают в ферментационной среде на качалке при 30-34^оС в течение 18-20 ч. Посевной материал передают в ферментационную среду в количестве 0,008-0,01 об. % .

Состав ферментационной среды, % :
Кукурузная мука 10,0
Крахмал 5,0
БВК 1,5
Амилосубтилин 3 ед. /г крахмала
Диаммоний фосфат 0,1
Вода - водопроводная; рН доводят ортофосфорной кислотой до 5,6-6,0.

Процесс ферментации проводят методом глубинного культивирования в аппарате емкостью 7 м³ при 34^оС. Аппарат снабжен турбинной мешалкой, делающей 280-330 об/мин. Выход глюкоамилазы после 120 ч ферментации составляет 340 ед. /мл. (56) Авторское свидетельство СССР N 753897, кл. C 12 N 15/00, 1978.

Авторское свидетельство СССР N 800185, кл. C 12 N 9/34, 1979.

Штамм Aspergillus awamori ВНИИ генетика 120/177 (коллекция Центрального музея промышленных микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов, регистрационный номер ЦМПMF = 166) - продуцент глюкоамилазы.