Устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое Советский патент 1981 года по МПК C12M3/04 

Изобретение относится к ветеринарии и медицине и может быть использовано при производстве вакцин, сывороток и других биологических активных препаратов. Известны специальные устройства с большой ростовой поверхностью, образованной различными конструктивными элементами 1. Известно устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое, содержащее герметически закрытый сосуд с газовводом для аэрирования и плоски элементы для роста культуры, расположенные горизонтально один над другим Клетки в этом устройстве растут на пластинках, погруженных в питательную среду, которой заполняют сосуд. Для циркуляции питательной среды и насьще ния ее кислородом применяют магнитную мешалку, механический насос или эр... лифт 2. Недостатками известных устройств являются сложность конструкции, боль шой расход питательной среды и ограниченная аэрация культуры. Цель изобретения - улучшение условий аэрации, сокращение расхода питательной среды и упрощение конструкции. Эта цель достигается тем, .что в устройстве для выращивания клеток и вирусов 6 монослое, содержащем герметически закрытый сосуд с газовводом для аэрирования и плоские элементы для. роста культуры, распдложеяные горизонтально один над другим, элементы для роста выполнены в виде кювет, имеющих криволинейное сопряжение стенок с днищем а газоввод выполнен в виде колг лектора, установленного-вертикально и снабженного отверстиями для подвода газа к каждой кювете. Криволинейное сопряжение.стенок кювет с днищем обеспечивает попадание питательной среды в нижестоящие кюветы при подаче в верхнюю кювету и за -полнении нижестоящих кювет путем пе5релива через края стенок вьшестоящих кювет. На чертеже изображено устройство для выращивания клеток и вирусов в мо нослое, общий вид. Устройство включает сосуд 1, который герметично закрывается крьппкой 2. 8сосуде 1 установлены кюветы 3, выполненные из титана или термостойкого стекла. Кюветы фиксируются в пазах держателей 4, закрепленных, в свою очерець, в пластинах 5 и 6. В зазорах между кюветами размещен подающий воздух газоввод 7 с отводами 8, расположенными на уровне каждой из кювет. На крышке 2 закреплены пробоотборное устройство 9, трубопроводы 10 и И со ответственно для заполнения и выгрузки клеток и вируссодьржащего материала, входной 12 и выходной 13 бактериальные фильтры. Все детали устройству могут быть легко разобраны, вымыты и после сборки простерилизованы паром в автоклаве Загрузка устройства осуществляется при соблюдении асептических условий. Устройство при этом находится в вертикальном положении. Бутыпь с клеточной суспензией посевной концентрации соединяют с пробоотборным устройством 9и с помощью сжатого воздуха 1|роизводят заполнение- кювет 3. При этом жидкость поступает через трубопровод 10( трубопровод 1I перекрыт} вначале на верхнюю кювету, а после ее заполнения перетекает через края ее бокоБЫК стенок и далее по выпуклому сопря жению с днищем в нижестоящие кюветы. Заполненное устройство устанавливается в термальном помещении с темпе ратурой Ъ1°С. При этой температуре клетки на дне кювет формируют монослой. В процессе культивирования клеток осуществляется аэрирование и стабилизация рН среды за счет подачи над кюветами 3 воздуха с 5% углекислого газа. Газовая смесь подается через бактериальный фильтр 12 и распределяется над культурой клеток в кюветах. После образования монослоя (через 2436 ч) все устройство ставят в гори1. 4 зонтальное положение и удаляют ростовую питательную среду с помощью ежа-, того воздуха через трубопровод 11 (.трубопровод 10 перекрыт . Операция заполнения кювет 3 питательной средой содержащей посевной вирусный материал, осуществляется таким же образом, как и при загрузке суспензии клеток. Далее устройство располагают в термальном помещении с температурой 37 С, где и происходит накопление вирусов при тех же условиях аэрирования, что и для размножения клеток. Сбор вируссодержащего материала производится из устройства, находящегося в горизонтальном положении, через трубопровод 11 с помощью сжатого воздуха. Использование для выращивания клеток и вирусов устройства с разделенными газовой фазой кюветами и аэратором с отводами выгодно отличает предлагаемое устройство от известных, так как новые элементы устройства позволяют уменьшить расход питательной сре,ды и обеспечивают насыщение питательной среды кислородом без специальных устройств ( мещалки, насос, эрлифтХ Применение предлагаемого устройства повышает экономичность и увеличивает производительность труда при выпуске противовирусных препаратов. Пример, Культуру клеток КМС выращивали в матрасах ( контроль ) и в предлагаемом устройстве использовали среду 0,1% ГЛА на растворе Эрла с 10% сыворотки свиней. Клетки выращивали в течение 48 ч и заражали вирусом. Опыты пройодились при следующих технологических условиях: посевная концентрация клеток 3,0-4,0 х 10 кл/ип множественность заражения 0,0t0,03 ГАЕ 50/кл; рН среды 7,3-7,5; температура инкубирования 37+0, fустройство и контрольные матрасы устанавливали в общем термостатируемом помещении), Оценка накопления вируса проводиась через 4 сут. Результаты проведенных опытов представлены в таблице.

Матрас однолитровый (Йена, Шотт)

Предлагаемое устройство для вьфащивания клеток и вирусов в монослое

200 100 7,5-7.6 7,0-7,5 100

530 560 7,5-7,6 7,0-7,5 560

Как видно из таблицы, использовани устройства для вьфаощвания клеток и вирусов позволяет получать вирусный материал такой же активности, как и в контроле.

При использовании предлагаемого устройства для выращивания клеток и вирусов в монослое сокращается время на загрузку и выгрузку клеточного и вирусного материала, уменьшается брак из-за бактериального загрязнения куль туры клеток, увеличивается производительность в 5 и более раз, в зависимости от объема заливаемой питательной среды и исходного вирусного материала.

Формула изобретения

Устройство для выращивания клеток и вирусов в монослое, содержащее герметически закрытый сосуд с газовводом для аэрирования и плоские элементы для роста культуры, расположенные горизонтально один над другим, отличающееся тем, что, с целью улучщения условий аэрации, сокращения расхода питательной средал и упрощения конструкции, элементы для роста выполнены в виде кювет, имеюпщх криволинейное.сопряжение стенок с днищем, а газоввод выполнен в виде коллектора, установленного вертикально и снабженного отверстиями для подвода газа к каждой кювете.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

rve