Способ определения нуредала в биологических объектах Советский патент 1981 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относитсяГ к медицине, в частности к токсикохимическому ана лизу, и касается техники определения нуредала в биологических объектах. Наиболее близким по своей сущности к изобретению является способ определения нуредала в биологических объектах путем экстракции органическим растворителем с последующей хроматографией экстракта в тонком слое в системе органичес,ких растворителей и выявлением зоны нуредала проявляющим реагентом l}. Недостатком известного способа яв ляется низкая селективность, так как ванадат аммония используют для идентификации многих препаратов производ ных изоникотиновой кислоты, и невысокдя чувствительность определения нуредала (20 мкг), а также длительное время проведения анализа, вследствие двукратного хроматографировани в системе растворителей и предварительного высушивания пластинки в течение 30 мин. Цель изобретения -повышение точ.ности и ускорение .способа. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения нуредала в биологических объектах путем экстракции органическим растворителем с последующей хроматографией экстракта в тонком слое в системе органических растворителей и выявлением зоны нуредала проявляющим реагентом, экстракцию проводят хлороформом,полученный экстракт хроматографируют в системе растворителей хлороформ:этанол: аммиак, взятых в соотношении 20,0:10,0:0,2-1,0, а в качестве проявляющего реагента используют 2 М раствор молибдата натрия. . Способ осуществляют следующим образом. Биологический объект, содержащий нуредал, растирают, переносят в колбу и экстрагируют хлороформом в грех3кратном повторении. З.атом экстракт фильтруют в мерную колбу емкостью 50 мл и разбавляют хлороформом до метки. На стартовую линию пластинки силуфол размером наносят микрокапилляром 0,01 мл раствора в виде пятен диаметром 1 мм для проведения хроматографии. Хроматографируют в си стеме растворителей хлороформ:этанол :аммиак, взятых в соотношении 20,0: :10,0:0,2-1,О. Пробег фронта растворителя 10 см. Далее пластинку подсушивают, и в качестве проявляющего реагента используют 2 М раствор молибдата натрия. . . Проведение экстракции нуредала из биологического объекта хлороформом в трехкратном повторении позволяетполнее экстрагировать нуредал. Использование смеси pacтвopитeJ;leй хлороформ:этанол:аммиак в предлагаемом соотношении повышает чувствительность идентификации в Ц раза. Изменение соотношения первых двух компонентов смеси нежелательно,так как приводит к наложению зон нуредала и экстрактивных веществ. Количество аммиака в смеси можно варьировать в зависимости от природы исследуемого объекта, при этом содер жание аммиака в смеси0,2 ч позволяет отделить нуредал от экстрактивных веществ, выделенных из печени, и крови,а при содержании аммиака 1,0 ч. отделить нуредал от экстрактивных веществ моЧи и таблеточной массы. Использование 2 М раствора молиб дата натрия в качестве проявляющего реагента позволяет получить краснобурое окрашивание только с нурёдало при его низких концентрациях. Пример 1. Одну таблетку, содержащую 25 мг нуредала, растира.ю количественно переносят в колбу и экстрагируют хлороформом 3 раза по 15 мл при рН 5-6. Экстракт фильтрую в мерную колбу емкостью 50 мл и раз бавляют хлороформом до метки. На стартовую линию пластинки силуфол .размером наносят микрокапил ляром 0,01 мл полученного раствора виде пятен диаметром 1 мм. Проведение хроматографии на пластинке сил фол позволяет повысить чувствитель ность определения нуредала, так как зона исследуемого вещества получается более четкой и располагается в центре пластинки (R 0,53-0,027). Затем хроматограмму помещают в систему растворителей хлороформ:этанол: :аммиак, взятых в соотношении 20:10: :1,0. Пробег фронта растворителя 10 см. Пластинку подсушивают и опрыскивают 2 М раствором молибдата натрия. Нуредал проявляется в виде красно-бурых пятен, R 0,53-0,027. Чувствительность проявляющего реагента по отношению к нуредалу составляет 5 мкг. П,ример 2. Из затравленных биологических объектов (кровь, моча, печень) нуредал извлекают при рН 5-6 хлороформом. Затем на стартовую линию пластинки силуфол размером 5x11 наносят микрокапилляром 0,01 мл полученного экстракта в виде отдельных пятен диаметром 1 мм. Хроматограмму помещают в систему растворителей хлороформ:этанол:аммиак, взятых в соотношении 20:10:0,2. Пробег фронта растворителя 10 см. Пластинку подсушивают, опрыскивают 2 М раствором молибдата натрия. Нуредал проявляется в виде красно-бурых пятен, R 0,530,55. Чувствительность проявляющего реагента по отношению к нуредалу составляет 5 мкг. Предлагаемый способ позволяет с высокой точностью определять нуредал в биологических объектах и сократить время проведения анализа по сравнению с известным в 2 раза. Способ прост, общедоступен и не требует специального оборудования для его реализации. Формула изобретения Способ определения нуредала в биологических объектах путем экстракции органическим растворителем с последующей хроматографией экстракта в тонкомслое в системе органических растворителей и выявлением зоны нуредала проявляющим реагентом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, экстракцию проводят хлороформом, полученный экстракт хроматографируют в системе растворителей хлороформ:этанол:аммиак, взятых в сботношении 20,0:10,0:0,2-1,0, е

58902А96 .

в качестве проявляющего реагента 1. Фартушный А.Ф, Идентификация и используют 2 М раствор молибдата определение нуредала в биологичеснатрия.ком материале. - Фармацевтический

Источники информации,журнал. М., Медицина, 1979t № 6,

принятые во внимание при экспертизе с.28-31.