Способ определения метилового эфира L-фенил-L-(пиперидил-2)уксусной кислоты гидохлорида Советский патент 1982 года по МПК G01N31/08 

1

Изобретение относится к медицине, а именно к токсико-химическому аналит зу, и может быть использовано при определении метилового эфира о фенил- oi -(пиперидил-2) уксусной кислоты гидрохлорида (метилфенидата).

Известны способы определения метилфенидата путем идентификации его в тонком слое сорбента.

Известен способ определения метилфенидата, который экстрагируют из биологического объекта и хромотографируют полученный экстракт в тонком слое сорбента. В качестве сорбента используют силикагель. Хроматографирование осуществляется в системе растворителей хлороформ-гептан этанол, взятых в соотношении 1:1:ltlJ.

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения метилфенидата путем обработки анализируемой пробы эфиром, с последующим хроматографированием на тонком слое сорбента - окиси алюминия. Край пластрттт ки с нанесенной пробой смеси веществ и свидетеля погружают в систему растворителей проПаиол - буферная смесь, взятых в соотношении 9:1, рН смеси растворителей равен ,0. По мере продвижения жидкостей по пластине происходит разделение смеси веществ. Выявление зон метилфенидата проводят йод-платиновым реагентом. Зоны метилtoфенидата определяют по ,8 и по появлению желто-оранжевого окрашивания 2.

Однако известные способы применяют лишь- для определения значитель15ного количества метилфенидата (1-10мг) и не используют для определения минимального содержания вещества в исследуемом объекте вследствие малой чувствительности. Кроме того, обла20дают малой специфичностью идентификации, так как при исследовании биологического материала из него . .экстрагируются совместно с метилфени393датой и балластные вещества, которые на хроматограмме также дают зону Rr 0,8-0,9. что затрудняет определение зон метилфенидата. Поэтому известные способы не применимы для токсико-химического анализа на метилфенидат. Цель изобретения - повышение чувст вительности и специфичности определения. Поставленная цель достигается способом определения метилового эфир& о -фенил-о -(пиперидил-2)уксусной кислоты гидрохлорида путем обработки анализируемой пробы хлорофбрмом с лоследующим хроматографированием на тонком слое сорбента в системе растворителей и детектированием полученной хроматограммы реагентом, в качест ве органического растворителя используют хлороформ, в качестве систем растворителей используют систему хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт, взятые в объемном отношении 2,5-3,5 : 0,8-1,2 : 2,8-3,2, предварительно хлорируют хроматоргамму перед детектированием и в качестве реагента используют о-толидин. Экстракт метилфенидата хроматографируют на тонком слое силикагеля марки КСК, КСК ЛСЛ/25 или на тонком слое силуфола. Установлено, что экстракцией хлороформом достигается наиболее полное извлечение метилфенидата из исследуе мого объекта, Хроматографирование на тонком слое .сорбента в системе хло роформ - уксусная кислота - этиловый спирт позволяет выявить малое качест во метилфенидата в исследуемом объек те. Используемое соотношение компонен тов позволяет качественно идентифици ровать 0,2-0,3 мкг метилфенидата в пятне против 1-10 мг в известном спо собе. При использовании данной систе мы растворителей повышается чувствительность идентификации почти в 5 тыс. раз и ее специфичность. Так, величина пробега растворителей Rr для метилфенидата в описываемых условиях составляет 0,,01 при анализе на силикагеле КСК, КСК ЛСЛ/25 и RJ 0,9 + 0,01 на силуфоле. Учитывая, что RX балластных веществ при извлечении метилфенидата из биологических объектов 0,8-0,9 наложение зон исследуемого метилфенидата и балластных веществ не происходит, в то время как в известном способе R метилфенидата 0,8 и R: балластных веществ 0,8-0,9. Установлено, что сорбенты силикагель КСК, КСК ЛСЛ/25+ и силуфол повышают чувствительность определения метилфенидата, так как позволяют получить четкую зону исследуемого вещества в центре пластинки. Хлорирование и последующее опрыскивание хроматограмм о-толидином позволяет обнаружить зоны метилфенидата в виде синих пятен. П р и м е р 1. Две таблетки центендрина с содержанием по 10 мг метилфенидата в каждой растирают и исчерпывающе экстрагируют хлороформом (3 раза по 5 мл хлороформа). Экстракт отфильтровывают и доводят объем фильтрата хлороформом до 25 мл. Затем на стартовую линию хроматографической пластинки 9x12 со слоем силикагеля КСК ЛСЛ/25+ наносят микрокапилляром 0,005 мл полученного раствора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мл. Хроматограмму развивают в системе хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт, компоненты которой берут в соотношении 3:1:3- Пробег фронта растворителя составляет 10 см. Затем хроматограмму высушивают на воздухе, помещают в камеру для хлорирования на 1-2 мин. Камеру для хлорирования готовят следующим образом. В камеру наливают смесь равных частей 1, водного раствора перманганата калия и 10 -ного раствора соляной кислоты. После хлорирования хроматограмму выдерживают на воздухе в течение 10 мин и опрыскивают о-толидином. Для приготовления раствора о-толидина растворяют 1бО мг о-толидина в 30 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем водой до 500 мл, добавляют 1 г йодистого калия. Зоны метилфенидата проявляются пятном синего цвета. г метилфенидата на тонком слое силикагеля КСК, КСК, ЛСЛ/25 составляет 0,,01. Чувствительность детектора о-толидина по отношению к метилфенидату составляет О,2-0,3 мкг в пятне. Приготовление пластин для тонкослойной хроматографии. Растворяют смесь 2, г силикагеля, 0,1б г гипса и 6,7 мл воды, затем наносят смесь на стеклянную пластинку размером 9x12, сушат на воздухе и активируют в сушильном шкафу при Т ПОС в течение 20 мин П р и м е р 2, Метилфенидат, извлеченный из затравленной биологической жидкости (кровь, моча), наносят на стартовую линию хроматогра фимеской пластинки размером 5x11 со споем силуфола. Наносят, микрокапилляром 0,005 мл полученного рас вора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мм, на расстоянии 2 см наносят свидетель. Хроматограмму развивают в системе хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт, компоненты берут в соотношении 3:1:3. Пробег фронта растворителей составляет 10 см. После чего хроматограмму подсушиваю на воздухе, помещают в камеру для хлорирования на 1-2 мин, затем хроматограмму выдерживают на воздухе в течение 15 мин и опрыскивают ;о-ТОЛИ ди ном. J П р и м е р 3- Две таблетки цен.тедрина с содержанием по 10 мг мети фейидата в каждой растирают и исчер пывающе экстрагируют хлороформом 3 раза по 5 мл хлороформа. Экстракт отфильтровывают и доводят объем ф 1льтрата хлороформом до 25 мл. За тем на стартовые линии хроматографи ческих пластинок размером 9x12 со слоем КСК, КСК ЛСЛ/25+ и силуфола 5x11 наносят по 0,005 мл раствора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мм. Хро,матограммы развивают- в системе хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт, взятых в объемном соотно шении 2,5 : 0,8 : 2,8.Пробег фронта растворителей Тв см. После подсушивания на воздухе хроматограмму поме щают в камеру для хлорирования на 1-2 мин (в камеру наливают смесь равных частей 1,5 -ного раствора перманганата калия и 10 -ного раств ра соляной кислоты), выдерживают на воздухе 10-15 мин и опрыскивают раствором о-толидина. RP метилфени дата на силуфоле Q,kk, на сорбенте КСК, КСК ЛСЛ/25 ,50. П р и м е р 4. Две таблетки центедрина с содержанием по 10 мг метилфенидата в каждой растирают и исчерпывающе экстрагируют хлороформом 3 раза по 5 мл хлороформа. Экстракт отфильтровывают и доводят объем фильтрата хлороформом до 25 мл. Затем на стартовые линии хроматографических пластинок размером 9x12 со слоем КСК, КСК ЛСЛ/25 и силуфола 5x11 наносят 0,005 мл раствора метилфенидата в хлороформе в виде пятен диаметром около 1 мм. Хроматограммы развивают в системе хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт (объемное соотношение 3,5:1,2: :3,2). Пробег фронта растворителей 10 см. После подсушивания на воздухе хроматограмму помещают в камеру для хлорирования на 1-2 мин (в камеру наливают смесь равных частей 1, раствора перманганата калия и 10%-ного раствора соляной кислоты), выдерживают на воздухе 1015 мин и опрыскивают раствором о-толидина. Rr метилфенидата на силуфоле 0,52, на сорбенте КСК, КСК ЛСЛ/25 R 0,56. Предлагаемый способ позволяет с высокой чувствительностью и специфичностью качественно определить метилфенидат, В предлагаемом способе специфичность повышена за счет использования величин RP, являющихся характерными для токсико-химических веществ в данных условиях эксперимента. Значительные различия в величинах RO веществ свидительствуют о высокой разделяющей способности, рекомендуемой хроматографической системы по отношению к веществаг- (R метилфенидата на КСК, КСК ЛСЛ/а5 0,53-0,01; морфина К|-а,12,- R| кодеина 0, 0,01, R, кокаина 0;- Rr стрихнина О, промедола 0; Rr. фенобарбитала и барбамила О) . RP метилфенидата на силуфоле 0,49 0,01, RI морфина 0,17 0,02 Rr кодеина 0,,02, кокаина, стрихнина, промедола, фенобарбитала и барбамила R 0. Таким образом, предлагаемый способ расширяет возможности идентификации метилфенидата, так как-установлено, что важные в токсико-химическом отношении вещества: морфин, кодеин, стрихнин, кокаин, промедол, фенобарбитал, барбитал не мешают его обнаружению, в то время как а известном способе Rr метилфенидата совпадает сRJ балластных веществ . Кроме того, предлагаемый способ позволяет почти в 5 тыс. раз повысить чувствительность определения.

Формула изобретения

Способ определения метилового эфира oi -фенил- -(пиперидил-2) уксусной кислоты гидрохлорида путем обработки анализируемой пробы органическим растворителем с последующим хроматографированием на тонком .слое сорбента в системе растворите,лей и детектированием полученной хроматограммы реагентом, о т л и4ающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и специфичности определения в качестве органического растворителя исполь,зуют хлороформ, в качестве системы растворителей используют систему хлороформ - уксусная кислота - эти

З+ЗбЗ8

ловый спирт, взятые в объемном отношении 2,5-3,5 : 0,8-1,2 : 2,8-3,2, перед детектированием хроматограмму предварительно хлорируют и в качестве реагента используют о-толидин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Taraj В.А. Metabolism and О disposition of methyl - phenidate

studies In man and animals - I. Pharmacol and Exp. Ther, 197, -191, №3, p. 535-5 7.

2.Schubert B. Detection and

5 Identification of Methylphenidate in Human Urine and Blood Samples Actachemica Scandinavica, 2(1970), № 2, p. (прототип).