Способ определения аминогликозидных антибиотиков в биологических жидкостях Советский патент 1981 года по МПК G01N21/27 G01N21/78 G01N33/52 

(5) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИНО-ГЛИКОЗИДНЫХ АНТИБИОТИКОВ В БИОЛОГИЧЕСКИХ Изобретение относится к аналитической химии и может найти практическое применение, например, в клиническом анализе при опредеТ1ении уровня амино-гликозидных антибиотиков в различных биологических жидкое тях человека и животных. Известен способ определения но-гликозидных антибиотиков в биоло гических жидкостях, включающий обра ботку прббы реактивом с последующим колориметрированием, причем в качестве реактива используют периодат тиобарбитуровой кислоты V.M Однако известный способ недостаточно точен, поскольку его чувствительность 2,5 мкг/мл. Целью изобретения является повышение чувствительности м точности и определения. Поставленная цель достигается тем, что в качестве реактива исполь ЖИДКОСТЯХ зуют смесь водных растворов соли празеодима и фталексона-S при их соотношении 2:8, причем обработку проводят в водноэтанольной среде при рН 5,3-5.8. В результате реакции формируется соединение, окрашенное в синий цвет (максимум полосы поглощения при 619 нм) с высоким значением молярного коэффициента поглощения. Например, для соединения мономицина с празеодимом и фталексоном-S эта величина равна ,для гентамицина 160000, для зигомицина - 155000, При проведении реакции в водном этаноле (1:1) взаимодействующие компоненты вступают в комплексообразование в соотношении антибиотик:празеодим: .фталексон 1:2:8. Проведению реакции не мешают сульфаты, нитраты, хлориды, ацетаты щелочных и щелочноземельных ионов, большинство ионов металлов при РН 5,, углеводы, также аминокислоты, как глицин, аналин, тирозин триптофан, новокаин, бензилпенициллин, тетрациклиновые антибиотики (если их содержание в анализируемом образце не превышает 1000-кратное количество по отношению к амино-гликозидным антибиотикам). Мешающее влияние железа (lit), алюминия, меди, кальция, цинка устраняется введением в исследуемый раствор до 20кргтных количеств по отношению к празеодиму фторида натрия. Пример 1. Определение амино-гликозидных антибиотиков в крови. К 0,2 мл крови приливают 2 мл воды; 2 мл 30 -ного водного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин. Центрифугат переносят в колбу на 20 мл, вносят 0,2 мл О, водного раствора аскорбиновой кислоты; 0,1 мл 0,01 М фторида натрия; 0,2 мл 10%-ного водного аммиака; 5 мл ацетатного буяера с рН 5i5; 1 мл 0,002 М фталек сона-S; 0,5 мл 0,001 М хлорида пра-, зеодима и 96%-ный этанол до 20 мл. Через 2 мин измеряют оптическую плот ность раствора в двухсантиметровой кювете при 619 нм относительно воды Содержание амино-гликозидных анти биотиков находят по калибровочному графику, построенному обработкой, проб крови, в которые добавлены раз личные количества того или иного ан тибиотика. . Пример 2. Определение ами но-гликозидных антибиотиков в моче. К 0,5 мл мочи приливают 0,5 мл воды; 0,2 мл 0, водного раст вора аскорбиновой кислоты; 0,1 мл OjOl М фторида натрия; 10 мл ацетатного буферного раствора с рН 1 мл 0,002 М водного раствора фталексона-S; 0,5 мл 0,001М хлорида празеодима перемешивают и вносят 96%-ный этанол до 20 мл. Через 2 ми измеряют оптическую плотность раств 84 ра в двухса-нтиметровой кювете при б19 нм относительно воды. Содержание амино-гликозидных антибиотиков находят по калибровочному графику, построенному обработкой проб мочи, в которые вносятся возрастающие количества тех или иных .амино-гликозидных антибиотиков. Пример 3. Определение амино-гликозидных антибиотиков в молоке. К 0,2 мл молока приливают 2 мл воды; 0,2 мл раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 мин, Центрифугат фильтруют в колбу на 20 мл, промывают осадок на фильтре 5 мл ацетатного буфера с рН в колбу вносят 0,2 мл 0,01%-ого водного раствора аскорбиновой кислоты; 0,1 мл 0,01 М фторида натрия; 0,3 мл водного аммиака, перемешивают содержимое колбы, приливают 1 мл 0,002 М водного раствора фталексона-S; 0,5 мл 0,001 М хлорида празеодима и этанол до 20 мл. Через 2 мин измеряют оптическую плотность раствора в двухсантиметровой кювете при 61 9 нм относительно воды. Содержание антибиотиков находят по калибровочному графику, строящемуся путем обработки проб молока, в которые вносятся оозрастающие количества того или иного антибиотика. Результаты определения амино-гликозидных антибиотиков в различных материалах представлены в таблице. Метрологические характеристики способа определения амино-гликозидных антибиотиков в биологических материалах следующие: число опытов , критерий Стьюдента , при степени надежности ,95. X - среднеарифметическое из п определений, S - квадратичная ошибка. Введено 0,1 мкг антибиотика в 1 мл исследуемого материала.

Мономицин 0,09810,002 0,097±0,003 Канамицин 0,098±0,002 0,09710,003

0,,002 0,099±0,002

Зигомицин 0,098+0,002 0,,003 Гентамицин 0,099tO,002 0,,003

Изобретение позволяет определять 0,01-50 мкг мономицина, кинацина, неомицина, зигомицина, наромомицина, гентамицина, стрептомицина и гидроксимицина в крови, молоке и моче человека и животных. Результаты идентичны, независимо от того, от какого объекта (человека, собаки, кролика или мышей) был взят материал для проведения исследования.

Чувствительность способа 0,01 мкг/ /мл .

Формула изобретения

Способ определения амино-гликозидных антибиотиков в биологических

Продолжение таблицы

0,099±0,002 0,,002

жидкостях, включающий обработку пробы реактивом с последующим колориметрированием, отличающийс я тем, что, с целью повышения чувствительности и точности определения, в качестве реактива используют смесь водных растворов соли празеодима и фталексона-5 при их соотношении 2:8, причем обработку проводят в водноэтанольной среде при рН 5,3.-5,8.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Fukumoto Hisako J.Hyg.Chem., 1976, Po22, 380-38 o