го растворителя, например метанола или этанола. Полученньп таким образом осадок собирают фильтрованием или центрифугированием с последующей лиофилизацией с получением вещества KS. Это вещество KS растворяют в воде,добавляют в приготовленный раство равный объем насыщенного.водой фенола, и конечную смесь подвергают инте сивному встряхиванию в холодных условиях, в результате чего получают водный слой. В этот водный слой до авляют насыщенный водой фенол, и за тём цикл встряхивания и центрифугир вания повторяют дважды. Полученные таким образом водные слои объединяют и затем добавляют в них диэтиловый эфир. Конечную смесь подвергают встряхиванию и собирают водный слой Остаточный серный эфир из водного слоя удаляют барботированием через него газообразного азота. В полученный таким образом водный слой добав. ляют четыре объема чистого этанола. Полученный в результате этого осадок растворяют в буфере 0,01 М трис-соля мая кислота (рН 6,95), а конечньй раствор заливают в целлюлозную колон ну, которую предварительно активируют и обрабатывают указанным буфером Этим же буфером осуществляют элюирование из колонны. Фракции, которые содержат вещество KS-2-A, собирают и после диализа и лиофилизации в виде белого аморфного порошка получают вещество KS-2-A. Вещество KS-2-A обладает следующи ми физико-химическими свойствами. Элементарный анализ, %: С 39,5; Н 6,5; N1,1. Зольность: следы (0,4%). Молекулярный вес: 9000±3000 (путем ультрафильтрования); 7000-9000 (центрифугпрованием по градиенту рав новесной плотности); 8000: 3000 (согласно методу поляризации флюрресциена) . Внешний вид - белый аморфный порошок. Температура разложения 185 С (данные основаны на измерении температуры побурения в соответствии с капиллярным методом с применением си ликонового масла WF-30). УФ-спектрограмма. Отсутствуют какие-либо конкретные полосы максимумов поглощения. рН водного раствора этого вещества составляет 7,25. Р Растворимость. Вещество растворимо в воде, нерастворимо в этаноле, ацетоне, н-гексане, н-бутаноле, феноле и других органических растворителях. Удельное вращение плоскости полясветаризации Га/Jtg +67,5±2,Cf (в воде;, (,452%) Гомогенность. Центрифугирование вещества KS-2-А осуществляют с линейным градиентом 5-20% хлористого цезия в буфера 0,1 М трис-соляная кислота |(рН 7,2) при скорости вращения 38000 об/мин и температуре 4 С в тегчение 15 ч. Предлагаемое вещество явйяется гомогенным. Сравнительные экс-перименты по седиментации с вирусными нуклеиновыми кислотами показ,ывают, что предлагаемое вещество не включает в себя вирусных частиц, РНК или ДНК. Электрофорез осуществляют на .ацетате целлюлозы с использованием буфера О,1 М уксусная кислота-пиридин (рН 3,5). Для сравнения используют хондроитин. По истечении 30 мин электрофореза при токе 0,6 мА/см и напряжении 160 В хондроитинсульфат двигается в направлении катода, проявляя подвижность, равную 4 см/30 мин, тогда как вещество KS-2-A двигается в направлении анода с небольшой скоростью в течение 90 мин (подвижность 1 см в 90 мин). Данное вещество являгется электрофоретически гомогенным. Кроме того, электрофорез, осуществленный в тех же самых условиях, что и указанные, за исключением того, что в данном случае в качестве буфера используют систему 1 М пиридин-уксусная кислота (рН 7,0), подтверждает, что данное вещество является гомогенным. Цветная реакция: Фенольно-сернокисПоложительнаялотная реакция Антроновая реакция Положительная Реакция Молиша Положительная Реакция Элсон-МорОтрицательнаягена Карбазол-сернокисПоложительнаялотная реакция Реакция с реагентом Фолина-Сьокарто Положительная Биуретовая реакция Положительная Реакция с ФИТЦ ( флуоррсцеинизотиоцианат)Положительная Окрашивание толуидиновым голубым О Отрицательная Нингидриновая реакцияПоложительнаяСахарный состав Вещество KS-2-A подвергают кислотному гидролизу с последующим альдитолированием и затем ацетилированием, после чего газохроматографичес ким путем определяют сахарный состав Это вещество состоит в основном из маниозы }i содержит небольшое количество глюкозы и галактиозы, а также незначительные количества арабинозы и ксилозы, причем весовое содер жание этих компонентов соответственно 74:12:12:1:1. Аминокислотный состав. 10 мг вещества KS-2-A помещают в вакуумную камеру совместно с добав ленными к нему 3 мл 6 и. соляной ки лоты, после чего его подвергают кис- лотному гидролизу при ПО с в тече|ние 22 ч. Затем в роторном испарите- ле удаляют соляную кислоту Ti с помощью автоматического аминокислотного анализатора ос тцествляют анализ на аминокислоты. К содержащимся аминокислотам в основном относятся треонин, серин, глутаминовая кислота, аланин и аммиак. Кроме того, в небольших количествах соДержатся аспарагиновая ки лота, пролин, глицин, валин и лизин В виде следов или в ничтожно малых количествах содержатся метионин, изо лейцин, лейцин, тирозин, фенилалаНИН, гистидин, аргинин и цистин. Вещество KS-2-A не оказывает непосредственного цитотоксического эффекта на клетки опухоли. При введении вещества KS-2-A в тело живого ор ганизма оно улучшает защитную функцию организма и косвенно ослабляет рост опухолевых клеток, что в дальнейщем приводит к ликвидации этих оаухолевых клеток. Кроме того, нещество KS-2-A не проявляет никакого бактерицидного или противовирусного действия. Однако в том случае, когда это вещество KS-2-A вводят в живой организм, оно улучшает защитную функ цию организма и, следовательно, косвенно ингибирует рост бактерий и вирусов в живом организме. Вещество KS-2-A способно эффективно излечиват людей и животных от многих инфекцион ных заболеваний, в частности от вирусного катара верхних дыхательных путей, гриппа, герпеса, коровьей оспы, энцефаломиокардита, инфекционных гепатитов, бешенства, а также заболеваний, вызванных микроорганизмами. Pseudomonas, Candida, Listoria, Staphylococcus. Streptococcus, Diplococcus, Neisseria, Escherichia coli , Micobacteriurn tuberculosis, Shirochaetales и Protosoa. Пример I. Микроорганизм Daedalea dickinsii KSDO 6 (FERM-P . N О.ЗЭЭ) культивируют в Юл среды, которая содержит барду, в аэробных условиях ( 1,8 об./об./tQiH при 24 С в течение 11 дней. Затем питательную среду подвергают центрифугированию, в результате чего получают 38 г мицелия. Полученньш таким образом мицелий смешивают с 10 л горячего : 5%-ного раствора хлористого натрия и кипятят в течение 60 мин с последующим отделением верхнего слоя и осадка. Затем выделенный таким образом верхний слой смешивают с этиловым спиртом в таком соотношении, что конечная концентрация этилового спирта составляет 70%., и оставляют стоять в течение ночи в холодной темной комнате. Выпавший осадок собирают и лирфнлизируют с получением 4 г веществ Это вещество KS обладает следующими физико-химическими свойствами. Элемента яшй анализ (с помощью С-Н-М-метра, %: С 18,б±2,3%; Н 2,8±0,А; N 1 ,3±0,2. Зольность - 10,,3%. Молекулярный вес (определяют с помощью колонки с биогелем ряда Р и Амикон-ультра-фильтрования) приблизительно 70000. Температура разложения 300 С или вьше. Растворимо в воде, нерастворимо в этаноле, н-бутаноле, ацетоне и гексане. Цветная реакция (с использованием 1%-ного водного раствора вещества KS): Антроновая реакция Положительная Реакция Морган-Элсона Отрицательная Карбазол-сернокислотная реакция Положительная рН водного раствора вещества KS находится в интервале от 6 до 7. Внешний вид: белый аморфный порошок. Аминокислот1а1Й состав (на 100 г), г: аргинин 0,410,05; лизин 0,,06; гистилин 0,4iO,05; фенилаланин 0,2 8 ±0,03; тирозин О,2±0,03;лейцин 0,3 JrO,04; изолейцин 0,3iO,04; метионин 0,1±0,01; валин 0,4±0,05; аланин 0,,08; глицин 0,,; пролин 0,6-0,8; глутаминовая кислота 1,2 i iO,2; серии 1±0,1; треонин О,8±0,I; асапарагиновая кислота liO,; триптофан 0,06±0,01; цистин- 0,3±0,04. Сахарный состав (определяют газохроматографическим путем), %: глюкоза 57i6; галактоза 5±0,5, манноза 26±3; ксилоза 8±0,8, арабиноза ,3 Пример 2. Вещество KS, полу ченное в ходе проведения процесса примера 1, растворяют в воде и в это раствор добавляют равный объем насыщенного водой фенола. Затем эту смес подвергают встряхиванию на колоду, после чего подвергают центрифугированию с получением водного слоя. В этот водный слой добавляют водонасыщенный фенол и затем встряхивание и разделение центрифугированием повторяют дважды. Полученные таким образо водные слои объединяют друг с другом с последующим добавлением этилового эфира. Полученную массу подвергшот встряхиванию, а затем собирают водный слой. Остаточный диэтиловый эфир из воды удаляют барбатированием через нее газообразного азота. В полуденный водньп слой добавляют четыре объема чистого этанола. После этого смесь оставляют стоять в течение ночи в холодной темной комнате. Полученный таким образом осадок растворя ют в буфере 0,01 М трис-соляная кислота ( рН 6,957, а приготовленный раствор заливают в колонку с целлюлозой Эктеола, которую предварительно активируют и обрабатывают буфером Затем элюирование продукта из колонки осуществляют тем же самым буфером. Фракции, которые характеризуют содержание KS-2-A, собирают и после диализа и лиофилиэации получают 0,7 вещества KS-2-A. Пример 3. Микроорганизм .entinus eolodes KSL Е 28 (FERM-P N 0.4196) подвергают культивированию путем встряхивания в среде, которая содержит барду, при 24 С в течение 14 дней, после чего конечную питательную среду вьшивают в 10 л среды, приготовленной разбавлением барды до удельного веса 1,012-1,020, с последутощим культивированием в ней при 24 С в аэробных условиях . 1, 8 об./ 98 /об/мин ) в течение 11 дней. Затем конечную питательную среду подвергают центрифугированию, в результате чего получают 38 г мицелия. Полученный таким образом мицелий смешивают с 10 л горячего 5%-ного раствора хлористого натрия и кипятят в течение 60 мин с последующим отделением верхнего слоя и выпавшего осадка. Полученный таким образом верхний слой смешивают с этиловым спиртом в таком соотношении, что конечная концентрация этилового спирта 70%, и оставляют стоять в течение ночи в холодной темной комнате. Таким образом, получают осадок. вещества KS. Полученное по изложенному вещество KS растворяют п воде и в приготовленный раствор добавляют равный объем водонасыщенного фенола. Конечную массу подвергают встряхиванию в холодных условиях, после чего подвергают центрифугированию с получением водного слоя. В этот водный слой добавляют насыщенного водой фенола и дважды повторяют операции встряхивания и разделения центрифугированием. Полученные таким путем водные слои объединяют друг с другом, а затем добавляют в них диэтилового эфира. Полученную конечную массу подвергают встряхиваник) и собирают водный слой. Остаточный диэтиловый эфир из водного слоя удаляют барботированием через него газообразного азота. В конечный водный слой добавляют четыре объема чистого этанола. Конечную fiaccy оставляют стоять в течение ночи В холодной темной комнате. Полученные таким образом осадок растворяют в буфере 0,01 М трис-соляная кислота (рН 6,95), а конечный раствор заливают в колонку с целлюлозой Эктеола, которую предварительно активируют и обрабатывают указанным буфером. Элюирование продукта из колонки осутцествляют этим же буфером. Фракции, которые характеризуются содержанием вещества KS-2-A, собирают, подвергают диализу и лиофиЛизируют. Таким образом получают 0,7 г вещества KS-2-A. Пример 3 (экспериментальный) . Асцитные опухолевые клетки саркомы 180 отбирают с помощью шприца и разбавляют в 10 раз физиологическим раствором поваренной соли. Затем приготовленную таким образом суспензию внутримышечно вводят в левое бедро мышам 40 DDI (6,) в количестве по 0,1 мл (10клеток на каждую 0,1 мл) на каждую особь. По истечении 24 ч вещество KS-2-A, полученное в ходе проведения эксперимента примера 3, растворяют в физиологическом растворе поваренной соли -и перорально вводят в виде 12 порций через каждые 24 ч в организм мьшей четырех групп, каждая из которых включает по 8 особей, причем каждой мыии каждый раз дают в зависимости от группы соответственно по 100, 10, 1 или 0,1 мг/кг. Лышам 89 910 контрольной группы дают перорально только физиологический раствор поваренной соли в тех же соответственно порциях и таким же точно путем. По истечении 7 недель после введения первых порций вещества KS-2-A умерщвляют индивидуальных мьшей и определяют вес удаленных опухолевых частей. Полученные при этом результаты сведены в табл. 1 . Таблица I
1,0; 0,3; 0,2; 0,15, 0,2 50 0,09 а у других четырех мышей имелись только следы опухолей
0,05; 0,4, у осталь- 0,05 25 0,02 ных 6 мышей имелись только следы опухолей
У всех 8 мьшей име- О 00 лись только следы опухолей
3,4; 2,6; 4,8; 6,8, 2,20 50 1,01 у остальных 4 мышей имелись следы опухолей
1,8; 3,0; 0,7; 3,4 2,17 100 100
1,8; 2,3; 2,0; 2,5
атель эффективности - средний вес опухолевых ей той группы, которым давали лекарственное ний вес Qnyxoлeвьrx частей у мышей контрольной
Аналогично приведенные результаты достигаются также в случае использования вещества KS.
Пример 4 (экспериментальный) . По истечении 24 ч после единовременного введения внутрибрюшинно
(
или.перорально мьшам по 200 мк/кг вещества KS-2-A каждой миши интрапериijl
тонеально вводят по 10 опухолевых асцитных клеток Эрлиха. После этого отмечают число дней, в течение которых выживают «зшш. В ходе проведения
1189709912
эксперимента используют весом по 20 г Полученные результаты снеде1аы в и в возрасте приблизительно 6 недель. табл. 2.
10 23, 27, 28, 29, 29, 30, свьше 100, 100, 100, 100
10 26,26, 27, 27, 28, 30,
30,свыше 100, 100, 100
10 22,23, 24, 25, 25, 25,
25,26, 26, 26 сАналогичные результаты достигаютс ;с использованием вещества KS. Пример 5 (экспериментальный нсцитные опухолевые клетки Эрлиха, взятые-у мыпш, несколько раз промыва ют средой RPM1-1640, не содержащей сыворотки, в течение 5 мин при скорости вращения 1800 об/мин, после че го концентрацию клеток доводят до 1 X 10 клеток/мл с использованием той же самой среды. Одновременно с этим вещество KS-2-A растворяют в то же самой среде с получением растворов концентрации 10, 2 мг/мл и 400 мкг/мл и 1 мл каждого из приготовленных таким образом растворов ве щества KS-2-А добавляют в 1 мл указанной суспензии клеток Эрлиха и затем подвергают культивированию в угЛекислотном инкубаторе в течение 2ч при 37с. В процессе такого культийирования пробирку несколько раз встряхивают. После этого каждую куль
Таблица 2
4/10
Свыше 56,6
Свыше 49,4 3/10 24,7 0/10 туру подвергают центрифугированию при скорости вращения 1800 об/мин в течение 5 мин с последующей промывкой средой RPM1-1640. Полученные таким образом таблетки клеточной массы суспендируют в 2 мл указанной среды. По 0,2 мл каждой иэ приготовленных таким образом суспензий интраперитонеально вводят мышам DDI в возрасте 6 недель по 5 особей в каждой группе. При этом отмечают число дней, в течение которых выживают животные. Полученные результаты сведены в табл. 3. Число дней выживания животных в индивидуальных группах оказывается практически идентичным числу дней, в течение которых выживают ясивотные контрольной группы; это указывает на то, что вещество KS-2-A не оказывает никакого непосредственного цитотоксического действия на раковые клетки. Таблица 3
13 5
25, 25, 25, 30, 30 27,0 5
24, 25, 26, 28, 32 27,0 Пример 6.(экспериментальный). Мышам DDt (с весом тела 20 г и в В93расте 6 недепь) интраперитонеально вводят по 200 мг/кг вещества KS-2-A и по-истечении 24 г средней RPM1-1640, не содержащей сыворотки, вымывают перитонеальные эксудативные клетки. Затем вымытые эксудативные Клетки подвергают культивированию в углекислотном инкубаторе в течение 2ч, После этого не обладавшие адгезионной способностью клетки направляют в отход, а обладавшие адгезионной способностью клетки дважды или трижды промывают средой RPM1-1640, подогретой до 37®С. Эти клетки, которые прочно прилипают к чашке Петри, собирают с использованием трипсина и :ЭДТК, в результате чего получают мак10
26, 40, 43, 45,46,
свыше 100, 100,100, iOO, 100
10
24, 26, 27, 28,29
30, 3.1, 32, 34,35
10 26, 26, 27, 28, 28 28,2
Только среда М1-г1640 28, 29, 29, 30, 31
U
897099 Продолжение табл. 3
0/5
0/5
Свьш1е 70,0
О/О
29,6
.0/10 (рофаг, вьщеленньп из организма мышей, вылеченных веществом KS-2-A. Одновременно с этим других мышей DDI в возрасте 6 недель заражают асцитны- ми опухолевыми клетка ш Эрлиха путем интраперитонеального введения в организм каждой особи по Ю клеток, Интраперитонеально в организм этих мьш1ей вводят упомянутый макрофаг за 24 ч до их заражения опухолевыми клетками, а затем им вводят в общей сложности 10 раз через интервалы в 3 дня; кaждьrii раз от 5 х Юдо 1 х 10 клеток. При этом отмечают число дней, в течение которых животным удалось выжить. Полученные результаты сведены в табл. 4. Таблица 4
Пример 7 ( экспериментальный Трансформированный акклиматизированный клеточный материал FM-3A, приготовленный с концентрацией 1 х 10 клеток/мл с использованием среды MEM Игла, в которую добавляют 10% плодной сыворотки теленка (ПСТ), загружают в 3 различных склянки для культивирования а, в. и с, В склянке а культивирование проводят без какого-либо добавления в нее макрофага. Процесс культивирования в .склянке -6 проводят в присутствии 1x10 клеток/мл неактивированного макрофага, полученного в процессе экспериментального примера 6. Процесс культивирования в склянке с проводят в присутствии 1 X 10 клеток/мл макрофага, полученного от мьпии, которую лечат веществом KS-2-A, в соответствии с изложенным в экспериментальном примере 6. Процесс культивирования проводят при 37 С в атмосфере 5% углекислого газа в течение 72 ч. По истечении 24, А8 и 72 ч с помощью камеры для подсчета кровяных телец определяют число клеток FM-3A. Макрофаг, активированный веществом KS-2-A, оказывает ингибирующее действие на рост раковых клеток.
Пример 8 (экспериментальный). 40 мышам 00I среднего веса 22 г интраперитонеально вводят по 200 мг/кг вещества KS-2-A (группа 1) В организм других 40 ГЫшей DDI через рот вводят по 500 мг/кг вещества KS-2-A (группа 2).
По истечении 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 и 32 ч из каждой группы мышей отбирают по 5 особей и умерщвляют с последующим взятием крови. Полученную таким образом кровь подвергают центрифугированию со скоростью вращения 3000 об/мин в течение 10 мин с получением сыворотки. Титр интерДерена измеряют в клетке мьгаш штамма L-1D без тимидинкиназы и везикулярного стоматичного вируса (ВСВ) . Титр интерферона получают посредством определенного эффекта цитофатитной вирусной защиты (ЦВЗ), который достигается посредством разбавленной сыворотки крови. Указанный THTJ) интерферона откалиброван относительно международной интерфероновой единицы.
Пример 9 (экспериментальный) .
В организм мьппей DDI четырех груп (среднего веса 20 г и в возрасте примерно 6 недель) интраперитонеально вводят по 200, 100, 50 и 25 мг/кг вещества KS-2-A. По истечении 24 ч после введения этого вещества у мышей каждой группы берут кровь для определения титра циркулирующего интерферона .
Полученные результаты приведены ниже.
Интраперитонеальное Титр интерферовведение вещества на/мл KS-2-A в дозировке, мг/кг
200800
100800
50800
2580
Эти образцы интерферона проявляют такие общие свойства интерферона, ка чувствительность к трипсину, специфичность видов паразитов в отноше1ти хозяина.
Пример 10 (экспериментальный). Микроорганизм Ltsteria monocytogenesis, выделенный из организма пациента, который был заражен листериозом, суспендируют в дистиллированQ
НОЙ воде с концентрацией 10 вирусов/мл, после чего эту суспензию используют для зарансения инъекций в хвостовую вену мышей из расчета по 0,1 мл/особь. За 24 ч до заражения листериозом в организм мышей интраперитонеально вводят по 0,5 мл раствора вещества KS-2-A. В различных группах мьшей дозировка вещества KS-2-A составляет при этом от 5 до 425 мг/кг на Кс1ждую индивидуальную особь. В организм мышей контрольной группы интраперитонеально вводят по 0,5 мл физиологического раствора соли. После этого отмечают количество мышей, которые выживают в течение 20 дней после их заражения, а затем определяют выживаемость в процентах. Полученные таким образом результаты сведены в табл, 5.
425
141
47
16
5
О
(контрольный эксперимент)
Пример lit эксперименгальныйК В ходе проведения данного эксперимента осуществляют то же самое лечение, что и описанное в экспери 4eнтaльнoм примере 10, за исключением того, что в этом случае вещество KS-2-A вводят в организм 11ьш1ей через
425
47
16
5
О
(контрольный эксперимент)
Таблица 5
7 7 8 7 8 5
100 100 100
87,5 100
26,3
PQT..B. дозировке от 5 до 425 мг/кг. При этом отмечают число особей, которые выжили в течение 20 дней после их заражения, и рассчитывают выживаемость животных в процентах.
Полученные таким образом результаты сведены в табл. 6
Таблица 6
100 87,5 87,5
100 87,5 26,3. 198 Пример 12 :( экспериментальный ). Микроорганизм Pseudononas aeru ginosa, выделенный из мочи больного лейкемией, подвергают культивированию при 37 с в течение 24 ч, после чего клеточную массу суспевдируют в дистиллированной воде в концентрации 10 вирусов/мл с последующим заралгением путем инъекции в хвостовую вену 26 мьшей DD (самки весом по 20 г в возрасте 6 недель) в дозировке по 0,1 мл/особь. За 24 ч до инъекционного заражения в организм мышей той группы, которая предназначена для ле2; 2; 3; 3; свьине 14, Свыше 10
14 свьппе 14; 14; 14; 14; 10,7 свьше 14; 14; 14; 14;
12
1; 1; ij 1; 2; 2; 3; 2,3 3; 4;
(контрольный эксперимент) Пример 13 (экспериментальный). Непосредственное антибактериал ное действие вещества KS-2-A исследу ют дисковым пульпо-дисЬФузионным мето дом с использованием различных бакте рий и водного раствора вещества KS-2-А концентрацией 1000 мкг/мл. Ка ВИДНО из даннь1Х таблицы, вещество KS-2-A не проявляет непосредственной антибактериальной активности. Ниже приведены значения минимальной ингибирующей концентрации ( МИК ) использованных микроорганизмов. Pseudomonas aerugiпоза, мкг/млСвьше 1000 Klebsilla pneumoniae, мкг/млТо же Listeria monocytogenes, мкг/мл - Eschari chia col I, мкг/мл- Staphylococcus aureus 209-P, мкг/мл Свыше 1000 Candida albicans, / мкг/мл
71
О 9 чения, интраперитонеально вводят по 0,5 мл водного раствора, содержащего 150 мг/Kif вещества KS-2-A, тогда как в организм животных контрольной группы вводят только по 0,5 мг физиологи-веского раствор.а поваренной соли инграперитонеально). Отмечают число животных, которые выжили в течение 20 дней после их заражения, и затем определяют степень выживаемости iB процентах. Полученные результаты сведень в табл. 7, (Таблица 7 Cand i da tropi calis, мкг/мл Candida pseudotropi calis, мкг/мл Candida ut i П s, мкг/мл Sacch aomyces cerevislal Br-60, мкг/мл Hansenula anomalia, МКГ/Ш1 Proteus OX-19, мкг/мл Baci1lus subt i1i s, мкг/мл- ShIgella sonneI , мкг/мл- Sarcina lutea, мкг/мл - Пример 14 (эксперименталь). В ходе проведения эксперимента ей DDI весом 14-16 г заражают ввеием в их организм intranadelly усов гриппа и лечат внутривенным пероральным введением вещества 2-A в дозировке 200 мг/кг. В ходе ведения контрольного эксперименв организм контрольных животных
интрапегритонеально вводят по 50 мг/кг виразола или 0,5 мл физиологического раствора поваренной соли. Далее определяют число дней, прожитых животными и степень их выживаемости в процентах. Как вещество KS-2-A, так и виразол вводят в организм в виде соответствующих растворов в физиологическом растворе поваренной соли в общей 15 раз, а именно за
Интраперитонеально
Пример 15( экспериментальный). В ходе проведения данного эксперимента исследуют токсичность вещества К Е-2-А.
Формула изобретения
Способ получения вещества, обладающег. противоопухолевым и антимикробным действием, отличающий1 ч до заражения мьшей вирусом, одновременно с их заражением вирусом по истечении 1,3 и 6 ч после их заражения и затем дважды в день в течение последующих 4 дней. В качестве вируса гриппа используют адаптированный к мьшам вирус гриппа штамма А/КумаMOTO/ys-XHgj / в 10 дозах .
Полученные при этом результаты представлены в табл. 8,
Таблица 8
52
Свыше 2Q
Полученные таким образом результаты сведены в табл. 9.
Предложенный способ позволяет получить вещество, обладающее противоопухолевым и антимикробным действием.
Т а б л и ц а 9
с я тем, что штамм Daedalea dickinsii KSDD 6 (FEW1-P N 3993), Lentinus edodos KSLE 7 (FERM-P N ЗЭЭ) или Lentinus edodes KSLE 28 (FERM-P
2389709924
N tlS) культивируют в питательнойют целевой продукт из биомассы рорясреде, содержащей источники углерода,чей водой или 5%-иым водиым растворе
азота и минеральные соли, в аэроб-хлористого натрия при 80-100 С при
ных условиях при и экстрагиру-перемешивании.
