Способ получения тетрадекапептида Советский патент 1982 года по МПК C07K14/565 C07K1/04 A61K38/10 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕТРАДЕКАПЕПТИДА

1

Изобретение относится к получению ново го тетрадекапептида, биологически активного соединения, которое может найти применение в биологии и медицине.

Известеи способ получения пептидов пу-5

тем одновременного отщепления защитных групп и полимерной смолы от пептидной смолы обработкой соответствующей пептидной смолы фтористоводородной кислотой в присутствии анизола или метил меркаптана 1.ю

Цель изобретения - получение нового тетрадекапептида.

Поставленная . цель достигается тем, что согласно способу получения тетрадекапептида

формулыIJJ

H-D-VaI-Glv-Cys-Lys--Asp-Phe-Phe-Trp-Lys-Thr-Phe-Thr-Ser-Cys-OH(I)

соединение формулы

R-D-V:al-Gly-Cys(R,)-Lys(R2)-Asp-Phe-Phe-Trp(R«)-Lys(Rj)-Thr(Rs)-Phe-(ll) -Thr(R3)-Ser(R4)-Cys(Rt)X, где R - водород или 777ег-бутило15сикарбо}шл;25

RI - водород или меток сибензил; R2 - водород, или о-хлорбензилоксикарбонил;

Rs.Ra - каждый, водород или бензил; X - ОСНг-фенил-смола обрабатывают фтористоводородной кислотой в присутствии анизола или метилмеркаптана.

Пример 1. N-rper-Бутилоксикарбонил-Ь-цистеинил(5-п-метоксибензил)-метилированная полистирольная смола.

К 500 мл N1 N-диметилформамида, содержащего цезиевую соль N -трег-бутилоксикарбонил- (З-и-метоксибензил)-цистеина, полученную из 9,06 г (26,5 моль) свободной кислоты, добавляют 51,0 г хлорметилированной полистирольной смолы (0,75 ммоль/г).. Смесь перемещивают при комнатной температуре 6 дн. Смолу отфильтровьюают, последовательно промывают 3 раза смесью 90% диметилформамида и 10% воды, 3 раза 95%-ным этанолом и 3 оаза даметилформамидом. К смоле, суспендированной в 500 мл диметилформамида, добавляют раствор 10,5 г ацетата цезия. Смесь перемешивают 6 щ при комнатной температуре. Смолу отфильтровывают, промьтают последователь 39 но 1 раз водным диметилформамидом 3 раза смесью 90% диметилформамида и 10% воды, 3 раза.95%-ным этанолом 3 раза хлористым метиленом, 3 раза 95%-ным этанолом и 3 раза хлороформом. Малую часть смолы удаляют 4-кратным суспендированием в хлороформе, декантируя каждый раз жидкость. Затем смолу высушивают в вакууме при 40° С в течение нота, получают 44,8 г тетрадекапептида. Анализ показывает содержание 0,25 ммоль цистеина на 1 г смолы. Цистеин определяют в виде цистеиновой кислоты, полученной при кислотном гидролизе смесью диоксана и концентрированной хлористоводородной кислоты 1:1, к которой добавляют небольшое количество диметилсульфоксида. П р и м е р 2. М-грег-Бугилоксикарбонил -0-валил-глицил-Ь(8-п-метоксибензил)-цистеигош-b(N -о-хлорбензилокси-карбонил)-лкзил -L-аспарагинил- L-фенилалаиил- L-фенилаланил-L- (формил) триптофил- L- {N -о- хлорбензилокси карбонил) -лизил- Ь (о-бензил) -трео1шл- L-фeш лаланил-1- (о-бензил)-трео:гал-С- (о-бензил)-серил -L- (S-«- метоксибензил) -цистеинил-метилированная полистирольная смола. Продукт, полученный в примере 1 (7,0 г) загружают в реакщюнный сосуд прибора Бекмана 990 для автоматического синтеза пептидов и двенадцать из остальных тринадцати аминокислот добавляют в этот автоматический прибор. Полученную защище}шую тридекапептидную смолу разделяют на дзе равны порции и концевой остаток вводят в одну из этих порций. Применявшиеся аминокислоты, а также последовательность их применения, следующие N- трет- Бутилоксикарбонил- (о- бензил) -L-серин;Ы-трег-бутилоксикарбонил- (о-бензил)-L-треонин;N- трет- бутилоксикарбонил- L-фенилаланин; N-7 peг-бyтилoкcикapбoнил- (о-бензнл)-L-треонин;N- трет- бутилоксикарбонил- N -о-хлорбензил оксикарбонлл-L-лизин; N -rper-бутилоксикарбонил- (N-формил)-L-триптофан;М-грег-бутилоксикарбонил-L-фенилаланин; М-трег- бутилоксикарбонил-L-аспарагин и-нитрофениловый эфир; N-Jper-бутилоксикарбонил-N -о-хлорбензил- ok сикарбонил- L-лизин; N-77 er-бутилоксикарбонил- ( и-метоксибензил)-1-цистеин; 1 1-7рег- бутилоксикарбонил-глицин; М-грег-бутилоксикарбонил-О-валин. Последовательность отщепления защитных групп, нейтрализации, сочетания и нового сочетания для введения каждой аминокислоты в пептид следующая1.Три промывки хлороформом (10 мл/г смолы), по 3 мин каждая; 2.Удаление бутилоксикарбоновой группы двукратной обработкой, каждая 20 мин, смесью 29% трифторуксусной кислоты, 48% хлороформа, 6% тризтилсилана и 17% хлористого метила (10 мл/г смолы); 3.Три промывки, но 3 мин каждая, хлороформом (10 мл/г смолы); 4.Одна промьшка 3 мин хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 5.Три промывки, по 3 мин каждая, смесью 90% 7р г-бутилового спирта и 10% трег-амилового спирта (10 мл/г смолы); 7.Нейтрализация тремя обработками, по 3 мин каждая, 3%-ным триэтиламином в хлористом метилене; 8.Три промывки, по 3 мин каждая, хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 9.Три промьшки, по 3 мин каждая, смесью 90% трег-бутилового спирта и 10% грег-амилового спирта (10 мл/г смолы); 10.Три промьтки, по 3 мин каждая, хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 11.Добавление 1,0 Ммоль/г смолы, защищегагой аминокислоты и 1,0 ммоль/г смолы NI N-дициклoгeкcилкapбoмидal в 10 мл/г смолы хлористого метилена с последующим перемешиванием в течение 120 мин; 12.Трехкратная промывка 3 мин каждая, хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 13.Три промывки, по 3 мин каждая, смесью 90% бутилового спирта и 10% трет-амилового спирта (10 мл/г смолы); 14.Три промывки, по 3 мин каждая., хлористым метиленом (10 кш/г смолы); 15.Нейтрализация тремя обработками, по 3 мин каждая, 3%-ным триэтиламином в хлористом метилене (10 мл/г смолы); 16.Три промывки, по 3 мин каждая, хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 17.Три промьтки, по 3 мин каждая, смесью 90% трег-бутилового спирта и 10% грег-амилового спирта (10 мл/г смолы); 18.Три промьшки, по 3 мин каждая, хлористым метиленом (10 мл/г смолы); 19.Три промывки, по 3 мин каждая, диметилформамидом; 20.Добавление 1,0 ммоль/г смолы, защищенной аминокислоты и 1,0 ммоль смолы . NiN-дициклогексилкарбодиимида в 10 мл/г смолы смеси диметилформамида и хлористого метилена 1:1 с последуюищм перемешиванием в течение 120 мин; 21. Три промьшки, по 3 мин каждая, дим.етилформамидом (10 мл/г смолы); 22. Три промывки, по 3 мин каждая, хлористым метиленом (10 мл/г смолы);