Способ получения пептидов Советский патент 1980 года по МПК C07K7/06 C07K1/107 A61K38/08 

1

Изобретение относится к способу получения пептидов или их солей соединений, обладающих биологиче &кой активностью, которые могут найти применение в медицине.

В пептидной химии широко используют метод получения пептидов путем деСлокирования соответствующих защищенных пептидов в безводной кислой среде l .

Цель предлагаемого изобретения - получение новых пептидов, обладающих фармакологическими свойствами, с использованием известных методов пептидной химии.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения пепти 0дов общей формулы I

где R R R - водород)

R С;, -C4 - алкил;

R- R - независимо водород или метил,

-wr -cHjSCH3, -scHjCHj, -сн(снз)г,

-с -т

21 II о

ИЛИ их солей, заключающийся в том, OQ что в соединении формулы I I

о Е о R I и

CH-C-K-CH- -HH-CH-C-:lr-CR- -i-.H,

««t R k ia, .Ц где l - N ,«i-п)гт-бутилоксикарб нил; R -R , Z и W имеют указанные выше значения, отщепляют защитные группы в безводной кислой среде. Процесс предпочтительно проводят в трифторуксусной или ледяной уксус ной кислоте с газообразным хлористы водородом или в 98%-ной муравьиной кислоте. Пример 1. Приготовление хл гидрата 1-тирозил-0-аланилглицил-1 -фенилаланил- hP- L-метиониламида. А. Бензил-О-алинат-п-толуолсульф нат. К смеси 100 мл бензилового спи та и 200 мл бензола, содержащего 55,1 г (0,29 моль) моногидрата п-то луолсульфокислоты добавляют 25 г (0,281 моль) D-аланина. Смесь довод до кипения с обратным холодильником и воду удаляют с помощью прибора Ди на-Старка, Смесь нагревают 15 ч/ затем охлаждают до комнатной температуры и разбавляют эфиром.Обр зовавшийся осадок собирают и перекристаллизовывают из смеси метанола и эфира. Получают 55,3 г (56%) цел вого соединения, т.пл. 112-115°С. Найдено,%: С 58,19; Н 6,06; N 3,82. C47H5,N05S (351,42), Зачислено,%: С 58, 6,02; N 3,99. . Б. Бензил N трет-бутилоксикарб нил-0-бензил-1-тирозил-0-алинат. К 200 мл безводного N,N-димeтилформамида добавляют 35,1 г (0,1 мол продукта части.А, Полученную смесь охлаждают при перемешивании до 0°С и добавляют 11,2 г (0,1 моль) диаза бициклооктана. Перемешивание продол жают еще в течение 10 мин при . И добавляют 37,1 г (0,1 моль) N -трвт-бутилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозина, затем 13,5 г (0,1 моль) 1-оксибензотриазола и 20,6 г (0,1 моль) N,М-дициклогексилкарбодимида. Полученную смесь перемешивают 3 ч при , затем при комнатной температуре 24 ч. Вновь охлаждают до и суспензию фильтруют, фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и тщательно промывеиот раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 N

О

О JC

n

w холодной лимонной кислотой и вновь водой. Органический слой отделяют, высушивают над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в горячем этаноле. При охлаждении из раствора выпадают кристаллы, после перекристаллизации которых из этанола получают 41,5 г (80%) чистого целевого соединения-; т.пл. 121-123с, Найдено,%: С 68,99; Н 6,75; N 5,17. Сз« 5бМ2°б (520,63) Вычислено,%: С 69,21) Н6,97; N. 5,38. В. (р Бутилоксикарбонил-О-бензил-1-тирозил-0-аланин. К смеси 200 мл тетрагидрофурана и 20 мл воды добавляют 31,2 г (0,06 моль) продукта части Б.Раствор охлаждают до 0°С и к нему медленно добавляют 13,2 мл (1,1 зквив.) 5N раствора гидроокиси натрия. При перемешивании смесь медленно нагревают до комнатной температуры. Через 5ч смесь распределяют между водой и эфиром. Водный слой отделяют, охлаждают и устанавливаиот рН 2 при добавлении лимонной кислоты. Затем продукт экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой, сушат над сульфатом магния, фильтруют и разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок отфильтровывают, получают 17,7 г (67%) целевого соединения;т.пл. 1601620с. Найдено,%: С 64,73; Н 6,70; N . «МзоНгОб (442,51). Вычислено,%: С 65,14; Н 6,83; N 6,63. Г. Бензил N -mpem-бутилоксикарбонил-0-бензил-1-тирозил-0-аланилглицинат. Смесь из 70 мл безводного диметилформамида, 6,74 г (0,02 моль) соли бензилглицината и п-толуолсульфокислоты охлаждают до 0°С и добавляют г (0,020 моль) диазабициклооктана. Смесь перемешивают несколько минут и добавляют к ней 8,84 г (0,-020 моль) продукта части В, а затем 2,7 г (0,020 моль) 1-оксибензотриазола и 4,12 (0,020 моль) дициклогексиЛкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивают 2 ч при ОС, а затем 24 ч при комнатной температуре. Суспензию охлаждают до , Фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате. Промывают последовательно IN раствором бикарбоната натркя, водой, холодной 0,75N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток кристаллизуют из этанола, получают Ю ,8 г (92%) чистого целевого соединения; т.пл. 145-147С.

Найдено,%: С 67,32; Н 6,83; N 6,91.

(589,69).

Вычислено, %: С 67,22; Н 6,67;

.

Д. N -трет-Бутилоксикарбонил-L-тирозил-О-аланилглицин.

К 60 мл диметилформамида добавляют 10,5 г (0,018 моль) продукта, полученного как описано в части Г, затем 2,5 г 5%-ного палладия на угле в виде суспензии в диметилформамиде. Полученную смесь продувают азотом, водород вводят по трубке при атмосферном давлении и комнатной температуре. Через 3,5 ч подачу водорода прекратдают и фильтрованием удаляют катализатор. Фильтрат концентрируют в вакууме. При обработке остатка эфиром получают 5,4 г (75%) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества.

Найдено,%: С 70,08, Н 5,82; N 6,16.

C2,HjgN,05 (446,65).

Вычислено,: С 69,94; Н 5,87; N 6,27.

Е. N -трет-Бутилоксикарбонил-М -метил-1-метиониламид.

Дициклогексиламиновую соль N -тре1У(-бутилоксикарбонил-1-метионина (17,2 г, 0,04 моль) распределяют между этилацетатом и холодной 0,75 N лимонной кислотой. Органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над сульфатом магния, фильтрую и концентрируют в вакууме до маслообразного остатка. Остаток растворяют в смеси 80 мл безводного тетрагидрофурана и 10 мл диметилформамида и добавляют 0,5 г 18-кроун-6-эфира. Суспензию гидрида калия (эквивалент 0,12 моль) при перемешивании добавляют по каплям к полученной холодной смеси в течение 30 мин. Затем вводят йодистый метил (2,49 мл 0,04 моль) и смесь перемешивают 24 ч при комнатной температуре. Охлажденную реакционную смесь подкисляют 0,75 N лимонной кислотой до рП 3 и распределяют между водой и эфиром. Эфирный слой промывают несколько раз водой и экстрагируют 1 N раствором бикарбоната натрия. Водные экстракты объединяют, подкисляют до рН 2 и экстрагируют этилацетатом. Экстрак пушат над сульфатом магния,фильтруют

и упаривают в вакууме. Получгиот 8,4 г продукта, имеющего спектр ЯМР,соответствующий желаемому N-метилированному продукту: d 2,92, N-CHj; tf-2,11, S-CHji tf -1,6, C(CH,)5 .

Масло (8,4 г примерно 0,034 моль) растворяют в 60 мл диметилформамида. Раствор охлаждают до и добавляют 4,69 г (0,035 моль) оксибензотиаэола и 7,0 г (0,034 моль) дициклогексилкарбодимида. Смесь перемешивают 2 ч при 0°С и барботируют через нее безводный аммиак в течение 45 мин.Затем реакционную смесь фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток вводят в колонку с силикагелем (0,076-0,252 мм) размерами 3 х 50 см Для элюирования используют хлороформ смесь (9,75:0,25) хлороформа и метанола. Фракции, полученные при хроматографировании объединяют на основе результатов анализа хроматографией в тонком слое и концентрируют в вакууме, получают после двойной перекристаллизации (из смеси эфира и петролейного эфира) целевой продук (4,1 г); т.пл. 75-78°С.

ЯМР: tf 2; 80, tf 2, 10, СУ 1,48, C(CHj)j-,l5 -29,5° (С 0,5, хлороформ).

Найдено,%: С 50,59; Н 8,24; N 10,87,

(262,37).

Вычислено,%: С 50,36; Н 8,45; N 10,68.

Ж. М -трегп-Бутилоксикарбонил-Ь-фенйлаланил-М -метил-1-метиониламид

Через смесь из 20 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл анизола, 2 мл триэтилсилана и 3,6 г (0,0144 моль) продукта, полученного в условиях,описанных в части Е, барботируют безводный хлористый водород в течение 30 мин. Затем смесь разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок отфильтровывают, сушат (2,9 г) и вновь растворяют в 40 мл диметилформамида. Раствор охлаждают до и добавляют к нему 2,9 мл (0,0146 моль) дициклогексиламина, а затем 1,97 г (0,0146 моль) оксибензотиазола, 3,87 г (0,0146 моль) N -mpem-бутилоксикарбонил-1-фенилаланина и 3,0 г (0,0146 моль) дициклогексилакарббдиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при 0°С, а затем 24 i при комнатной температуре. Вновь охлаждают до , фильтруют, фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 N лимонной кислотой и водой. ЭтИлацетаный раствор сушат над сульфатом магния, упаривают в вакууме, получают масло, которое не кристаллизуется из петролейного эфира. Остаток вводят в колонку (3x50 см), заполненную силикагелем и продукт элюируют хлороформом, смесью хлороформа и метанола (9,8 : 0,2), Из фракций, объединенных в соответствии с результатом анализа методом хроматографии в тонком слое, после упаривания получают остаток, который после перекристаллизации из смеси эфира и петролейного эфира дает 3,1 г (52,5%) целевого соединения, т.пл. ЭЭ-ЮЗ С.

Найдено, %: С 59,14; Н 7,47; N. 10,45,

(409,55).

Вычислено,: с 58,65 Н 7,63; N 10,26,

3, N -mpem-Бyтилoкcикapбoнил-L-тиpoзил-D-aпaнилглицил-L-фёнилaлaнил-N -мeтил-L-мeтиoнилaмид.

К смеси 20 мл ледяной уксусной кислоты, 3 мл анизола и 3 мл триэтилсилана добавляют 2,2 г

(5,37 моль) продукта, полученного в условиях,описанных в части Ж, Через смесь пропускают в течение 30 мин безводный хлористый водород. Затем добавляют эфир, выпавший осадок отфильтровывают и сушат в вакуу Твердое вещество (1,75 г,5 моль) растворяют в 30 мл безводного диметилформамида и смесь охлаждают до , Хлористоводородную соль нейтра лизуют при добавлении 0,99 мл (5 . моль) дициклогексиламина.Через 5 мин вводят 2,05 г (5 мрль) продукта, полученного в условиях,описанных в части Д, а затем 0,68 г (5 моль), оксибензотиазола и 1,03 г (5 моль) дициклогексилкарбодиимида Смесь перемешивают 24 ч при С. Полученный нерастворимый продукт отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают последовательно IN, водным раствор бикарбоната натрия, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой, Раствор сушат над сульфатом магния, вносят в колонку (3x50 см) с силикагелем и продукт элюируют хлороформом, а затем смесью хлороформа и метанола (9:1), Фракции объединяют, анализируют методом хроматографии в тонком слое, упаривают, получают две порции сырого продукта весом 0,80 и 1,2 г. Первую порцию дополнительно чистят хроматографией в тонком слое силикагеля (хлороформметанол 9:1) и получают 0,62 г целевого соединения в виде аморфного твердого вещества.

Найдено,%: С 58, 48; Н 6 ,64 , N 11,97,

С«Н..МбОе5 (700,86).

Вычислено,%: С 58,27; Н 6,90; N 11,99,

Анализ аминокислоты: Найдено Туг 0,99i Деа 1,00; сгу 1,00; Phe 1,00,

Вторую порцию продукта дважды хроматографируют тем же методом и получают 0,74 г целевого продукта, имевшего приведенный элементарный анализ и анализ аминокислоты.

И, Хлоргидрат 1-тирозил-0-аланилглицил- L -фенил ал aнил-N -мeтил- L -метиониламида,

К 5 мл ледяной уксусной кислоты, содержавшей 0,2 мл анизола, добавляют 0,72 г (1,03 моль) целевого соединения части 3. Через смесь в течение 20 мин пропускают безводный хлористый водород, смесь сушат лиофилизацией, получают 0,74 г целевого соединения; Rj 0,3.

Аналитический образец продукта . сушат в вакууме при температуре 100

Найдено,%: С 54,36; Н 6,19; N 13,00.

,М Об5СВ (637,20).

Вычислено,%: С 54,5б;н 6,49; N 13,19.

Анализ аминокислоты: Найдено Туг 1,01; АЙа 0,99; Сеу 1,00; Phe 1,00.

Пример 2. Приготовление моноацетата полуторного хлоргидрата 1-тирозил-0-лейцилглицил-1-фенилал анил-М -метил-Ь -метионил амид а.

А. Бензил-О-лейцинат-п-толилсульфон ат.

Соединение получают в условиях, описанных в части А примера 1,для приготовления производного 0-алината Выход 73%; Т..ПЛ. 155-156 С.

Найдено,%: С 61,17 ; Н 6,68; N 3,81.

Ca/liiNs-S (393,50).

Вычислено,%: С 61,05; Н 6,92; iN 3,56.

Б. Бензил-М гпрет-бутилоксикарбонил-0-бензил-1-тирозил-0-лейцинат.

К 50 мл диметилформами.ца добавляют 7,86 г (0,020 моль) продукта, полученного в условиях, описанных Н части А. Смесь охлаждают до 0°С и добавляют 2,24 г (0,020 мол DA8CO. Смесь перемешивают 5 минут и добавляют 7, 42 г (0,020 моль)М -трет-бутилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозина, а затем 2,7 г (0,020 моль оксибензотиазола и 4,12 г (0,02 моль дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают 2 ч при 0°с и 24 ч при комнатной температуре. Затем смесь вновь охлаждают до 0°С,полученную суспензию фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Полученный Остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают последовательно 1 N раствором бикарбоната натрия,водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток кристаллизуют из горячего этнола и получают 9,0 г (78%) целевого соединения; т.пл. 100-103°С.

Найдено,%: С 71,30; Н 7,15, N 4,79.

CgiH NjO (574,72)

Вычислено,%: С н 7,37; N 4,87.

В. N -1Ярет-Бутилоксикарбонил-0-бензил-L-тироз ил-0-лейцин.

К 80 мл тетрагидрофурана добавляют 8,0 г (0,0139 моль) продукта, полученного в условиях, описанных в части Б. После добавления 20 мл воды полученную смесь охлаждают до 0°С и медленно добавляют к ней 7,25 МП (0,0145 моль) 2 N водного раствора гидроокиси натрия. Смесь перемешивают 30 мин при 0°С и 24 ч при комнатной температуре, затем распределяют между водой и эфиром. Водную фазу отделяют, охладают до 0°С, подкисляют 1 N соляно кислотой до рН 2. Продукт экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получают сиропообразный остаток. Этот остаток кристаллизую из смеси эфира и петролейного эфир и получают 6,4 г (95%) целевого соединения; т.пл. 90-94 0.

Найдено, %: С 67,14; Н 7,38, N 5,76.

(484.59),

Вычислено, %: С 66,92;

Н 7,49; 5,78.

N

Г. Бензил-М -тре ьБутилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозил-0-лейцилглицинат.

К смеси 3,37 г (0,010 моль) соли бензиглициНата и п-толуолсульфокислоты и 1,12 г (0,010 моль) АВСО в 25 мл безводного димётилформамида добавляют 4,84 г (0,010 моль) соединения, полученного в условиях, описанных в части В. Смесь охлаждают до 0°С и добавляют к ней 1,35 г (0,010 моль) оксибензотиазола и 2,06 г (0,010 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при Ос и 24 ч при комнатной температуре. После охлаждения до 0°С смесь фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 N водным раствором бикарбоната нария, водой,холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. После сушки над сульфатом магния раствор фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток кристаллизуют из водного этанола, получают 4,0 г (63%) целевого соединения; т.пл. 114-116°С..

Найдено,%: С 68,17; Н 7,12; N -6,40.

(631,77).

вычислено,%: С 68,44; Н 7,18; М f;,65.

д. М-яу вв -Бутилоксикарвонил-1-тирозил-0-лейцилглицин.

К 5 мл безводного димётилформамида добавляют 3,9 г (0,006 моль); соединения, полученного в условиях, описанных в части Г, и 1,5 г 5%-ного палладия на угле. После добавления 40 мл этанола смесь продувают азотом и в течение 5 ч вводят в нее водород при атмосферном давлении и комнатной температуре. Катгшизатор отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют из смеси эфира и этилацетата, получают 2,3 г (85%) целевого соедине:Ния; т.пл. 189-190 с.

5 ;Найдено,%:С 58,79; Н 7,48; N 9,39.

C. (451,52),

Вычислено,%: С 58,52Н 7,37 N 9,31.

0

Е. N -mpem-Бутилоксикарбояил-L-тирозил-0-лейцилглицил-1-фенилаланил-М -метил-1-метиониламид. К 10 мл безводного димётилформамида добавляют 0,692 г (0,002 моль)

5 солянокислой соли L-фенилаланил-N -метилметиониламида (приготовленной , как описано в части 3 примера 1) и 0,903 г (0,002 моль) продукта, приготовление которого описано в

0 части Д. Полученную смесь охлаждают до ООс и добавляют 0;28 мл (0,002 моль) триэтиламина и через 10 мин 0,27 г (0,002 моль) оксибензотиазола и 0,412 г (0,002 моль)

5 дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают 2 ч при 0°С и 24 ч при 4°С. Полученный осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме до образования остатка,ко0торый растворяют в этилацетате. Раствор промывают последовательно 1 N водным.раствором бикарбоната натрия, водой,холодНой 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органичес5кую фазу отделяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Хррматографируют в тонком слое и с пластинки продукт элюируют смесью хлороформа и метанола (9,25:0,75). Из каждой

0 пластинки вырезают основную УФ-положительную полосу и продукт элюируют с силикагелем смесью хлороформа и метанола. После удаления рас-ворителя в вакууме получают 1,2 г (81%)

5 целевого соединения в виде аморфного твердого вещества, -31,5° (С 0,5, метанол)..

Найдено,%: С 59,88, Н 7,06; N 11,15.

0

Cj Hs NiOgS (742,93).

вычисленоj%: С 59,88;Н 7,06;Ы 11,15.

Айалиэ аминокислоты: Найдено Туг 5 Leu 1,00, Gey 1,00; Phe 0,99. ж. Полуторахлористый моноацетат L-тироэил-О-лейцилглицил-Ь-фенилаланил-К -мет&л-1-м4тиониламида. К 5 мл ледяной уксусной кислоты содержащей 0,3 мл анизола, добавля 0,900 г (0,0012 моль) соединения, получение которого описано в части Через смесь пропускают безводный х ристый водород в течение 20 мин. Продукт сушат лиофилизацией, из уксусной кислоты получают целевое соединение в виде аморфного твердо вещества; - 2,1° ( с 0,3, м танол) . Найдено,%: С 54,30; Н 6,64 N 11,32; се 6,96. CaiH rNfiOfiS- 15 нее- СдНдОг (757, Вычислено,%: С 53,93; Н 6,79; N 11,10- се 7,02,. Анализ аминокислоты: Найдено Ту 0,99; Leu 1,03; GPy 0,99; Phe 0,9 Пример 3. Приготовление хлоргидрата 1 тирозил-0-аланилглиц -L-фенилаланил-L-метиониламида. А. Meтил-N -тnpeгп-бyтилoкcикapбo нил-1-фенилаланил-1-метионат. К смеси из 200 мл диметилформамида и 19,9 г (0,1 моль) хлоргидрата мeтил-L-мeтиoнaтa, охлажденно до 0°С, при перемешивании добавляют 19,9 мл (0,1 моль) дициклогексиламина, 26,5 г (0,1 моль) гг рет-бутилоксикарбонил-1-фенилаланина, 13,5 г (0,1 моль) оксибензотиазола и 20,6 (0,1 моль) дици логексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при и 24 ч при комнатной температуре,зате вновь охлаждают до О-с и образовавшийся осадок отфильтровывают.Фильтрат концентрируют в вакууме и остаток растворяют в этилацетате.Раство промывают последовательно холодной 0,75 N лимонной кислотой, водой, 1 N раствором бикарбоната натрия и водой. Этилацетатный слой сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме до получения кристаллическо го остатка. Остаток дважды перекристаллизовывают из смеси эфира и петролейного эфира и получают 26,6 (65%) целевого соединения;,т. пл. 8992Ьс. Найдено,%: С 58,41; Н 7,15; N 6,71. CjoHiJ iO S (410,53). Вычислено,%: С 58,51; Н 7,37; N 6,82. Б. N -трет-Бутилоксикарбонил-L-фенилапанин-1-метиониламид. К 60 мл метанола добавляют 13,0 соединения, полученного в условиях, описанных в части А. Полученную суспензию помещают в толстостенную склянку, снабженную мешалкой. Смесь охлаждают до -78°С и добавляют к ней 60 мл жидкого безводного аммиак Реакционный сосуд закрывают и предо тавляют содержимому возможность наг реться до комнатной температуры,при которой жидкость перемешивают 24 ч. Затем сосуд снова медленно охлаждают до -78®С и открывают. Остаток аммиака испаряют при нагревании смеси и продукт, полученный после выпаривания метанола, перекрйсталлизовывают из метанола, получают 9,7 г (77%) 192-195 с. целевого соединения; т.пл. Найдено, %: С 57,41; Н 7,17; N 10,37. C gH NgOijS (395,52). Вычислено,%: С 57,70; Н 7,39; N 10,62. В. Хлоргидрат 1-фенилаланил-1-метиониламида. К 150 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 10 мл анизола и 10 мл триэтилсилана, добавляют 9,6 г (0,024 моль) продукта части Б. Затем через смесь пропускали безводный хлористый водород с помощью трубки, диспергирующей газ, и через 30 мин реакционную смесь разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок перекристаллизовывают .из смеси этанола и эфира и получают 7,5 г (94%) целевого соединения; т.пл. 214-216 С. Найдено, %: С 50,75, Н 6,84; N 12,54. C,,OaSCe (331,87). Вычислено,%: С 50,67; Н 6,68; N 12,66. Г. N -mpeni-Бутилоксикарбонил-О-аланилглицил-L-фенилалаНИЛ-L-метиониламид . К 4О,мл диметилформамида добавляют 1,66 г (0,005 моль) продукта, описанного в части В, и дициклогексиламин (0,99 мл, 0,005 моль) и раствор перемешивают при охлаждении до . Затем к смеси добавляют 0,88 г (0,005 моль) м -гррещ-бутилоксикарбонилглицина, 0,68 г (0,005 моль) оксибензотиазола и 1,03 г (0,005 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при 0°С, а затем 24 ч при комнатной температуре. Осадок, образовавшийся после повторного охлаждения смеси до , отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Остаток растворяют в горячем этилацетате.После охлаждения образуется гель, который не поддается кристаллизации,гель фильтруют, сушат, получают 1,7 г аморфного твердого вещества. Вещество суспендируют в 50 мл ацетонитрила, содержащего 5 мл анизола и 5 мл триэтилсилана. После добавления моногидрата п-толуолсульфокислоты смесь перемешивают 5 ч. Полученный осадок отфильтровывают, сушат и получают 1,6 г (0,003 моль) сырой соли п-толуолсульфокислоты и глицил 1-фенилаланил-1-метиониламида Этот продукт растворяют в 30 мл безводного диметилформамида, охлаждают до 0®С, добавляют 0,336 г (0,003 моль) DABCO И через 10 .мин 0,8 г (0,004 моль) М -гореп -бутилоксикарбонил-О-аланина, 0,540 г (0,004 моль) оксибензотиазола и0,824 г (0,004 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при и 48 ч при комнатной температуре. Вновь охлаждают до 0°С и фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в бутаноле и раствор промывают последовательно 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в горячем этаноле и при добавлении этил-ацетата получают в виде осадка целевое соединение (1,1 г 42%).

Анализ аминокислоты: Найдено 1,01-, Giy 1,01; Phe 1,01; Met 0,98.

Д. М -трего-Бутилоксикарбонил-1тирозил -о-аланилглицил-1-фенилаланил-L-метиониламид.

К смеси 20 мл.ледяной уксусной кислоты, 2 мл анизола и 2 мл триэтилсилана добавляют 1,0 г (0,0019 моль) продукта, описанного в части Г. С помощью трубки, диспергирующей газ, в смесь вводят в течение 30 мин безводный хлористый водород. Затем к реакционной смеси добавляют эфир и образовавшийся осадок отфильтровывают и высушивают. Получают 0,870 г твердого вещества,которое растворяют в смеси 20 мл холодного (0°С) диметилформамида и 0,38 мл (0,0019 моль) дицйклогексиламина. Через 10 мин к смеси добавляют 0,534 г (0,0019 моль) N -rt pвm-бyтилoкcикapбoнил-L-тиpoзинa, 0,257 г (0,0019 моль) оксибензотазола и 0,391 г (0,0019 моль) дициклогексилкарбодиимида. Перемешивание продолжают при 2 ч и при комнатной температуре 24 ч. После повторного охлаждения смеси до образовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в бутаноле и раствор промывают последовательно 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом, магния,фильруют и фильтрат концентрируют в вакууме. При попытках кристаллизовать остаток из этила1гетата или этанола получают гель. Остаток растворяют . в горячем метаноле и раствор наносят на пластинку для хроматографирования

в тонком слое, для элюирования используют смесь хлороформа и метанола (9:1). Соответствующую полосу вырезают с пластинки и экстрагируют смесью хлороформа и метанола. После выпаривания растворителя в вакууме получают 0,270 г (21%) целевого соединения; Rj 0,17.

Анализ аминокислоты: Найдено Туг 1,00; АСа 1,02; се у 0,99; Phe 1,02; Met 0,98.

Е. Хлоргидрат L-тирозил-О-аланилглицил-1-фенилаланил-1-мётиониламида.

К 5 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 0,25 мл анизола, добавляют 0,270 г (0,0004 моль) продукта, опи5санного в части Д. В смесь вводят с помощью диспергирующей трубки хлористый водород в течение 20 мин.Зате реакционную смесь охлаждают и лиофилизируют, получают 0,182 г (75%) целевого соединения; R 0,5.

0

Анализ аминокислоты: Найдено Туг 0, АСа 1,00; GSy 0,99; Fhe 1,01; Met 0,91.

Этот анализ показал присутствие сульфоксида метионина.

5

П р и м е р 4. Приготовление трехводного хлоргидрата t- тирозил-D-aлaнилглицил-N -мeтил-L-aлaнил-N -метил-L-метиониламида.

А. N -ropeг(-Бyтилoкcикapбoнил-N 0-метил-1-фенилалинат-М,N-дициклогексиламмония.

К 80 мл безводного тетрагидрофурана добавляют5,3 г (0,02 моль) М -п1реп -бутилоксикарбонил-1-фенил5аланина. Полученный раствор охлаждают примерно до 10 С и добавляют 10 мл безводного диметилформамида и 0,5 г 18-кроун-б-эфира. Затем к полученной смеси медленно добав0ляют 10,15 г (содержащей 0,060 моль КН) масляной дисперсии гидрида калия. Полученную смесь охлаждают.до и добавляют к ней 1,24 мл (0,020 моль) йодистого метила.Перемешивание при комнатной температуре

5 продолжают 24 ч. Затем смесь выливают в дробленный лед и экстрагируют эфиром. Водную фазу подкисляют до рН 2 лимонной кислотой и продукт экстрагируют этилацетатом. Органи0ческую фазу промывают водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Получают некристахпизирующийся сироп, спектр ЯМР которого соответствует предполагаемому произ5водному.

ЯМР ICf 2,72, N-CH; Cfl,35, C(CHj).

Сироп растворяют в эфире и к раствору добавляют 4,0 мл дицйклогексил0амина. При охлг1ждении выпадают кристаллы, из которых после кристаллизации из смеси метанол-сложный эфир получают 6,8 г (74%) целевого соединения; Т.Ш1. 171-1740с; ч : 5 -22,0° 5 (С « 1, метанол). Найдено,%: С 70,60J Н 9,49; N 6,19. ,N40| (460,66). Вычислено,%: С 70,40 Н 9,63, N 6,08. Б. М -трет-Бутилоксикарбонил-н -метил-L-фенилаланил-Н -метил-L-метиониле1мид. Смесь из 30 МП безводного диметилформамида, содержащего 1,98 г (0,010 моль) хлористоводородной соли М -метил-1-метиониламида и 4,16 (.0,010 моль) )ет-бутилоксикарбонил-М -метил-1-фенилаланина перемешивают 5 мин, затем охлаждают до Ос и добавляют оксибензотаэол (1,35 г, 0,010 моль) и дицкклогекси карбодиимид (2,06 г, 0,010 моль). Эту смесь перемешивают 2 ч при-0°С и 24 ч при комнатной температуре, Вьщелившийся осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме до получения сиропа, который раство ряют в этилацетате. Этот раствор промывают последовательно IN раств ром бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме.до сиропа. Сироп растворяю в хлороформе, вносят в колонку (3x50 см) с силикагелем и продукт элюируют хлороформом, а затем смесь хлороформа с метанолом (9,75:0,25), Фракции объединяют и после концентрирования в вакууме получают 1,4 г (33%) сиропа, имевшего спектр ЯМР, соответствующий спектру целевого со динения, ЯМР: cf 2,93; N-CHgPheV Cf 2,73; N-CH.Met; (f 2,10; s-CH,; cf 1,37 с(сн)з. в. N - Pfiro-Бyтилoкcикapбoнил-L-тирозил- О-аланилглицил-М -метил-и-фенилсшанил-М -метил-Ь-метиониламиК смеси 5 мл ледяной уксусной ки лоты, 1 мл анизола и 1 мл триэтилси лана добавляют 1,4 г (0,0033 Моль) продукта части Б. Через смесь пропу кают безводный хлористый водород в течение 30 мин, затем реакционную смесь разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок выделяют и сушат (1,1 затем растворяют 40 мл диметилфор амида. К охлажденной до реакцио ной смеси добавляют,1,27 г (0,0031 моль) продукта, получение которого описано в части Д примера 0,420 г (0,0031 моль) оксибензотиа зола и 0,640 г (0,0031 моль) дицик логексилкарбодиимида. Через 10 мин добавляют 0,43 г(0,0031 моль) три этиламина и перемешивание продолжают при 2 ч и при 4®С - 48 ч.Обр зовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме до сиропа, который затем растворяют в зтилацетате. Раствор последовательно промывают 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой, а затем сушат над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме до получения 2,0 г сырого продукта. Продукт растворяют в хлороформе, раствор вносят в колонку (3x50 см) с силикагелем и продукт элюируют хлороформом, а затем смесью хлороформа и метанола (9:1). Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют, концентрируют в вакууме, получают 1,1 г (47%) некристаллического целевого соединения. Найдено,%: С 59,01; Н 6,78; N 11,58. (714,88). Вычислено,%: С 68,80; Н 7,05; N 11,76. Ж. Трехводный хлоргидрат L-тиро3ил-D-аланилглицил-N -метил-О-фенил ал aнил-N -мeтил-L-мeтиoнилaмидa. К смеси 10 мл ледяной уксусной кислоты и 0,5 мл анизола добавляют 0,70 г (0,001 моль) продукта,описанного в части В. Через смесь в течение 20 мин пропускают безводный хлористый водород. Затем реакционную смесь охлаждают и.лиофилизируют до получения 0,678 г гигроскопического целевого соединения. Найдено,%: С 51,13; Н 6,,97; N 11,72. CsoH jNeOgSCe (705,23). Вычислено,%: С51,08;Н7,0; N 11,91.. . Анализ аминокислот: Найдено Туг 1,03; АСа 1,01; Ggy 0,96. Пример 5. Приготовления моноацетата-1,25-хлоргидрата L-тирозил-0-аланил-1-аланил-1-фенилаланил-м -метил-1-метиониламида. А. Бензил-М -трет -бутилоксикарбонил-0-бензил-1-тирозил-0-аланил-0-алината. К раствору 3,19 г (0,010 моль) п-толуолсульфонатной соли бензилалината в 30 мл безводного диметилформамида добавляют 4,43 г (0,010 моль) продукта., описанного в части Б примера 1. Смесь охлаждают до 0°С и добавляют к ней 1,12 г (0,010 моль) DABCO, а затем через 10 мин-2,135 г (0,010 моль) оксибензотазола и 2,06 г (О,010 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при и 48 ч при комнатнОй температуре. Образовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме до сиропа. Сироп растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно IN раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 N соляной кислотрй и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния,фильтруют. Фильтрат концентрируют в вакууме и получают остаток, который не кристаллизуется из этанола или -эфира. При разбавлении эфирного раствор петролейным эфиром получают гель, который фильтруют и сушат в вакууме Сырой аморфный продукт (4,0 г) вносят в колонку см с силикагелем и продукт элюируют хлороформом,затем смесью хлороформа и метанола (9,75 : 0,25). Объединяют фракции, содержащие целевой продукт,элюат упаривают в вакууме, получают сиропообразный остаток. Этот остаток растворяют в эфире и при добавлении к раствору петролейного эфираполучают 3,0 г (50%) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества-, т.пл. 100-104°С. Найдено,%: С 67,56; Н 6,60; N 7,16. C3jH,iNjOr (603,72). Вычислено,%: С 67,64; Н 6,85, N 6,96. Б. N -mpem-Бутилоксикарбонил-1-тирозил-0-аланил-и-аланйл. К 5 мл безводного диметилформамида добавляют 2,9 г (0,0048 моль) продукта, описанного в части А.Затем к смеси добавляют 1,0 г 5%-ного палладия на угле и 50 мл этанола. В течение 6 ч в смесь вводят водород при атмосферном давлении и комнатной темперг туре. Затем реакционный сосуд продувают азотом, отфильт ровывают катализатор и фильтрат кон центрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Получают 1,5 г (74%) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества; qCj 25,9°. (С 5, хлороформ). Найдено,%: С 56,80; Н 9,95; 9,81, (423,47), Вычислено,%: С 56,73; Н 6,90; N 9,92. В. N -глрет-Бутилоксикарбонил-Ь-тирозил-О-аланил-L-аланил-L-фенилаланил-М -метил-1-метиониламид. Смесь из 10 мл безводного диметилформамида, 0,692 г (0,002. моль хлористоводородной соли L -фенилаланин-Н -метил-1-метиониламида(приготовлен, как описано .в части 3 примера 1) охлаждают до 0®С и доба ляют к ней 0,28 мл (0,002 моль) триэтиламина. Реакционную смесь пер мешивают 10 мин и добавляют к ней 0,846 г (0,002 моль) продукта,описа ного в части Б, затем 0,270 г (0,002 моль) оксибензотиазола и 0,412 г (0,002 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь пере мешивают 2 ч при 0°С и 48 ч при комнатной температуре. После повтор ного охлаждения до 0®С смесь фильт руют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно IN раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме, получают 1,6 г сырого продукта. Продукт растворяют в хлороформе и помещают на две пластинки для анализа толстослойной хроматографией. Проявление ведут в смеси хлороформ и метанол (9:1). Основные полосы вырезают из каждой пластины и продукт вьаделяют из силикагеля, экстрагируя смесью хлороформа и метанола. Элюат (1,3 г) растворяют, вновь наносят на одинарную пластинку для толстослойной хроматографии и получают 1,0 г (70%) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества)л1 -25,6° (С 0,5, метанол) . Найдено, С 58,60; Н 6,87; N 11,53. CssHsoNfiOeS (714,88). Вычислено,%: С 58,80 ;н 7,05; N 11,76. Г. Моноацетат хлоргидрата L-тирозил-D-аланил-L-аланил-L-фенилаланил-Ы- -метил-1-метиониламида. Через смесь из 5 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 0,5 мл анизола,и 0,880 г (0,0011 моль) продукта, описанного в части В, барботируют хлористый водород в течение 30 мин, затем реакционную смесь охлаждают и лиофилизируют. Получают 0,704 г целевого соединения-, -16,2° (С 0,5, метанол). Найдено,%: С 53,48; Н 6,47; N 11,62; се 6,50. CjoH,g06 5-1,25 НСе-СгН О, (719,14) Вычислено, %: С 53,43; Н 6,45-, N 11,68; Ct 6,16. Анализ аминокислоты: Найдено Туг 1,00; АЕа 1,99-, Phe 1,01. Пример 6. Приготовление ацетата 1-тирозил-0-аланилглицил-1-фенилаланил-1-Ы -метил-5-этилцистейНИЛамида. А. Дициклогексиламиновая соль N -трет-бутилоксикарбонил-5-этил-1-цистеина. К 400 мл ди-мет ил формами да добавляют 50 г (0,336 моль) 1-(5-этш1)-цистеина, а затем тетраметилгуанидин (44,8 мл, 0,336 моль) и дициклогексиламин (б6,8 мл, 0,336 моль). После этого по каплям при перемешивании добавляют трет -бутиловый эфир азидомуравьиной кислоты (68 мл, 0,50 моль), в течение 1 ч и смесь продолжают перемешивать в течение 48 ч при комнатной температуре. Выпавший в осадок азид дициклогексиламмония отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток

распределяют между эфиром и водой. рН водного слоя повьлаают до 8,0. Органический слой отделяют и отбрасывают. Водный слой подкисляют до рН 2,0 холодной разбавленной соляной кислотой и экстрагируют холодным этилацетатом. Этилацетатную фазу промывают водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме Полученный остаток растворяют в эфире и к раствору добавляют 66,8 мл (0,336 моль) дициклогексиламина. Полученный осадок перекристаллизовывают из этилацетата и получают 32,8 г (23% от теории) целевого „ соединения; т.пл. 156-159°С, ,1° (С 1,0, метанол), -7,7 (С 1, метанол).®

Найдено,%: С 61,37; Н 9,98/ N 6,26.

(430,6).

Вычислено, %: С 61,36, Н 9,83; N 6,51.

Б. М -Бутилоксикарбонил М-метил-S-этил-L-цистеиниламид.

К 50 мл безводного тетрагидрофурана добавляют 18,58 г (74,3 моль) N -бутилоксикарбонил-S-этил-L-цистеина (приготовлен при нейтрализации продукта, описанного в части А. и экстракции этилацетатом). Полученную смесь по каплям в течение 30 мин добавляют к перемешиваемой суспензии 42,45 г гидрида калия (22,1% КН в минеральном масле 0,234 моль КН) в 375 мл тетрагидрофурана при 0°С и содержащей 0,35 г 18-кроун-6-эфира. Затем по каплям в течение 15-20 мин добавляют йодистый метил (9,25 мл, 0,149 моль) в 20 мл тетрагидрофурана. Смесь перемешивают при 1,5 час, к ней по каплям добавляют 7,5 мл уксусной кислоты в 7,5 мл тетрагидрофурана, а затем 5 мл этанола. Полученную реакционную смесь выливают на лед и устанавливают рН 9 смеси при добавлении 2 N раствора гидроокиси натрия. Полученный водный раствор экстрагируют эфиром, рН 3 водного слоя устанавливают при добавлении твердой лимонной кислоты, затем экстрагируют эфиром (3x300 мл). Эфирные экстракты объединяют, промывают водой, сушат над сулфатом магния и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 200 мл эфира и к раствору добавляю 9,56 мл (74,3;Гмоль) d-( + )-Л-метилбензиламина. К охлажденной смеси добавляют 500 мл петролейного эфира. Раствор концентрируют в вакууме и остаток вновь растворяют в петролейном эфире. Затем смесь охлаждают до и осадок отфильтровывают (2,74 г). Маточный раствор концентрируют в вакууме и остаток растворяют в эфире. Эфирный раствор промывают IN лимонной кислотой, водой и сушат Нс1д сульфатом магния, концентрируют в вакууме. Получают 6,56 г (33% от теории) сиропаiC rt о -61,1 (с 1, этанол);

ЯМР (CDCSj ) , rf 2,90, N CHj, l, -бутил; f 4,9-4,5 СН. 5 .Продукт (6,5 г, 0,025 моль) растворяют в 80 мл диметилформамида и раствор охлаждают до . Затем добавляют к нему изобутиловый эфир хлормуравьиной кислоты (3,6 мл,

Q 0,027 моль) и N-метилморфолин

(2,99 мл, Oj027 моль). Реакционную смесь перемешивают 10 мин при , а затем через нее пропускают газообразный безводный аммиак в течение 1 ч. Смесь дополнительно перемешивают 4 ч при -15С, а затем вливают в смесь льда и 1 N раствора бикарбоната натрия. Холодный водный слой экстрагируют эфиром, эфирный экст.ракт промывают холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Получают остаток, который кристаллизуют из смеси чфира и петролейного эфира и получают 1,7 г

5 (26%) целевого соединения;

т.пл. 56-59°C, -127,6°(С 0,5, хлороформ).

ЯМР (СНСе): СР 2,80, N-CH,, cf 1,46 mpenr -бутил; (Г 4,9-4,5;

п V-СН.

Найдено,%: С 50,56; Н 7,93; N 10,51.

С, (261,36).

- Вычислено,%: С 50,55; Н 8,10; N 10,72.

В. М -трет-Бутилоксикарбонил-1-фенил ал анил-№ -метил-S-этил-L- цист ей Н.ИЛ амид.

К 20 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 1 мл триэтилсилана и 4 мл анизола, добавляют 2,5 г (9,5 моль) ()°-трет-бутилоксикарбонил-М -метил-5-этил- L-цистеиниламида. Через полученную смесь в течение с 30 мин пропускают сухой хлористый водород, затем добавляют эфир и получают осадок в виде хлористоводородной соли (1,8 г). Осадок растворяют в 25 .м-л диметилформамида,растQ вор охлаждают до 0°С и нейтрализуют 1,31 мл триэтиламина.Добавляют )/згл-бутилоксикарбонил-1-фенилаланин (2,65 г, 0,01 моль); 1,35 г (0,01 моль) оксибензотиазола и 2,06 г (0,01 моль) дициклогексил карбодиимида. Полученную смесь перемешивают при 0°С 2 ч и при комнатной температуре 24 ч. Затем ее охлаждают до 0°С и отфильтровывают образовавшийся осадок. Фильтрат концентрируют в вакууме и полученный остаток растворяют в этилацетате. Раствор экстрагируют 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 N лимонной кислотойи водой. Затем смесь сушат 5 над сульфатом магния, растворитель

упаривают в вакууме, полученный сироп растворяют в хлороформе и раствор вносят в колонку (3x45 см), содержащую силикагель сорта 62 фирмы Грэйс и Давидсон. Элюирование ведут смесью хлороформа и метанола при ступенчатом градиенте Cti,- CHCEj(CHjOH) С9: Я,фракции объединяют в соответствии с результатами анализа и упаривают в вакууме, получают 3,0 г целевого соединения; (С 0,5, метанол).

Найдено,%: С 58,87/ Н 7, N 9,81.

CjbHsifjOl (409,5).

Вычислено,%: С 58,65; Н 7,63; N 10,26.

Ж. Дициклогексиламиновая соль N -гпрет-бутилоксикарбонил-1-тирозил-О-аланилглицина.

46,80 г продукта, полученного при гидрогенолизе (способом, описанным в части Д примера 1), бензил N -mpem-бутилоксикарбонил-0-бензил-L-тирозил-О-аланилглицината, растворяют в 150 мл изопропилового спирта и к раствору добавляют 16 мл (0,081 моль дициклогексиламина, и эфир, доведя объем раствора до 1,5 л, упаривают полутвердую массу, обрабатывают до затвердения растиранием и полученный осадок сушат. Получают 46,04 г (98%) твердого вещества; т.пл. 194,5-197®С

Вещество растворяют в 100 мл кипящего метанола и добавляют 500 мл изопропилового спирта. Раствор упаривают до 150 мл, продувая через него азот. После охлаждения продукт выпадает восадок, осадок отделяют, сушат и получают 41,44 г (88%) целевого соединения; т.пл. 198-200,5с 17,9°(С 1,метанол).

Найдено,%: С 62,95; Н 8,77; N 9,20.

,07(590,8).

Вычислено, С 63,03; Н 8,53; N 9,48.

3. N - lDpen1-Бyтилoкcикapбoнил-L-тиpoзил-0-aлaнилглицил-L-фeни.rIaлaнил-N -мeтил-S-этил-L-циcтeинилaмид.

К 20 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 3 мл анизола и 3 мл триэтилсилана, добавляют 2,5 г (6,1 моль) продукта, описанного в части В. Через реакционную смесь барботируют сухой хлористый водород в течение 25 мин.Добавляют эфир, , смесь охлаждают, отфильтровывают осадок и получают 1,9 г (5,5 моль) хлористоводородной соли. Соль растворяют в 25 мл диметилформамида, раствор охлаждают и добавляют к нему 3,2 г (5,5 моль) дициКлогексиламиновой соли И -трегп -бутилоксикарбонйл-L-тирозил-D-аланилглицина.Полученную смесь перемешивают при 0®С 10 мин. Затем добавляют оксибензотиазол (0,74 г, 5,5 моль) и дицикпогексилкарбодиимид (2,1 г,5,5 моль)

и смесь перемешивают при 2 ч и при 4 С - 48 ч.Образовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают 5 IN раствором бикарбоната катрия, водой, 0,75 N лимонной кислотой и, водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и упаривают в . Получают 3,5 г сырого целвQ вого соединения. Продукт растворяют в хлороформе и вносят в колонку размерами 3x45 см с силикагелем сорта 62 фирмы Грейс и Давидсон и Элюирование ведут при ступенчатом градиенте смесью хлороформ-метанол 5 cHCEj - CHCtjiCH OH (9:1). фракции комбинируют на основании результатов анализа хроматографией в тонком слое, упаривают в вакууме. Получают 2,4 г (62%) чистого целевого соединения ;t у -30, 7 (С О , 5 ,метанол) .

Найдено,%:с 58,14; Н 6,96 N 11,94.

Ca H«Ng08S (700,86). Вычислено, С 58,27; Н 6,90; 5 N 11,99.

Анализ аминокислоты: Найдейо Туг 1,01-, Аеа 1,00; сеу 1,00; Phe 0,98; NH 1,09.

Е. Ацетат L-тирозил-О-сшанилгли.. цил-1-фенилаланил-1-Ы -метил-5-этилцистеиниламида.

К 20 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 2 мл анизола и 2 мл триэтилсилана, добавляют 2,2 г (Змоль) продукта, описанного в части Д. Через реакционную смесь барботируют в течение 25 мин сухой хлористый водород. Добавляют эфир и смесь охлаждают. Полученный осадок отфильтровывают и сушат (2,0 г). 0 Осадок (1,2 г) растворяют в достаточном количестве буфера (1% пиридина и 0,05% уксусной кислоты в воде) для Достижения объема 10 мл.Раствор вносят в колонку размерами 2,5x99 см, заполненную диэтиламиноэтил - сефадексом А 25 (ацетат), предварительно уравновешенную с тем же буфером.Определенные фракции комбинируют и лиофилизируют. При повторной (Лиофилйзаf. ции ИЗ 10%-ной уксусной кислоты и последующей лиофилизации из смеси воды и ацетонитрила (75:25) получают 0,59 г целевого соединения, Ч +9 ,9 (С 0,5, 1 N-НСг).

Найдено,%: С 56,63; Н 6,72; 5 N 12,63; S 4,69.

Cj Hj NgOgS (660,79). Вычислено,%: С 53,35; Н 6,71; N 12,72; S 4,85.

Анализ аминокислоты: Найдено Туг ( 1,00; АЕа 1,01; Gty 1,00; Phe 0,98; NH,, 1,09.

Пример 7. Приготовление ацетата 1-триозил-0-аланилглицил-1-фе5 нилaлaнил-N -мeтил-L-лeйцилaминa. А. N -i f«m-Вутилоксикарбонил-М -метил-1-лейцина в форме d-(-f)-d-Me тилбензиламиновой соли . К 20 мл эфира добавляют 12,5 г (0,05 моль) гидрата М -тр«п-бутилоксикарбонил-L-лейцина и смесь суша над сульфатом магния и концентрирую в вакууме. Остаток растворяют в 75 тетрагидрофурана и раствор по капля при перемешивании добавляют в течение 35 мин к охлажденной суспензии () 27,9 гидрида калия (22,1%-ная суспензия в минеральном масле, 0,154 моль КН) в 200 мл тетрагидрофурана, содержащего 0,25 г 18-кроун -6-эфира. Затем в течение 15 мин по каплям добавляют йодистый кетил (6,4 г) в 10 мл тетрагидрофуране. Смесь выдерживают при 0°С в течение 3 ч, затем в нее по каплям вносят 5 мл уксусной кислоты в 5 мл теграгидрофурана и 5 мл этанола. Полученную смесь выливают на 500 мл льда при добавлении 1 N раствора гидроокиси натрия устанавливают рН Водный раствор экстрагируют эфиром и подкисляют до рН 3 при добавлении твердой лимонной кислоты. Подкислен ную водную суспензию экстрагируют эфиром.. Объединенные эфирные экстра ты промывают водой, сушат над сульф том магния и концентрируют в вакуум Получают; 13,2 г (107% от теории) . сырого продукта. Анализ методом хро матографии в тонком слое показал присутствие в полученном продукте некоторого количества непрореагировавшего исходного продукта. Полученный продукт растворяют в эфире и к раствору добавляют 5,25 мл (0,05 моль) тетрабуТиламина.Эфирный раствор разбавляют петролейным эфиром и охлаждают в течение,ночи.Обра зовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат промывают 1 N лимонной кис лотой, а затем водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток (6,45 г) растворяют в 100 мл эфира и к раствору добавляют 3,39 г (0,026 моль) d-(+)-d-метилбензилами на. Раствор охлаждают в течение ночи, затем фильтруют и получают 9,09 (49%-) целевого соединения;т.пл. 12 122«с;Сч З -14,1°(С 1,метанол). Найдено,%: С 65,83.Н 9,05; N 7,35. CjoHjuNjO (366,5), Вычислено,%: С 65 ,54 ; Н 9,35; N 7,64. Б. -БутилоксикарбониЛ-N -метил-L-лейциламид. Смесь из 80 мл диметилформамида я 11,5 г (0,047 моль) N -rTipem-бутилоксикарбОнил-М -метил-1-лейци (приготовлен при нейтрализации продукта, описанного в части А,лимонно кислотой с последующей экстракцией эфиром) охлсъедают до -15 С и добавляют к ней изобутиловый эфир хлормуравьиной кислоты (6,7 мл, 0,052 моль) и N-метилморфолин (5,7 мл, 0,052 моль). Смесь перемешивают 10 мин при -15С и в течение 1 ч и через нее барботируют безвеяный аммиак. Перемешивание продолжают еще 4 ч при -15®С. Затем реакционную смесь вливают в смесь 1 N раствора бикарбоната натрия и льда. Охлажденную смесь экстрагируют эфиром, эфирный слой промывают 0,75 N лимонной кислотой и водой, сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют из смеси эфира и петролейного эфира и получают 5,5 г (48%) целевого соединения; т.пл. 127-128°с; - 42,2« (С 1, метанол). Найдено,%: С 59,17; Н 9,66; N 11,21. СдНаМ Оз (244,3). Вычислено,%: С 58,99-, Н 9,90; N 11,47, В. М -трет-Бутилоксикарбонил-1-фенилаланил-М -метил-1-лейцйламин. К 30 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 3 мл анизола и 3 мл триэтилсилана, добавляют 5,0 г (0,02 моль) продукта, описанного в части Б-, и через смесь барботируют сухой хлористый водород в течение 25 мин. Затем добавляют эфир и смесь охлаждают. Образовавшийся осадок сушат (3,6 г). Собранную хлористоводородную соль растворяют в 60 мл диметилформамида. Раствор охлаждают до 0°С и добавляют к нему 3,99 мл (0,02 моль) дициклогексиламина. Смесь перемешивают при 10 мин, добавляют 5,3 г (0,02 моль) гп/ т-бутилоксикарбонил- L-фенилаланина, а затем 2,7 г (0,02 моль) оксибензотиазола и 4,12 г (0,02 моль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивают 2 ч при , затем при комнатной температуре 24 ч. После охлаждения до смесь фильтруют и фильтрат .упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и полученный раствор промывают 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 N лимонной кислотой и водой. Затем раствор, высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме. Полученный остаток растворяют в хлороформе и раствор переносят в колонку размерами 3 х 45 см с силикагелем. Элюирование проводят при градиенте хлороформ-мет анол j CHCEg - CHCEj : : (9:1). Фракции комбинируют на основании результатов анализа методом хроматографии в тонком слое и после упаривания растворителя получают 5,7 г (73%) целевого соединения; Г -49,5° (С О,5, метанол).

ЯМР (СОС): (Г 1,4 трет -бутил/ СГ 7,25 фенил) cf 0,95-0,75, CH(CHi). 6-2,7 N-CH,.

Г. )вn)-Бyтилoкcикapбoнил-Lrтиpoзил-0-aлaнилглицил-L-фeнилaлaЧнил-N -мeтил- L-лейциламид

Смесь из 20 мл 1 N НС в ледяной уксусной кислоте, содержащей 1 мл анизола 2,0 г продукта, описанного в части В, вьвдерживают при комнатной температуре 30 мин, добавляют эфир и охлаждают. Полученный осадок отделяют и высушивают (1,63 г).Собранную хлористоводородную соль растворяют в 30 мл диметилформамида и к раствору добавляют 2,95 г (0,05 моль) дихлоргексиламиновой соли N - P fi-бутилоксикарбонил-L-тирозил-О-аланилглицина. Смесь перемешивают 15 мин при 0°С, затем к ней добавляют 0,675 г (0,005 моль) оксибензотиазола и 1,3 г (0,005 моль дициклогексилкарбодиимида.Реакционную смесь перемешивают 24 ч При 4°С, полученный осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 N лимонной кислотой и водой.Этиацетатный раствор сушат над сульфато магния и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в хлороформе и paciBOp вносят в колонку 3x45 см с силикагелем. Продукт элюируют,используя ступенчатый градиент, смесью хлороформ-этанола l CHCEj- С.НСЕз-СН,ОН (9:1)1. Фракции объединяют на основании результатов ансшиза хроматографией в тонком слое и после упаривания растворителя получают 2,3 г (67%) целевого соединения; ;; -17,5°(С 0,6, метанол).

Найден9,%: С 61,33; Н 7,47; N 12,08.

CssHsoNbOfi (682,8).

Вычислено,%: С 61,57; Н 7,38; N 12,31.

Анализ аминокислоты: Найдено Туг 1,00; АСа 1,01; GCy 0,99; Phe 1,00; NH 3 1,08.

Д. Ацетат L-тирозил-О-аланилглицил-L-фенилаланил-М -метил-L-лейциламид а..

Смесь из 5 мл муравьиной кислоты, содержащей 0,5 мл анизола и 0,1 мп триэтилсилана и 1,8 (0,003 моЛь) продукта, описанного в части Г, перемешивают при комнатной температуре 3 ч, затем разбавляют эфиром и выдерживают в течение 1ч. От полученного масла декантацией отделяют эфир масло растворяют- в этаноле. При. добавлении получают осадок, который отфильтровывают сушат и получают 0,9 г сырого целевого соединения. Продукт растворяют в достаточном количестве буфера (1% пиридина и 0,05%

муравьиной кислоты в воде) до объема 5 мл. Раствор вводят в колонку ра.эмерами 2,5x100 см,заполненную диэтиламиноэтил-сефадексом А-25 (эфир муравьиной кислоты)и элюируют тем же буфером. Соответствующие фракции объединяют на основании УФ-профиля элюирования и лиофилиэиругот. При повторной лиофилизации из 10%-ной уксусной кислоты и из смеси воды и ацетонитрила (75:25) получают . 0,852 г целевого соединения/Г + 23,2«(С 0,6, NHC8).

Анализ аминокислоты: Найдено Туг 1,02; Аеа 1,00; Git у 1,01; Phe 0,96j NHj 1,03.

5

, Пример 8. Приготовление хлоргидрата L-тирозил-О-аланилглицил-L-фенилаланил-S-параметоксибензил-1-цистеинламида.

А. N -трет-Бутилоксикарбонил-S0-параметоксибензил-1-цистеиниламид.

К 80 мл диметилформамида добавляют 6,82 г (0,02 моль) М -тр№-бутилоксикарбонил-5-п- метоксибензил-L-цистеина и после охлаждения до

5 -15°С к этой смеси добавляют 2,88 мл (0,022 моль) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты и 2,42 мл (0,022 моль) N-метилморфолина.ЧерезI 10 мин через реакционную смесь в

0 течение 1,5 ч пузырьками пропускают безводный аммиак. Перемешивание продолжают еще 2 ч при . Затем реакционную смесь вливают в смесь льда и 1 N раствора бикарбоната нат5рия. Полученную водную суспензию экстрагируют этилацетатом и полученный экстракт промывают водой, 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органический слой сушат над сульфатом магния и концентрируют в ваку0уме. Остаток перекристаллизовывают из смеси этанола и воды и получают 4,9 г (72%) целевого соединения; т.пл. 138-1400С; ы г-12,8°(С 5, метанол)

5

Найдено,%: С 56,58; Н 6,97; N 8,07.

C jHyN-iO, S (340,4).

Вычислено,%: С 56,45; Н 7,11; N 8,23,

0

B.N -mpem-Бутилоксикарбонил-L-фенилаланил-5-параметоксибензил-L-цистёниламид.

Безводный хлористый водород барботируют через раствор 4,1 г

5 (0,012 моль) продукта, описанного в части А, в 45 мл ледяной уксусной кислоты, 5 мл анизола и 5 мл триэтилсилана. Через 20 мин добавляют эфир, отделяют и сушат образовавшийся осадок (3,3 г). Собранную

0 хлористоводородную соль растворяют в 50 мл диметилформамида и к раствору добавляют 2,92 г (0,012 моль) 1ициклогексиламина, 3,19 г 0,012 моль) м -трел1-бутилоксикарбо5нил-1-фенилаланина и 1,62 (0,012 мо оксибензотиазола. Смесь перемешивают 10 мин при и добавляют 2,47 г (0,012 моль) дициклогексилкарбодиимида. Через 2 ч перемешивания при реакционную смесь еще 24 ч перемешивают при комнатной температуре, затем вновь охлаждают до и отфильтровывают полученный осадок. Фильтрат концентрируют в вакууме и остаток растворяют в н-бутиловом спирте. Раствор промывают 1 N раствором бикарбоната натрий и водой, затем высушивают над сульфатом магния и упаривают в ваку уме. Полученный остаток кристаллизуют из этанола и получают 4.95 г (85%) целевого соединенияiт.пл. 17 178С; Д -35,1°(С - 0,5, диметилформамид) Найдено,%: С 61,78; Н 6,78; 8,28. C HjeNjOsS (487,6) Вычислено,%:С 61,58 Н 6,82; N 8,62. Б. N -трет-БутилоксикарбонилL-тирозил-D-аланилглицил-L-фенила.ланил-5-п-метоксибензил-1-цистеин амид. Безводный хлористый водород бар ботируют через раствор 1,3 г (0,027 моль) продукта, описанного части А, в 40 мл ледяной уксусной кислоты, 4 мл анизола и 4 мл триэт силана. Через 20 мин к смеси добав ют эфир, образовавшийся осадок соб рают и высушивают (1,1 г). Хлорист дородную соль растворяют в 10 мл диметилформамида и смесь охлаждают до . Затем добавляют триэтилами (0,34 мл, 0,0026 моль) и через 10 1,06 г (0,0026 моль) М -трет-бутил оксикарбонил-1-тирозил-D-аланилгли цина, 0,35 г (0,0026 моль) оксибен зотиазола и 0,536 г (0,0026 моль) дициклогексилкарбодиимида. Реакцио ную смесь перемешивают при 2 ч и при °С - 72 ч. Полученный осад собирают и фильтрат концентрируют вакууме. Остаток растворяют в этил ацетате и раствор промывают 1 N ра вором бикарбоната натрия,водой, О,75 N лимонной кислотой и водой. Экстракт высушивают над сульфатом магния и концентрируют в вакууме.. Остаток растворяют в этилацетате и чистят хроматографированием на сил кагеле. Фракции комбинируют по рез татам анализа, концентрируют и пол чают 1,1 г (52%) целевого соединен после кристаллизации из небольшого объема этилацетата/Jjds l -4,3(0 0,5, диметилсульфоксид). Найдено,%: С 59,95, Н 6,24; N 10,53. (778,9). алчислено,%: С 60,14; Н 6,47, N 10,79. Анашиз аминокислоты: Найдено Туг 0,98; Ава 1,03; GEy l,Oi;Phe 0,98; NHj 0,99. Г. Хлоргидрат 1-тирозил-0-аланилглицил-1-фенилаланил-5-п-метоксибензил-1-цистеиниламида. К 20 кш ледяной уксусной кислоты, содержащей 0,5 мл анизола, добавляют 0,90 г (0,0012 моль) продукта, описанного в части В. Безводный хлористый водород барботируют через раствор в течение 30 мин. Затем смесь лиофилизируют и получают 0,862 г (100%) целевого соединения; oll +2,6° (С 0,5, 1NHCE ) Найдено, %: С 56,85, Н 6,06, 11,48; СС 5,21. N g О 7 S (715,2) Вычислено,%: С 57,09; Н 6,06; N 11,75 С) 4,96. Анализ аминокислоты: Найдено Туг 0,99; Аеа 1,01; сеу i,oi; рие о,98; NHj о,99. Пример 9. Приготовление ацетата L-тирозил-D-аланилглицил-L-фенил ал анин-М -метил-1-метионил амида. А. Соль N -mpem-бутилоксикарбонил-М -метил-1-метионина и d(+)d-мeтилбензиламина. Суспензию дициклогексиламиновой соли Ы -гп/эат-бутилоксикарбонил- L-метионина (86,13 г, 0,2 моль) в 600 мл холодного эфира промывают 4 раза порциями по 100 мл холодной 1,5 N лимонной кислотой и водой. Отделенную органическую фазу высушивают над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в 150 мл тетрагидрофурана и раствор по каплям в течение 30 мин добавляют к перемешиваемой суспензии 0,6 моль гидрида калия в 1000 мл безводного тетрагидрофурана (), содержавшего 1,0 г 18-кроун-6-эфира. К реакционной смеси добавляют по каплям в течение 15 минут йодистый метил (25 мл, 0,4 моль). Через 2 ч снова по каплям добавляют смесь 20 мл уксусной кислоты и 20 мл тетрагидрофурана, а затем 40 мл этанола. Смесь перемешивают в течение 30 мин и выливают на 2 .л льда. При добавлении 2N раствора гидроокиси калия устанавливают рН 7 водной смеси и продукт экстрагируют эфиром (3x400 мл), затем подкисляют до рН 3 твердой лимонной кислотой. Смесь экстрагируют эфиром (3x500 мл). Эфирные экстракты объединяют, промывают и сушат над сульфатом магния, упаривают в вакууме до получения сиропа (44,76 г, 84% от теории).Сироп растворяют в 450 мл этилацетата и добавляют 25,78 мл (0,2 моль) d-(+)-d-метилбензиламина. Охлаждают, выпавший в осадок продукт отфильтровывают, получают 51,05 г (66%) целевого соединения; т.пл. 131-134°с; tfl -18,9° (С 1, этанол).

Найдено,%: С 59,15; Н 8,12; N 7,29.

C gHjuNjO S (384,54), Вычислено,%; С 59,35; Н 8,39 N 7,29.

Б. N -п р Л1-Бутилоксикарбонил-N -метил-1-метиониламид.

М -трет-Бутилоксикарбонил-К -метил-1-метионин (33,3 г, 0,127 моль), полученный при подкислении соли d-(+)-d-метилбензиламина, описанной в части А,растворяют в 160 мл диметилформамида и экстрагируют эфиром, Раствор охлаждают до и добавляют к нему 18,3 мл (0,14 миль) изобутилхлорформиата (15,4 мл, 0,14 моль) N-метилморфолина, Смесь перемешивают 10 мин при и через нее барботируют безводный аммиак в течение 1 ч. Перемешивание при -15°С продолжают в течение 4 ч, затем реакционную смесь выливают в 300 мл холодного раствора IN бикарбоната натрия. Водную суспензию экстрагируют эфиром. Эфирный экстракт промывают водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой, сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме до сиропа. Сироп кристаллизуют из смеси эфира и петролейного эфира и получают 16 г (48%) целевого соединения; т.пл. 75-77 ci tdvli - 177,3° (С 0,5, хлороформ).

Найдено,%: С 50,63; Н 8,57; N 10,45.

С НггМлЗО-} (262,17) Вычислено,%: С 50,36; Н 8,45; N 10,78.

В. м -п1ре1 -Бутилоксикарбонил-1-фенилаланин-М -метил-1-метиониламид

Через смесь 70 мл ледяной уксусной кислоты, 5 мл анизола, 7 мл триэтилсилана и 13,15 г (0,05 моль) продукта, описанного в части Б,барботируют безводный хлористый водород в течение 25 минут и выливают ее в эфир. Образовавшийся осадок (9,9 г сушат. Хлоргидрат растворяют в 200 мл диметилформамида. Смесь охлаждают до 0°С и добавляют 9,9 мл (0,05 моль) дициклогексиламина.После 10 мин перемешивания вносят 6,8 г (0,05 моль) оксибензотиаэола, 13,3 г (0,05 моль) N -трет-бутилоксикарбонил-1-фенилсшанина и 10,3 г (0,05 моль) дициклогек-силкарбодиимид Полученную смесь перемешивают-2 ч при и 48 ч при комнатной температуре. После охлаждения до смес фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Полученное масло растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 N раствором бикарбоната натрия, водой,О,75 N лимонной кислотой и водой. Этилацетаный раствор сушат над сульфатом магмия, упаривают в вакууме и получают остаток, который кристаллизуют из эфира и получают 16,4 г (80%) целевого соединения; т.пл. 114-115 с; - 43,4(С 0,5, метанол).

Найдено,%: С 58,76; Н 7,42; N 10,30.

CjoH},NjO|S (409,55)., 5 Вычислено,%: С 58,65; Н 7,63; N 10,26.

Г. N -тpeт-Бyтилoкcикapбoнил-L-тирозил-0-апанилглицил-1-фенилаланил-N -метил-L-метиониламид. К смеси 20 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл анизола и 2 мл триэтилсилака добавляют 3,5 г (8,56 моль) продукта, описанного в части В, и через смесь барботируют безводный хлористый водород в течение 25 мин.

5 Затем добавляют эфир, осажденный Хлоргидрат отфильтровывают и фильтрат сушат в вакууме. Раствор 5,0 г (8,47 моль) соли N -mpem-бутилоксикарбонил-1-тирозил-0-аланилглицина0 и дициклогексиламина в 40 мл диметилформамида охлаждают до и к раствору добавляют ранее полученную хлористоводородную соль. После перемешивания при 0°С в течение нескольких 5 минут добавляют Г, 1 г (8,47 . моль)

оксибензотиазола и 1,7 г (8,47 моль), дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение 24 ч при . Полученный нерастворимый продукт Q отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 N водным раствором бикарбоната натрия, водой, холодной с 0,75 N лимонной кислотой и водой. Раствор сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют, как описано в предыдущих примерах, получают 4,1 г (69%) целевого соединения; -13,1° 0 (с 0,5, метанол).

Найдено,%: С 58,05, Н 6,62; N 11,73.

(700,86).

Вычислено,%: С 58,27; Н 6,90; 5 N 11,99.

Анализ аминокислоты:Найдено Туг 1,00; Ala 1,01; GEy 0,99; Phe 1,00; NHj 1,01.

Д. Ацетат L-тирозил-О-аланилглиQ цил-1-фенилаланил-Ы -метил-L-метиоНИЛ амида.

Смесь из 15 мл тиоанизола, 8,3 г (0,012 моль) продукта, описанного в части Г, охлаждают до 0°С и добавляют к ней 50 мл холодной трифторуксусной кислоты. Смесь перемешивают при 30 мин, затем разбавляют несколькими объемами эфира. Полученный осадок Ьушат, получают 8 г сырой соли трифторуксусной кислоты. Соль растворяют в достаточном объеме водного буфера, содержащего 1% пиридина и 0,05% уксусной кислоты, чтобы довести общий объем до 60 мл.Раствор переносят в колонку 5 (5x138 см) с диэтиламиноэтил-сефа