Иммунодиагностикум Советский патент 1982 года по МПК A61K39/00 

(5А) ИММУНОДИАГНОСТИКУМ

I

Изобретение относится к акарологии и может быть использовано для выявления иммунитета к отодектозу ( ушной чесотке, саркоптозу и нотоедрозу { зудневой чесотке плотоядных.

Известен клещевой антиген для диагностики и лечения аллергической астмы человека, а также диагностического тестирования и клинической десенсибилизации пациентов с клещевой аллергией 1 J.

В современной акарологии в СССР и за рубежом не разработаны специфические тесты для установления иммунитета у животных против отодектоза, саркрптоза и нотоедроза,. в то времй, как эти заболевания довольно широко распространены у плотоядных, и пораженность поголовья зверей в отдельных зверохозяйствах колеблется в пределах 10-25.

Цель изобретения - приготовление антигена для иммунодиагностики

При отодектозе, саркаптозе и нотоедрозе плотоядных.

Поставленная цель достигается применением антигена из клещей родов Otodectes, Sarcoptes, Notoedres в качестве иммунодиагностикума при зудневой и ушной чесотке плотоядных.

Антиген готовят следующим образом.

Собранных паразитов от больных животных заливают эфиром, после чего

to процеживают через сито, размер отверстий у которого 0,8 мм. Такой размер ячеи сита позволяет свободно проходить клещам вместе с жирорастворителем( эфиром). Все крупные частицы

15 волос,корочки,струпья и т.д,| ОС-. таются на поверхностисита. Такая операция позволяет очистить клещей от посторонних примесей. Клещей отделяют от обезжиривагацего растворителя

20 с помощью воронки Бунхнета со слабым всасывающим действием. Клещей промывают З- раза в небольшом количестве обезжиривающего растворителя, а затем .высушивают при 18-22°C. Высушенных клещей помещают в ступку с битым стеклом, тщательно растирают и доводят до порошкообразной массы. Затем порошок, полученный из паразитов, экстрагируют с помощью физраствора в объеме 1:50. Полученная суспензия тщательно перемешивается, фильтруетс через бумажные фильтры или марлю с ватой, и полученный фильтрат центриф гируется при 3000 об/мин в течение 30 мин. Верхний слой сливают и к нему добавляют раствор формалина (из расчета на 100 мл антигена 0,1 мл формалина). Антиген представляет собой коричневую прозрачную жидкость, свободную от взвешенных частиц. Серологически активен в реакциях диффузной преципи тации в агаровом геле (РДПА) и встре ного электроиммунофореза (ЭИФ) . Реакция РДПА представляет собой агрегацию (соединение) клещевого антигена с сывр-роткой крови в присутствии специфических антител и проявляется в образовании полосы преципитата в слое агара между лунками, содер жащими антиген и имунную сыворотку. Для постановки РДПА используют ис пытуемые сыворотки, не требующие спе циальной обработки. В отдельных случаях для постановки реакции могут быть взяты пробы цитратной крови. По своей простоте метод преципитации в агаре доступен для большинства лабораторий. Для постановки РДПА применяют, осветленный бактериальный агар в виде геля на стериальном физиологическом растворе. Раствор агара готовят и расплавляют на водяной бане. Растопленным агар заливают ровным слоем на предметные стекла или в чаш ки Петри толщиной 3- мм. После застывания агара в нем вырезают круглые лунки диаметром 3 мм и глубиной 3- мм так, чтобы объем каждой лунки составлял 0,02-0,03 см . Расстояние между соседними лунками должно быть З- мм. Вырезанный агар удаляют с помощью иглы от шприца или отсасывают с помощью пастеровской пипетки. Лунки целесообразно делать специальным штампом. Необходимо следить За тем, чтобы лунки не сообщались между собой, а в агаровом слое не было трещин. Порядок расположения лунок следующий: вокруг центральной 9 7 лунки, содержащей антиген, располагают на равном расстоянии (З- мм) шесть лунок для сыворотки. После заполнения стекла или чашки Петри с агаром помешают в термостат при + 37 С во влажной камере (в чашке Петри, .эксикаторе). Предварительное чтение реакции производят через -6 ч, а окончательное - через 18-20 ч. При чтении реакции преципитации в агаре стекло рассматривают на темном фоне, в проходящем свете, направленном под углом kS к объекту. Источником света может служить осветитель микроскопа. Реакция оценивается по степени четкости линии преципитата. Положительная РДПА характеризуется наличием тонкой, четкой линии преципитации между лунками с сывороткой и антигеном. Расплывчатые полосы в геле, диффузные или органические изменения его прозрачности, а также отсутствие их расценивается,как отрицательный результат РДПА. Положительный результат РДПА указывает на наличие антител в крови у животных к зудневой или ушной чесотке, т. е. на наличие иммунитета к этим заболеваниям. Отрицательность РДПА свидетельствует об отсутствии иммунитета. Для выявления животных, невосприимчивых к зудневой или ушной чесотке, можно также применять реакцию встречного электроиммунофореза. Этот метод более экспрессивен. Для постановки реакции встречного электроиммунофореза на чистоту обезжиренную стеклянную пластинку размером 8 X 15 см наливают 30 мл 1 -ного горячего раствора Дифко или аналогичного осветленного бактоагара, приготовленного на буферном растворе, разведенном пополам дистиллированной водой. После застывания в агаровом геле делают лунки при помощи пробойника, соединенного трубкой с вакуумнасосом. | Диаметр лунок должен быть 1,8 мм, глубина 2,5 мм, объем 0,02 см , расстояние между центрами соседних лунок каждого горизонтального ряда должно составлять 6 мм. Лунки следует располагать не ближе 1 см от края агаровой пластинки. Для более точного соблюдения дистанции между лунками используют за