Способ определения унитиола Советский патент 1982 года по МПК G01N21/64 

пнне-Ниая :i nni-.i.MOii ь интенгшвиости Ф.пуоросценини от концентрации пре 7;1рдта пежит в иитерване 0,07 30 мкг/мл. Чувствительность реакции описнваемой в и:-5обретеиин, сос;тавляет 0,7 МКГ/1ЛП, чго позволяет проводить определен но препа лта в лекарственных формах и в био11огических жидкостях. Занисимость интенсивности флуоресценции Фено унитиола от концентрации препарата представлена в табл. 1. таблица I

Определение проводилось, на отечественном электронном флуориметре марки ЭФ-ЗМЛ : фильтрами и РЬ-2. Спектры определялись на флуоресцентном спектрофотометре , Хит.ачи модель f PF-2A производств. Японии.

При изучении оптимадьных условий проведения реакции на унитио.п найОбъем ре.актива на 10 мл исследуемого раствора

1кап.

2кап.

3кап.

4кап.

i

5кап.

6кап.

7кап.

Оптима.пьио концентрацией раствора 1,2-нафтохинонсульфоната натрия, является 0,1%-ный свежеприготовленный раствор по 2 капли на обработку анализируемой пробы объемом 10 м.п с котшентрацией 20 мкр/мл унитиагга. Раствор реактива готовится на тетра-боратном Глферо с рН 7,5 .

дена оптимальная концентрация применяемого реактива - раствора 1,2-нафтахинон-4- сульфокислоты натриевой соли. Зависимость относительной интенсивности флуоресценции унитиола от концентрации нафтахинонсульфоната натрия представлена в табл.2.

Таблица 2

Концентрация раствора нафтохинонсульфоната, % 0,010,11

50

33

18

60 44

7

48

О О О О 40 33

33

Найдена зависимость интннпннности флуоресценции от ри еряды, создаваомо TeTpaf;opaTHbiri буферным раствором. Зависимоегь интенсивности флуоресценции ии-тиола от рН cfLejib ..-в табл.3.

рН среды I 3,51 5,0 6,5 | 7,01 7,5 8,0Т9,оТ.10

Относительная интенсивность флуоресценции,

О 3 20 60 70 100 57 40 23 Оптимальным рИ среды является водородный показатель, равный 7,5 для выявления максимальной флуорес ценции i Пример 1. Определение уни тиола в 5%-ном растворе. Методика определения: 1 мл 5% раствора из ампулы переносят в мерную колбу на 500 мл. Доводят дистиллированной водой до метки, перемешивают. К 1 полученного раствора прилить 9 мл тетраборатного буферного раствора с рН 7,5 и после перемешивания 2 капли 0,1%-ного раствора 1,2-наф хинон-4-сульфокислоты натриевой соли, переносят раствор в кювету и флуориметра и замеряют интенсивнос

Пример 2. Определение унитиола Б кровяной сыворотке экспериментальных животных 5 мл артериальной крови помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют 15 мин при 8000об/мин. К 1.мп надое ад очно жидкости приливают 9 мл тетраборатного буферного раствора с рН 7,5 и 2 капли 0,1%-ного свежеприготовленного раствора 1,2-нафтохинон-4-сульфокислоты натриевой соли

Таблица

55 на том же буферном растворе. Осторожно перемешивают, не допуская вспенивания раствора, и флуориметрируют одновременно ей стандартными образцами. Содержание унитиола в крови

0 устанавливают по калибровочному графику, для построения которого к 1,0 и 0,1 МП водного раствора унитиола с содержанием препарата 100 мкг/w приливают соответственно 9,0 и

/,5 9,9 мл тетраборатного буфера с pfl флуоресценции. Содержание унитиола устанавливают по стандартному образцу, для приготовления которого навеску порошка унитиола равную 0,05 г переносят в мерную крлбу на 500 мл, доводят водой до метки и перемеши-. вают до полного растворения, К 1 мл полученного раствора препарата приливают 9 мл тетраборатного буферного раствора ,5и2 капли 0,1%-ного раствора 1,2-нафтохинон-4-сульфокислоты натриевой соли, переносят раствор в кювету и флуориметрировать одновременно с опытными образцами. Результаты определения унитиола в 5%-ном растворе представлены в табл. 4. Таблица 4

1f5 и по 2 капли 0,1%-ного раствора нафтохинонсулъфоната натрия в том же буфере, растворы перемешивают и флуориметрируют вместе с исследуемыми растворами. По результатам флуо0,16

1,5

Внутри- . мышечно

Таким образом, предлагаемое техническое решение дало возможность повысить чувствительность и избирательность определения унитиола и может быть использовано с большой эффективностью.

Формула изобретения

Способ определения унитиола, эаключшощийся в воздействии на анализируемую пробу индикатора в щелочной среде, отли ч аюади и с я тем, что, с целью повышения чувствириметрии строят калиброночный график. Данные по определению унитиола в сыворотке крови экспериментальных животных представлены в табл,5.

Таблица5

5,2

52,0

тельности и избирательности, в качестве индикатора используют 1,2 -нафтохинон-4-сульфокислоты натриевую соль, а о содержании унитиола судят по интенсивности флуоресценции полученного при этом раствора. Источники информации,

принятые во внимание при экспертизе

2, Фармакопейная статья, ФС-42739-73 (прототип).