Способ определения рубомицина Советский патент 1992 года по МПК G01N21/64 

Изобретение относится к аиалити- , ческой химии, а именно к способам определения лекарственного препарата рубомицина и может быть применено для анализа этого соединения в различном биологическом материале, необходимом для клинических исследований дпя соединения рациональной схемы лечения индивидуального больного.

Цель изобретения - повьппение чувствительности, избирательности и экс- прессности анализа биологических объектов с концентрацией рубомицина 0,01-30 мкг/мл.

Способ осуществляют следующим образом.

Анализируемую пробу растворяют в диметилформамиде, к 1 мл полученного раствора добавляют 8 мл диметилформа- мида, 1 мл 1%-ного раствора ацетата магния в диметилформамиде, перемешивают, а затем измеряют интенсивность флуоресценции полученного при этом 5 раствора, спектр возбуждения флуоресценции которого лежит от 440 до 580 нм с максимумом 562 нм, а спектр излучения флуоресценции от 570 до 660 нм с максимумом 616 нм.

Прямолинейная зависимость между интенсивностью флуоресценции и кон- концентрацией рубомицина лежит от 0,01 до 30 мкг/мл (табл. 1).

Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации.ацетата магния в диметилформамиде приведена в табл, 2, Чувствительность способа 0,05 мкг/мл.

Пример 1. Качественное определение рубомицина.

К 0,1-1 мг препарата прибавляют 5 мл диметилформамида, 1-2 капли 1%-ного раствора ацетата магния в ди4;

00

Од

1 го

етш1формамиде, встряхивают и в ультафиолетовом свете со светофильтром ФС-3 наблюдают оранжевую флуоресценцию. Подобную флуоресценцию не , ают оливомицин, карминомицин, адриа- ицин, брунеомицин, дактиномицин, блеомицин (противоопухолевые антибиотики)

Пример 2, Количественное оп- ю ределение рубомицина в ампулах по 0,02 г. То.чную навеску (0,02 г) препарата помещают в мерную колбу емкостью 100 мл, прибавляют 70-80 мл диметилформамида, встряхивают до ра- fS створения и добавляют диметилформамид до метки. К 0,5 мл данного раствора, прибавляют 8,5 мп диметилформамида, 1 мл 1%-ного раствора ацетата магния, перемешивают и флуориметрируют отно- 20 сительно стандартного раствора рубомицина. Для чего к 1 мл стандартного pac i Bopa рубомицина с содержанием 100 мкг/мл прибавляют 8 мл диметил- форманида, 1 мл 1%-ного раствора 25 ацетата магния в диметилформамиде, перемешивают и флуориметрируют одновременно с испытуемыми растворами,

Результаты количественного определения рубомицина в лекарственной фор-зО ме представлены в табл. 3,

Пример 3, Количественное определение рубомицина в крови,

К 1-3 мл сыворотки крови прибав- ляют 2 МП дистиллированной воды, 2 мл буферного раствора с рН 8,4, 10 мл раствора хлороформа и метилового спирта (9:1), и встряхивают 2-3 минв Затем центрифугируют 2-3 мин при 40 3000 об/мин. Хлороформный слой переносят в вьшарительнуто чашку и выпаривают на водяной бане досуха, К сухому остатку прибавляют 9 мл диметилформамида, 1 мл 1%-ного раствора ацетата 45 магния в диметилформамиде, переносят в кюветку и флуориметрируют относительно стандартного раствора рубомицина. Для чего в ряд вносят по 0,1, 0,5, 1 мл раствора рубо- CQ мицина с содержанием Ю мкг/мл, прибавляют соответственно 8,9, 8,5, 8 мл динетилформамида, по 1 мп 1%- ного раствора ацетата магния в диметилформамиде, перемешивают и флуориметрируют одновременно с испытуемыми растворами. Результаты определения рубомицина в крови приведены в табл. 4.

Предлагаемый способ определения рубомицина в 5 раз чувствительнее известного, а высокая избирательная способность этого способа позволяет использовать его в фармацевтических и контрольно-аналитических лабораториях ЦЗЛ для качественного и количественного анализа в лекарственных формах, в воздухе рабочей зоны про- мьинпенных предприятий и при биофармацевтических и фарнатокинетических исследованиях при разработке опти- мап1ьных лекарственных форм, дозы и ритма назначения для оптимизации и ускорения лечения больных.

Подобной реакции не дают и не метают определению близкие по структуре соединения (оливомицин, карминомицин, адриамицин, брунеомицин, дактиномицин, блеомицин), а также одновременно назначаемые (аскорбиновая, глютаминовая, никотиновая, фо- лиевая, дегидрохолиевая кислоты; аминазин, анальгин, фенобарбитал, кор- диа1 1ин, димедрол, промедол, морфин, тиофосфамид, бензотеф, сарколизин, метотрексат, допан, новэмбихин, эм- бихин, циклофосфан, фосфамид, цитем- бена, дибунол, меркаптопурин, фтору- рацил, фторафур).

Предлагаемый способ более экспрес сен ПО сравнению с известным способом. На его осуществление требуется в А раза меньше времени, чем известным способом,, так анализ предлагаемы способом осуществляется за 20 мин, в то время как известным за 1,5 ч.

При анализе используются широкораспространенные реактивы, такие как ацетат магния, диметилформамид, хлороформ, что определяет экономическую целесообразность предложенного способа в практике аналитических и биохимических лабораторий при оценке эффективности и безопасности его назначения при лечении различных опухолей.

Формула изобретения

Способ определения рубомицина, включающий растворение анализируемой пробы, возбуждение и измерение интенсивности его флуоресценции, по величине которой проводится определение, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности, избир1ательности и экспрессности аналнза биологических объектов с концентрацией рубомицина 0,01-30 мкг/мл в присутствии противоопухолевых антибиотиков, анапиэ1фуемую пробу растворяют в диметилформамиде, обрабатывают 1-2%-ным раствором ацетата маг- ння, облучают,при длине волны возбуж- даюиего света 562 нм и регистрируют интенсивность флуоресценции при длине волны 616 нм.

Т а б л и ц а 1

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения рубомицина в лекарственных формах и биологических жидкостях. Цель - повышение избирательности, чувствительности и экспрессности. К анализируемому раствору в диметилформамиде прибавляют ацетат магния в диметип формамиде. Измеряют интенсивность флуоресценции раствора в ультрафиолетовой области. Спектр возбуждения флуоресценции лежит от 460 до 580 нм с максимумом 562 нм, спектр измерения флуоресценции лежит от 570 до 660 нм с максимумом 616 нм. 4 табл.

Таблица 3

,05 ,56 0,45 10,40 Относительная ошибка a-tO,40Z

14876Д2

.Та блица

Найдено, мкг/мл

10 20 30

87

7.4 2,9 0,7