Способ количественного определения 2,3-диоксибензойной кислоты Советский патент 1980 года по МПК G01N33/15 

t

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам Ьпределения 2,З-диоксибенэойной кисдоты в лекарственных формах и биологических жидкостях при фармацевтнчес- 5 ких, би6хиг «1ческих и токсикохимических исследованиях.

Известен способ количественного определения 2,3-диоксибензойной кислоты, заключающийся в титровании 10 анализируемой пробы едким натром в присутствии фенофлталеина .

Недостатками данного способа является низкая чувствительность и неспецифичность определения. 15

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемым результатам является способ количественного определения 2,3-диоксибензойной кислоты, заключающийся в 20 обработке пробы анализируемого вещества хлоридом железа в кислой среде с последующим, колометрированием полученного соединения 2.

Недостатки этого способа состоят 25 в невысокой чувствительности (100мг/мл) и неселективности.

Цель изобретения - повышение чувствительности и специфичности способа определения. -30

Поставленная цель достигается тем, что в способе количественного определения 2,3-диоксибензойной кис лоты в качестве неорганического реагента используют хлорид алюминия и обработку ведут в присутствии этилового спирта с последующим измерением флуоресценции полученного при этом раствора.

Способ осуществляется следующим образом.

Прим ер 1. 0,1г (точная навеока) мелкоизмельченных таблеток переносят в мерную колбу емкостью 100 МП, прибавляют 50-60 глл этилового спирта и энергично встряхивают 3-5 мин. Затем заливают спиртом до метки и тщательно перемешивают. К 1 1 мл полученного раствора прибавляют 1 мл 1%-ного раствора хлорида алюминия и 2 капли 2 н, раствора соляной . кислоты, замеривают интенсивность флуоресценции. Содержание 2,3-диоксибензойной кислоты рассчитывают по калибровочному графику, для чего отмеривают 0,1; 0,5; 1,о; 1,5; 2,о ма

стандартного раствора 2,3-диоксибензойной кислоты в этиловом спирте с .содержанием 100 мг/мл, добавляют по

1 мл 1%-ного раствора хлорида алюминия, по 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты и доводят объем всех растворов до 10 мл ЭТИЛОВЕЛМ спиртом. Флуориметрируют одновременно с раствором исследуекых образцов. По резульНавеска, г

Количество 2-3-диоксибензойной кислоты

татам этих измерений строят калибровочный график.

Результаты флуориметрического определения 2,3-диоксибензойной кислоты в таблетках по 0,5 г представлены в табл. 1.

Таблица

Метроологические характеристики

X 0.4997 сР + 0,0143 0,95 00102

а 0, 0,0102

Пример 2. Определение 2,3диоксибензойной кислоты в крови. К 0,1 мл крови добавляют 0,9 мл этилового спирта, хорошо перемешива ют и центрифугируют 3-4 мин. К 1 мл центифугата добавляют 1 мл 1 %-ного раствора хлорида алюминия, 8 мл этилового спирта, 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты, перемешивают. Флуориметрируют со стандартными образцами, которые готовят следующим образом: в ряд пробирок отмеривают 0,1; 0,5, 1,0, 1,5. и 2,0 мл стандарт ного раствора 2,3-диоксибензойной кислоты в этиловом спирте с содержанием 100 мкг/мл, добавляют по 1мл, 1 %-ного раствора хлорида алюминия, по 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты, доводят объем каждой пробирки до 10 мл, перемешивают и Флуориметрируют одновременно с иссшедуемыми растворами. Результаты флуориметрического опр деления 2,3-диоксибензойной кислоты представлены в табл. 2. Пр и м а р 3. Определение 2,3диоксибензойной кислоты в моче, 1 мл мочиразбавляют до 10 мл этиловым спиртом, хорошо перемешивают , центрифугируют 3-4 мин при 3000.об/мин. К 1 МП полученного раст вора прибавляют 1 мл 1%-ного .раствора хлорида алюминия, 8 мл этилового спирта и 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты, измеряют интенсиВ ность флуорисценции. Содержание 2,3-диоксибензойной кислоты рассчитывают по калибровочному графику, для чего в ряд пробирок отмеривают 0,1J 0,5; 1,0; 1,5, 2,0 мл стандартного раствора 2,3-диоксибензойной кислоты в этиловом спирте с содержанием 100 мкг/мл, добавляют по 1 мл 1 %-ного раствора хлорида алюминия, по 2 капли 2 н. раствора соляной кислоты, добавляют объем каждой пробирки до 10 мл, перемешивают, Флуориметрируют одновременно.с исследуемыми растворами. Результаты флуориметрического определения 2,3-диоксИбензойной кислоты в крови и моче при назначении по 0,5 г в виде таблеток представлены в табл. 2. Таблица 2

5789750

Продолжение табл. 2

При изучении оптимальных условий проведения флуоресцентной реакции на 2,3-диоксибензойную кислоту установлено, tiTO прямая зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации 2,3-диоксибензойной кислоты наблюдается при концентрации последней 0,01-50 мкг/мл.

Чувствительность реакции достаточно высокая, что позволяет проводить определения препарата в лекарственных формах и биологических жидкостях без отделения.сопутствующих компонентов. Определения проводят на электронном флуориметре ЭФ-ЗМА.

. Зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации хлорида алюминия представлена в табл. 4. .

Т а б ли ц а 4

Относительная интенсивность флуоресценции,%

0,001

61 65 0,005

Продолжение табл. 2

Продолжение табл, 4

Относительная интенсивное ть флуоресценции,%

70 80 80 80

Концентрация раствора хлористого алюминия, используемого для обработки анализируемой пробы, составляет 0,000001-0,1 r/NUi, оптимальная концентрация - 0,01 - 0,03 г/мл.

Интенсивность флуоресценции зависит также от концентрации соляной кислоты, количества соляной кислоты, времени и ультрафиолетового света. Данные зависимости представлены, соответственно, в табл. 5,6,7 и 8.

Таблица

Таблица 9

Формула изобретения

Способ количественного определеления 2,3-диоксибензойной кислоты путем обработки пробы анализируемого вещества неорганическим реагентом в кислой среде, отличающийс я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве неорганического реагента используют хлорид алюминия, обработку ведут в

присутствии этилового спирта с последуквдим измерением флуоресценции полученного раствора.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1,Временная фармакопейная стать 427-469-75.

2.Коренман И.М. Фотометрический анализ. М. , 1975, с. 264-276 (проЕотип) .