Способ приготовления носителя для диск-электрофореза гуминовых кислот почв Советский патент 1982 года по МПК G01N33/24 

количестве 4,65 мл до высоты 18 см, затем наслаивали сверху концентриру щий тюлиакриламидный гель с диаметр пор 50 А в количестве 0,4 мл на высоту 1,0 см; на гель помещали препа рат гуминовой кислоты. Трубки поме, щали в электрофоретическую камеру. Модель - 69. (Реанал. Венгрия) и проводили диск-электрофорез при ста билизации по току 2 мА на трубку в течение 30 мин и 5 мА на трубку в т чение 1ч. В результате было получен k фракции гуминовых кислот (схема 1 Пример2. В электрофоретиче кую трубку длиной 20 см и диаметром 0,6 см помещали полиакриламидный гель с диаметром пор 12А в количест ве 1,45 мл до высоты 5,4 см, сверху наслаивали полиакриламидный гель с диаметром пор ТбА в количестве 1,45 мл на ту же высоту и аналогично гель с диаметром пор 28 А. Соотношение лолиакриламидных гелей }:t;1 является необходимым и достаточным условием для получения при диск-электрофорезе наилучшей разрешающей способности, которая оценивается по числу получаемых эле ктрофоретических фракций. Изменени соотношения гелей допустимо в пределах не более 5%, т.е. величины экспериментальной ошибки, включающей ошибку набора растворов пипеткой ошибку внесения растворов исходных веществ в электрофоретические трубки при полимеризации гелей и др. Изменение соотношения гелей более ±5% приведет диск-электрофорез в полиакриламидяом геле к ухудшению его разрешающей способности: размыванию зоны электрофоретических фракций, а также слиянию близко лежащих |ПО электррфоретической подвижности фракций в одну сплошную форетическую зону, уменьшению общего числа полумаемых фракций. Затем проводили наполнение декстрамовым гелем с интервалом фракционирования по молекулярной массе 4000-150000 Sephadex G-100 в количестве 0,35 мл на высоту 0,95 см, сверху помещали препарат гуминовой кислоты, условия проведения дискэлектрофореза аналогичны приведенным в примере 1. В результате получено 8 фракций гуминовых кислот. Примерз. В электрофоретическую трубку помещали полиакриламид ный гель с диаметром пор 12А в количестве 1,б5 мл до высоты 6,2 см, сверху наслаивали полиакриламидный гель с диаметром пор 1бА в количестве 1,б5 мл на высоту 6,2 см и гель с диаметром пор 28А на ту же высоту и в тех же количествах. Затем проводили наполнение трубки декстрановым гелем с интервалом фракционирования по молекулярной массе 4000-150000 на высоту 1, 05 см в количестве 0,45мл, сверху помещали препарат гуминовой кислоты. Условия проведения дискэлектрофореза аналогичны приведенным в примере 1. В результате получено 9 фракций гуминовых кислот. Как видно при приготовлении носителя для фореза согласно известному способу было выделено 4 фракции гуминовой кислоты (а, в, е, ж) по их электрофоретической подвижности в геле. При этом фракиця не диффу;зна и не концентрируется в виде узкой полосы, что свидетельствует о низком качестве разделения. Предлагаемый способ позволяет выделить 8-9 фракций (а, б, в, г, д, е, ж, з, и) при этом вместо диффузной, размытой зоны е выделяется ряд четких фракций (г-е), а полоса вещества (ж) (по известному) разделяется на 2-3 фракции (ж, 3, и) . Пример4. В электрофоретическую трубку длиной 20 см помещали полиакриламидный гель с диаметром пор 12А до высоты 6 см, в количестве 1,35 мл сверху наслаивали полиакриламидный гель с диаметром пор 1бА,на высоту 6 см и с диаметром пор .28 А на ту же высоту в количестве 1,55 мл. Затем проводили наполнение декстрановым гелем с интервалом фракционирования по молекулярной массе 4000-150000 Sephadex - G-100 в количестве 0,4 мл на высоту 1 см, сверху помещали препарат гуминовой кислоты, условия проведения диск-электрофореза аналогичны приведенным в примере 1. В результате получено 9 .фракций гуминовых кислот (схема 2). Таким образом, предлагаемый способ позволяет увеличить разрешающую способность при разделении гуминовых кислот почв методом диск-электрофореза более, чем в 2 раза. Формула изобретения Способ приготовления носителя для диск-электрофореза гуминовых кислот почв, включающий заполнение электрофоретической трубки концентрирующим гелен и разделяющим полиакриламидным гелем, отличающийся тем, что, с целью повышения разрешаю щей способности фракционирования гуминовых кислот, в качестве концентрирующего геля используют декстрановый гель с интервалом фракционирования по молекудярной массе 000- . 150000 в количестве 0,35-0, мг, а в качестве разделяющего геля - nojwакриламидные гели с диаметром пор 1«86 12, 16 и 28Д в соотношении Г:1:1, в количествах, равных для каждого геля 1,«Б-1,65 мл. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Кононова А.Н. Органическое вещество почв. М., Наука, 1963, с. 120. 2, Степанов В,В. и Пахомова А.Н. Электрофорез гумусовых веществ в поли акрил амид ном геле. - ПочвоведбIf 12, 1969, с. 67 (прототип) .

а 8

т

3

и в

t

1